2025年临床微生物检验标本保存试卷及答案

2025年临床微生物检验标本保存试卷及答案一、单项选择题（每题1分，共30分。每题只有一个最佳答案，请将正确选项字母涂黑）1.血培养标本在自动化血培养仪报警阳性后，若不能立即转种，最佳室温保存时限为A.30分钟 B.1小时 C.2小时 D.4小时 E.6小时答案：C2.疑似流感患者鼻咽拭子采集后，若24小时内不能送检，应首选的保存液为A.无菌生理盐水 B.Amies运送培养基 C.病毒运输液（VTM）含明胶 D.0.5%葡萄糖肉汤 E.磷酸盐缓冲液（PBS）答案：C3.厌氧菌培养标本在采集后若需转运，推荐使用的商品化转运系统为A.CaryBlair管 B.PortACul管 C.Stuart管 D.Amies管 E.ReganLowe管答案：B4.用于结核分枝杆菌核酸检测的痰标本，在4℃保存不得超过A.24小时 B.48小时 C.72小时 D.5天 E.7天答案：C5.尿液标本做定量培养，若不能在采集后2小时内处理，应A.室温放置 B.4℃冷藏但≤24小时 C.−20℃冷冻 D.加入硼酸甲酸钠防腐剂并室温保存 E.加入硫代硫酸钠后4℃保存答案：B6.怀疑侵袭性念珠菌血症，血清标本进行(1,3)βD葡聚糖检测，保存要求为A.−20℃可长期保存 B.−70℃可长期保存 C.室温2小时内离心，血浆−20℃≤72小时 D.加热56℃30分钟后4℃保存 E.无需特殊处理答案：C7.用于宏基因组二代测序（mNGS）的脑脊液标本，采集后若需快递运输，干冰运输温度应维持A.−20℃ B.−40℃ C.−60℃ D.−78℃以下 E.−140℃答案：D8.采集伤口深部脓液做普通培养+厌氧培养，若30分钟内无法送检，应A.室温保存 B.4℃冷藏 C.接种于PortACul瓶后室温保存 D.注入含硫代乙醇酸盐肉汤后35℃孵育 E.注入含肝素钠的真空采血管答案：C9.用于淋病奈瑟菌核酸扩增试验（NAAT）的女性宫颈拭子，在Amies运送基中可稳定保存于A.4℃≤24小时 B.室温≤12小时 C.室温≤24小时 D.30℃≤48小时 E.35℃≤6小时答案：C10.粪便标本进行艰难梭菌毒素检测，若不能立即检测，加入无水乙醇至终浓度70%后室温可保存A.12小时 B.24小时 C.3天 D.7天 E.30天答案：E11.用于真菌血培养的树脂瓶，在仪器未报警阳性情况下，最长孵育时间为A.3天 B.5天 C.7天 D.10天 E.14天答案：C12.采集支气管肺泡灌洗液（BALF）做细菌培养，若需冷藏，应置于A.−20℃ B.−70℃ C.4℃且≤24小时 D.室温 E.35℃答案：C13.用于HPV分型检测的宫颈脱落细胞标本，采集后可在PreservCyt液中室温保存最多A.1周 B.2周 C.3周 D.4周 E.6周答案：D14.血培养瓶在转运途中若暴露于>30℃环境超过4小时，最可能出现A.假阴性 B.假阳性 C.污染率升高 D.厌氧菌生长受抑 E.真菌生长加速答案：A15.采集关节液做晶体分析及培养，若需保存，应A.室温立即送检 B.4℃≤24小时 C.−20℃冷冻 D.加入肝素锂后4℃≤24小时 E.加入EDTA后室温保存答案：D16.用于麻疹病毒分离的咽拭子，在VTM中−70℃可保存A.1周 B.1个月 C.3个月 D.6个月 E.长期答案：E17.怀疑布鲁菌病，血清做虎红平板凝集试验，血清在4℃可保存A.6小时 B.24小时 C.3天 D.7天 E.14天答案：D18.采集角膜刮片做真菌培养，若延迟送检，应A.室温干燥 B.4℃生理盐水保存 C.接种于萨布罗培养基斜面室温保存 D.−20℃冷冻 E.加入50%甘油后−70℃答案：C19.用于军团菌尿抗原检测的尿液，加入0.1%叠氮钠后2–8℃可保存A.24小时 B.48小时 C.3天 D.5天 E.7天答案：E20.采集阴道分泌物做滴虫湿片检查，若延迟镜检，应A.室温≤10分钟 B.4℃≤30分钟 C.35℃≤2小时 D.加入10%KOH后室温≤1小时 E.加入生理盐水后−20℃答案：A21.用于结核感染T细胞斑点试验（TSPOT.TB）的外周血标本，采集后室温放置时间不得超过A.2小时 B.4小时 C.6小时 D.8小时 E.12小时答案：C22.采集组织标本做厌氧培养，若需转运>2小时，推荐A.无菌干燥容器 B.无菌生理盐水浸湿后4℃ C.厌氧转运袋含无氧指示剂 D.加入福尔马林 E.加入70%乙醇答案：C23.用于诺如病毒RTPCR的粪便标本，−20℃可保存A.1天 B.3天 C.7天 D.30天 E.长期答案：D24.血培养瓶在孵育第5天转种阴性，需继续孵育至7天的指征是A.怀疑隐球菌 B.怀疑HACEK群 C.怀疑布鲁菌 D.怀疑金黄色葡萄球菌 E.怀疑大肠埃希菌答案：B25.采集胸水做ADA检测，若延迟检测，应A.室温 B.4℃≤24小时 C.−20℃冷冻 D.加入肝素锂后−70℃ E.加入酸柠檬酸葡萄糖后室温答案：B26.用于曲霉半乳甘露聚糖（GM）检测的血清，加热灭活处理条件为A.56℃10分钟 B.56℃30分钟 C.100℃5分钟 D.37℃1小时 E.无需加热答案：B27.采集皮肤癣菌病皮损边缘鳞屑，若需邮寄，最佳保存方式为A.无菌干燥纸袋室温 B.4℃生理盐水 C.−20℃冷冻 D.加入70%乙醇 E.加入福尔马林答案：A28.用于梅毒螺旋体暗视野检查的病灶渗出液，采集后A.室温≤5分钟镜检 B.4℃≤30分钟 C.加入生理盐水后≤1小时 D.−70℃冷冻 E.加入VTM后室温答案：A29.采集咽拭子做A群链球菌抗原快速检测，若延迟检测，可置于A.干燥试管室温≤2小时 B.Amies管室温≤24小时 C.4℃生理盐水≤48小时 D.−20℃冷冻 E.加入PBS后35℃答案：B30.用于宏基因组测序的血浆标本，提取核酸后文库构建前，DNA应保存于A.4℃ B.−20℃ C.−80℃ D.室温 E.液氮答案：C二、共用题干单选题（每题2分，共20分。以下提供2个案例，每个案例下设5题）【案例1】患者男，59岁，发热3周，最高39.5℃，伴寒战。采集双侧需氧/厌氧血培养各2瓶，4小时后仪器报警阳性，涂片见革兰阴性杆菌。实验室距离医院90km，需快递转运进行质谱鉴定。31.阳性血培养瓶在转运前应采取的首要处理是A.室温放置 B.4℃冷藏 C.转种后弃瓶 D.抽取培养液注入血清分离胶管 E.抽取培养液注入含冷冻保护剂的无菌管后−20℃冷冻答案：E32.若采用快递干冰运输，培养液样本管应使用A.普通EP管 B.螺口冻存管含30%甘油 C.真空采血试管 D.含SPS的真空管 E.含EDTA的真空管答案：B33.转运途中若温度升至−50℃并持续2小时，对后续质谱结果的影响是A.无影响 B.峰强度降低但鉴定正确 C.无法获得图谱 D.假阳性 E.污染率升高答案：B34.实验室收到样本后，优先采用的鉴定方法是A.生化管 B.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOFMS）直接涂靶 C.16SrRNA测序 D.荧光PCR E.革兰染色答案：B35.若质谱失败，应进行的补救措施为A.弃样本 B.重新采集血培养 C.次代培养后重做质谱 D.直接报未知菌 E.做药敏试验答案：C【案例2】新生儿，女，7天，出现抽搐，脑脊液（CSF）常规WBC280×10⁶/L，蛋白1.8g/L，糖1.1mmol/L。留取CSF2mL分别做培养、mNGS、病毒PCR。36.CSF做mNGS，采集后若延迟4小时送检，最佳保存方式为A.室温 B.4℃ C.−20℃ D.−80℃或干冰 E.35℃答案：D37.若mNGS提取核酸后需邮寄至外地实验室，核酸应置于A.常温运输 B.4℃ C.−20℃干冰 D.核酸保护剂室温 E.75%乙醇答案：C38.CSF做单纯疱疹病毒（HSV）PCR，若需保存3天，应A.−20℃ B.−70℃ C.4℃ D.室温 E.加入甘油后−20℃答案：B39.若CSF量不足，优先保证的检测项目是A.培养 B.墨汁染色 C.mNGS D.病毒PCR E.细胞学答案：A40.培养结果为阴性，mNGS检出HSV1，序列覆盖度98%，下一步应A.报污染 B.重复mNGS C.做HSV1PCR验证 D.做药敏 E.无需处理答案：C三、共用备选答案单选题（每题1分，共10分。每组试题共用五个备选答案，每题一个最佳）备选答案：A.−70℃长期 B.4℃≤24小时 C.室温≤2小时 D.−20℃≤7天 E.加入70%乙醇室温≤30天41.粪便艰难梭菌毒素检测延迟送检答案：E42.麻疹病毒咽拭子分离培养答案：A43.关节液晶体分析答案：B44.鼻咽拭子流感PCR答案：C45.尿液军团菌抗原检测答案：D四、多项选择题（每题2分，共20分。每题至少有两个正确答案，多选少选均不得分）46.以下哪些标本在4℃保存可稳定≥24小时A.尿液定量培养 B.胸水ADA C.血清GM试验 D.粪便诺如RNA E.脑脊液培养答案：B、C47.关于血培养保存，正确的是A.自动化仪报警阳性后≤2小时转种 B.阴性瓶可室温放置7天 C.阳性瓶涂片后4℃≤24小时 D.树脂瓶可吸附抗生素 E.儿童需专用儿童瓶答案：A、D、E48.用于mNGS的标本，需−80℃保存的有A.脑脊液 B.血浆 C.肺泡灌洗液 D.新鲜组织 E.粪便答案：A、B、C、D49.以下哪些病毒标本可−70℃长期保存A.HSV拭子 B.流感鼻咽拭子 C.麻疹咽拭子 D.诺如粪便 E.HPV宫颈拭子答案：A、C、D50.关于厌氧菌标本保存，正确的是A.不可用棉拭子采集 B.可用PortACul系统 C.可4℃≤24小时 D.可−20℃长期 E.需避免空气暴露答案：A、B、C、E51.以下哪些检测需避免反复冻融A.血清βD葡聚糖 B.血浆mNGS C.尿液抗原 D.脑脊液HSVDNA E.粪便毒素答案：A、B、D52.关于结核标本保存，正确的是A.痰4℃≤72小时 B.可−20℃长期 C.避免>48小时室温 D.运输需三层包装 E.需生物安全B级答案：A、C、D、E53.以下哪些防腐剂可用于尿液保存A.硼酸 B.叠氮钠 C.硫代硫酸钠 D.EDTA E.甲酸钠答案：A、B、E54.关于组织标本真菌培养，正确的是A.可无菌干燥容器室温≤2小时 B.可4℃生理盐水≤24小时 C.可−20℃长期 D.可加50%甘油−70℃ E.福尔马林固定后仍可培养答案：A、B、D55.以下哪些标本采集后需立即送检A.梅毒暗视野病灶液 B.滴虫湿片分泌物 C.军团菌尿抗原 D.血培养 E.角膜刮片真菌培养答案：A、B、D五、填空题（每空1分，共20分）56.血培养瓶在自动化仪孵育第________天转种阴性，但怀疑HACEK群感染时，需延长至________天。答案：5、757.用于结核PCR的痰标本，如延迟检测，应加入________试剂，于−20℃可保存________天。答案：DNA保护剂、3058.病毒运输液（VTM）常规含________蛋白、________抗生素及缓冲液。答案：牛血清、庆大霉素59.厌氧菌PortACul瓶内含________指示剂，当呈________色表示有氧渗入。答案：刃天青、粉红60.血清βD葡聚糖检测需使用________采血管，离心后血浆于−20℃≤________小时。答案：无热原肝素锂、7261.粪便艰难梭菌毒素检测加入无水乙醇至终浓度________%，可室温保存________天。答案：70、3062.用于mNGS的组织标本，提取DNA后，文库浓度应≥________ng/μL，片段主峰________bp。答案：2、300–40063.尿液军团菌抗原检测加入________%叠氮钠，2–8℃可保存________天。答案：0.1、764.角膜刮片做真菌培养，若延迟送检，可接种于________斜面，________℃室温保存。答案：萨布罗、2565.血培养阳性涂片为酵母样真菌，应转种于________培养基，________℃孵育。答案：沙保弱、35六、名词解释（每题3分，共15分）66.病毒运输液（VTM）答案：专为维持病毒活性设计的等渗缓冲液，含蛋白、抗生素及pH指示剂，可在2–8℃短期、−70℃长期保存病毒标本。67.PortACul系统答案：商品化厌氧转运系统，含还原性培养基及氧指示剂，可保持厌氧环境≤72小时，提高厌氧菌分离率。68.无热原试管答案：经250℃2小时干烤或特殊工艺去除内毒素的试管，用于真菌βD葡聚糖等内毒素敏感试验，避免假阳性。69.核酸保护剂答案：含EDTA、Tris、甘油及RNase抑制剂的缓冲液，可稳定RNA/DNA，防止−20℃冰晶损伤及酶解。70.冷冻保护剂答案：如30%甘油或DMSO，可降低细胞在−70℃以下形成冰晶所致的膜破裂，用于菌种长期保藏。七、简答题（每题5分，共25分）71.简述血培养阳性后延迟转种对厌氧菌检出的影响及补救措施。答案：延迟>2小时氧气暴露导致厌氧菌活性下降甚至死亡，降低检出率；应立即抽取培养液加入含30%甘油冻存管−20℃速冻，转运至参考实验室后用厌氧瓶增菌或直接涂布厌氧血琼脂，可部分补救。72.列举并解释三种常用于尿液保存的化学防腐剂及其机制。答案：①硼酸：抑制细菌脲酶，稳定菌落计数；②叠氮钠：抑制氧化酶，阻断糖酵解，保持抗原稳定；③甲酸钠：降低pH，抑制革兰阴性杆菌繁殖，适用于核酸扩增。73.说明脑脊液mNGS标本在采集、运输、保存环节的关键质控点。答案：采集：无菌腰穿，弃去第一管；运输：2小时内−80℃或干冰；保存：分装200μL/管，避免反复冻融；核酸提取：使用无RNase耗材；文库构建：Qubit定量，Agilent2100峰型监控，阴性空白对照需无序列。74.比较−20℃与−70℃保存病毒核酸的优缺点。答案：−20℃：方便，RNA≤7天、DNA≤30天，但反复冻融易降解；−70℃：可长期>1年，降解少，需干冰运输，成本高，对设备依赖大。75.阐述粪便标本进行艰难梭菌毒素检测时，不同保存条件对ELISA结果的影响。答案：室温>2小时毒素活性下降30%，4℃24小时下降10%；加入70%乙醇室温30天活性保持>90%，−20℃冻融3次下降50%；故推荐乙醇固定或−70℃单份分装。八、案例分析题（每题10分，共30分）【案例3】患者男，45岁，肝移植术后第10天发热，血培养2瓶阳性，涂片见酵母样孢子。实验室拟进行菌种鉴定及药敏，但需快递至外地参考实验室。76.写出标本保存、运输及安全包装的详细流程。答案：①生物安全柜内抽取培养液2mL×2管，加入等量含30%甘油冻存管；②贴标签，−80℃速冻2小时；③使用UN3373三层包装：主容器→吸水材料→二级容器→冰袋→外层纸箱；④随附清单注明B类感染性物质；⑤快递干冰−78℃，24小时内送达；⑥接收方−80℃保存，立即接种沙保弱及CHROMagar，35℃48小时观察。【案例4】某医院拟开展结核分枝杆菌rpoB基因耐药突变检测，收集痰标本。77.设计一份包含采集、保存、运输、核酸提取、结果判读的质量控制方案。答案：采集：晨痰≥3mL，无菌杯；保存：4℃≤72小时，−20℃≤30天，长期−70℃；运输：三层包装，UN3373，冰袋；核酸提取：使用煮沸法+柱提法，内参为16SrRNA，阳性对照H37Rv，阴性空白；PCR：rpoB81bp核心区域，测序覆盖度>100×；判读：与野生型比对，突变率>5%报告，每批次含阳阴对照及抑制对照，每季度参加室间质评。【案例5】ICU患者女，68岁，留置导尿7天，尿培养见多重耐药肺炎克雷伯菌，需保存菌株进行全基因组测序（WGS）。78.描述菌株保存、复苏、DNA提取、文库构建、测序及数据上传的完整流程。答案：①纯培养：麦康凯平板单菌落；②保存：3mLLB+30%甘油混悬，−80℃；③复苏：划血平板，35℃18小时；④DNA提取：CTAB酚氯仿法，NanoDropA260/2