2025年辽宁省pcr上岗证考试题及答案

2025年辽宁省pcr上岗证考试题及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.临床PCR实验室中，用于保存扩增后产物的区域属于：A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区答案：D2.实时荧光定量PCR中，Ct值的定义是：A.荧光信号达到设定阈值时的循环数B.扩增产物达到平台期的循环数C.引物与模板结合的最适温度D.探针水解产生荧光的初始循环数答案：A3.下列哪种物质可有效降解DNA气溶胶污染？A.75%乙醇B.10%次氯酸钠C.无水甲醇D.超纯水答案：B4.咽拭子样本采集后，若不能立即检测，应保存在：A.-20℃冰箱B.4℃冰箱（24小时内）C.室温（<4小时）D.37℃孵箱答案：B5.TaqDNA聚合酶的最适反应温度是：A.55℃B.72℃C.95℃D.60℃答案：B6.核酸提取过程中，磁珠法分离核酸的原理是：A.核酸与磁珠表面硅羟基在高盐低pH下结合，低盐高pH下解离B.核酸与磁珠表面氨基在低盐高pH下结合，高盐低pH下解离C.磁珠通过电荷吸附蛋白质，间接纯化核酸D.磁珠特异性识别目标核酸序列答案：A7.PCR实验室空气流向应严格遵循：A.产物分析区→扩增区→样本处理区→试剂准备区B.试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区C.样本处理区→试剂准备区→扩增区→产物分析区D.扩增区→产物分析区→样本处理区→试剂准备区答案：B8.进行PCR检测时，若阴性对照出现扩增曲线，最可能的原因是：A.引物浓度过低B.模板量过高C.扩增产物污染D.探针标记错误答案：C9.辽宁省临床基因扩增检验实验室备案要求中，技术人员应具备的最低学历是：A.中专B.大专C.本科D.硕士答案：B10.下列哪项不是PCR反应体系的基本成分？A.dNTPB.引物C.模板D.限制性内切酶答案：D11.荧光定量PCR中，SYBRGreenⅠ染料的作用是：A.特异性结合双链DNAB.特异性结合单链DNAC.标记引物5'端D.水解后释放荧光答案：A12.实验室高压蒸汽灭菌的标准条件是：A.100℃，30分钟B.121℃，15-20分钟C.134℃，3分钟D.65℃，60分钟答案：B13.核酸提取过程中，加入蛋白酶K的主要目的是：A.裂解细胞膜B.降解RNAC.消化蛋白质，释放核酸D.沉淀核酸答案：C14.关于PCR扩增程序的设置，变性温度通常为：A.55-65℃B.72℃C.94-95℃D.37℃答案：C15.辽宁省PCR实验室质量控制要求中，室内质控样本的检测频率为：A.每批次检测B.每周一次C.每月一次D.每季度一次答案：A16.下列哪种情况会导致PCR结果假阴性？A.样本中存在PCR抑制物B.扩增产物污染C.引物浓度过高D.退火温度过低答案：A17.核酸定量时，OD260/OD280比值为1.8，说明：A.核酸纯度高（DNA）B.核酸被蛋白质污染C.核酸被RNA污染D.核酸被盐离子污染答案：A18.PCR实验室分区中，必须设置为负压的区域是：A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区答案：B19.进行核酸提取时，若使用离心柱法，离心的主要目的是：A.促进核酸与柱膜结合B.去除蛋白质C.洗脱核酸D.裂解细胞答案：A20.辽宁省临床基因扩增检验实验室生物安全培训要求中，新上岗人员需完成的培训学时不少于：A.8学时B.16学时C.24学时D.32学时答案：B二、多项选择题（每题3分，共30分）1.PCR实验室污染控制的主要措施包括：A.严格分区操作，各区物品专用B.使用UNG酶（尿嘧啶糖基化酶）降解含dUTP的扩增产物C.定期用紫外线照射实验室及设备D.扩增后产物直接丢弃，无需特殊处理答案：ABC2.核酸提取质量的评价指标包括：A.浓度（OD260）B.纯度（OD260/OD280、OD260/OD230）C.完整性（电泳条带）D.颜色（是否澄清）答案：ABC3.实时荧光定量PCR的定量方法包括：A.绝对定量（标准曲线法）B.相对定量（ΔΔCt法）C.终点法定量D.内参基因校正法答案：ABD4.样本采集过程中需注意的生物安全事项有：A.穿戴防护服、手套、口罩等防护装备B.样本采集后立即密封，避免泄露C.采集人员与被采集者保持1米以上距离D.使用过的采样工具直接放入医疗废物桶答案：ABC5.下列属于PCR仪日常维护内容的是：A.定期校准温度准确性B.清洁反应槽及加热模块C.更换损坏的热盖D.每年进行一次性能验证答案：ABCD6.实验室医疗废物分类包括：A.感染性废物（如样本管、拭子）B.病理性废物（如组织样本）C.化学性废物（如废弃试剂）D.损伤性废物（如移液器吸头）答案：ACD7.影响PCR扩增效率的因素有：A.引物设计的特异性和退火温度B.dNTP浓度过高或过低C.模板质量（降解或抑制物存在）D.Taq酶的活性及用量答案：ABCD8.辽宁省PCR实验室备案需提交的材料包括：A.实验室人员名单及资质证明（如上岗证、学历证书）B.实验室平面图（标注分区及流向）C.质量管理制度（如SOP文件、质控记录）D.近3年室间质评报告答案：ABC9.核酸提取过程中，可能导致产量降低的原因有：A.样本量不足或过度裂解B.离心时间或转速不够C.洗涤步骤省略或不充分D.洗脱缓冲液体积过大答案：ABC10.荧光定量PCR结果判读时，需关注的参数包括：A.Ct值（是否在有效范围内）B.扩增曲线的形态（是否呈S型）C.阴性对照是否无扩增D.阳性对照Ct值是否符合预期答案：ABCD三、判断题（每题1分，共10分）1.PCR实验室可以不设置独立的产物分析区，与扩增区合并使用。（）答案：×2.核酸提取时，75%乙醇洗涤的目的是去除盐离子和杂质，提高纯度。（）答案：√3.为提高检测效率，可将不同检测项目的PCR反应体系在同一区域配制。（）答案：×4.高压蒸汽灭菌时，待灭菌物品需松散放置，确保蒸汽穿透。（）答案：√5.荧光定量PCR中，Ct值越小，说明初始模板量越少。（）答案：×6.实验室工作人员可佩戴普通口罩进行样本处理。（）答案：×7.核酸提取仪使用后，需用75%乙醇擦拭接触样本的部位，避免交叉污染。（）答案：√8.PCR扩增程序中，退火温度过高可能导致引物无法与模板结合，出现假阴性。（）答案：√9.室间质评结果不合格时，实验室可自行调整检测方法，无需上报。（）答案：×10.医疗废物应使用黄色专用包装袋，达到3/4满时密封，并粘贴标识。（）答案：√四、简答题（每题5分，共20分）1.简述PCR实验室“四区一室”的具体分区及功能。答案：PCR实验室通常分为四个独立工作区域：①试剂准备区：用于贮存、配制和分装PCR试剂（如引物、dNTP、酶等），需避免核酸污染；②样本处理区：用于样本的接收、登记、前处理（如裂解、核酸提取），需严格生物安全防护；③扩增区：用于PCR反应体系的组装及扩增反应，需避免来自样本处理区的核酸污染；④产物分析区：用于扩增产物的检测（如电泳、荧光读取），是污染风险最高的区域。此外需设置缓冲区（如更衣室、传递窗），用于不同区域间的过渡，防止交叉污染。2.列举5项PCR检测中常见的质量控制措施。答案：①室内质控：每批次检测需设置阴性对照（无模板）、阳性对照（已知阳性样本）、空白对照（无核酸提取步骤的反应体系）；②仪器校准：定期校准PCR仪的温度准确性、荧光检测模块灵敏度；③试剂验收：新批次试剂使用前需进行性能验证（如检出限、特异性）；④人员培训：操作人员需通过PCR上岗证考核，定期复训；⑤环境监测：定期检测实验室各区域的空气、表面核酸污染情况（如通过阴性样本模拟检测）。3.简述核酸提取过程中“磁珠法”的操作步骤及注意事项。答案：操作步骤：①样本裂解：加入裂解液（含蛋白酶K）破坏细胞结构，释放核酸；②结合：加入磁珠，在高盐低pH条件下，核酸与磁珠表面硅羟基结合；③洗涤：磁吸分离磁珠，用75%乙醇洗涤去除蛋白质、盐离子等杂质；④洗脱：加入低盐高pH的洗脱缓冲液（如TE缓冲液），使核酸从磁珠上解离；⑤收集：磁吸分离磁珠，转移上清液（含核酸）至新管。注意事项：①裂解时间需充分，确保核酸完全释放；②洗涤时避免磁珠丢失；③洗脱缓冲液体积需适当（体积过小可能影响产量，过大可能稀释核酸）；④全程避免剧烈震荡，防止磁珠破碎影响结合效率。4.分析PCR检测中出现“假阳性”结果的可能原因及解决措施。答案：可能原因：①扩增产物污染（气溶胶污染）：PCR产物扩散到实验室环境中，污染后续检测；②交叉污染：样本间加样时操作不当（如吸头未更换）；③试剂污染：引物、dNTP等试剂被核酸模板污染；④实验室分区不严格：物品混用（如同一移液器用于产物分析区和试剂准备区）。解决措施：①加强实验室分区管理，各区物品专用；②使用带滤芯的吸头，避免气溶胶吸入移液器；③定期用10%次氯酸钠或紫外线处理实验室环境及设备；④在反应体系中加入UNG酶（配合dUTP代替dTTP），降解含dUTP的扩增产物；⑤检测前对试剂进行空白对照检测，确认无污染。五、案例分析题（每题10分，共20分）案例1：某实验室进行新冠病毒核酸检测时，发现同一批次10份临床样本中，8份Ct值在25-30之间（阳性），但阴性对照（无模板）Ct值为32（弱阳性），阳性对照Ct值为18（正常）。问题：（1）分析该结果可能的原因；（2）提出后续处理措施。答案：（1）可能原因：①扩增产物气溶胶污染：实验室环境中存在新冠病毒扩增产物，污染了阴性对照管；②加样过程交叉污染：加样时吸头未更换或操作不当，导致样本核酸污染阴性对照；③试剂污染：配制反应体系时，某一试剂（如引物、酶）被核酸模板污染；④实验室分区不严：产物分析区的物品（如移液器）被带入试剂准备区或样本处理区。（2）处理措施：①立即停止当前批次检测，标记所有样本为“结果待复核”；②对实验室环境（如台面、移液器、生物安全柜）进行核酸污染清除（用10%次氯酸钠擦拭，紫外线照射30分钟以上）；③更换新批次试剂，重新配制反应体系（包括阴性对照、阳性对照），对原样本进行复检；④检查实验室分区操作记录，确认是否存在物品混用情况，若有则加强人员培训；⑤记录本次事件，分析根本原因，制定预防措施（如增加环境监测频率、使用UNG酶防污染体系）。案例2：某实验室使用荧光定量PCR检测HBV-DNA，某患者样本的扩增曲线呈“平台期前下降”（非典型S型），Ct值为38（接近检测限），而阴性对照无扩增，阳性对照正常。问题：（1）分析该曲线异常的可能原因；（2）如何验证结果的可靠性？答案：（1）可能原因：①模板量极低：患者样本中病毒载量接近检测下限，扩增效率降低；②核酸提取质量差：样本中存在PCR抑制物（如血红蛋白、肝素），抑制Taq酶活性；③扩增程序设置不当：