2026年生物医药实验技术培训实验室操作技能测试

2026年生物医药实验技术培训：实验室操作技能测试一、选择题（共10题，每题2分，合计20分）1.在进行细胞培养时，若培养基pH值过高，可能导致细胞：A.生长停滞B.溶血C.脱落D.分化加快2.高效液相色谱（HPLC）中，用于分离非极性化合物的固定相通常是：A.反相C18柱B.离子交换柱C.氢键柱D.毛细管柱3.以下哪种方法最适合检测蛋白质样品的浓度？A.紫外分光光度法（UV-Vis）B.蛋白质印迹（WesternBlot）C.酶联免疫吸附（ELISA）D.流式细胞术4.在基因克隆实验中，连接酶的作用是：A.切割DNAB.合成RNAC.连接DNA片段D.转录模板5.细胞凋亡过程中，活性氧（ROS）的主要作用是：A.促进细胞增殖B.抑制细胞凋亡C.损伤线粒体膜D.增强DNA修复能力6.实验室中，用于保存对数生长期细胞的最佳温度是：A.4℃B.-80℃C.37℃D.25℃7.蛋白质变性后，其生物活性通常：A.增强B.减弱C.不变D.转移8.在PCR实验中，引物退火温度通常取决于：A.引物长度B.核酸浓度C.DNA模板纯度D.退火时间9.以下哪种试剂常用于固定细胞进行免疫荧光检测？A.TritonX-100B.formaldehyde（甲醛）C.SDS（十二烷基硫酸钠）D.SDS缓冲液10.在细胞计数时，若使用血球计数板，应选择的计数区域是：A.四角大格B.中央计数室C.边缘小格D.空白区域二、填空题（共10题，每题1分，合计10分）1.细胞培养过程中，维持CO₂浓度为______可以保持培养基pH值稳定。2.离心机转速通常用______表示，单位为______。3.WesternBlot中，用于检测目标蛋白的抗体称为______。4.基因编辑技术CRISPR-Cas9的核心组件是______和______。5.细胞培养基中，______是必需的氨基酸。6.流式细胞术通过______和______分析细胞特性。7.细胞凋亡的标志性蛋白______在晚期出现。8.HPLC中，流动相的极性越强，通常用于分离______化合物。9.细胞冻存时，常用______作为保护剂。10.PCR产物可以通过______或______进行检测。三、简答题（共5题，每题4分，合计20分）1.简述细胞培养过程中无菌操作的要点。2.解释HPLC分离的基本原理。3.描述蛋白质印迹（WesternBlot）的主要步骤。4.说明基因克隆实验中，选择限制性内切酶的依据。5.比较流式细胞术与显微镜观察细胞形态的优缺点。四、实验设计题（共2题，每题10分，合计20分）1.实验目的：检测某药物对细胞凋亡的影响。实验材料：对数生长期的HeLa细胞、某药物、AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒。要求：设计实验步骤，包括细胞处理、凋亡检测和数据分析。2.实验目的：纯化并鉴定重组蛋白。实验材料：含重组蛋白的菌液、Ni-NTA树脂、SDS电泳试剂。要求：设计纯化流程，并说明如何通过SDS进行鉴定。五、计算题（共3题，每题5分，合计15分）1.某细胞悬液浓度为1×10⁶cells/mL，取100μL进行计数，若在血球计数板中央计数室（面积0.1mm²）计数为32个细胞，计算实际细胞浓度（单位：cells/mL）。2.PCR反应体系包含10μLdNTP（2.5mM），计算其中每种dNTP的最终浓度（单位：mM）。3.HPLC实验中，流动相流速为1.0mL/min，柱效为2000理论塔板数，计算分离度（Resolution）为1.5的两组峰的保留时间差（单位：min）。六、论述题（共2题，每题10分，合计20分）1.论述题1：比较传统PCR与数字PCR（dPCR）的原理、优缺点及适用场景。2.论述题2：分析细胞培养过程中常见的污染类型及预防措施。答案与解析一、选择题1.C解析：培养基pH值过高会导致细胞膜损伤，细胞脱落。2.A解析：反相C18柱适用于分离非极性化合物。3.A解析：紫外分光光度法通过测定吸光度定量蛋白质。4.C解析：连接酶用于连接DNA片段。5.C解析：ROS损伤线粒体膜，触发细胞凋亡。6.C解析：37℃是大多数哺乳动物细胞的最佳培养温度。7.B解析：蛋白质变性后结构破坏，生物活性减弱。8.A解析：引物退火温度与长度相关。9.B解析：甲醛用于细胞固定。10.B解析：中央计数室用于细胞计数。二、填空题1.5%2.RPM（转数/分钟），RPM3.二抗4.Cas9蛋白，向导RNA（gRNA）5.赖氨酸（Lysine）6.光学散射，荧光强度7.caspase-38.极性9.DMSO（二甲基亚砜）10.凝胶电泳，测序三、简答题1.无菌操作要点：-使用超净工作台或生物安全柜；-手臂消毒并避免接触工作台边缘；-培养基和器皿灭菌；-操作时避免说话和移动。2.HPLC分离原理：-基于化合物与固定相和流动相的相互作用差异；-通过洗脱时间不同实现分离。3.WesternBlot步骤：-蛋白质SDS电泳；-转膜至PVDF或NC膜；-一抗孵育；-二抗孵育；-化学发光或荧光检测。4.选择限制性内切酶依据：-预测酶切位点；-考虑酶切效率；-避免相邻酶切位点干扰。5.流式细胞术与显微镜比较：-流式细胞术可高通量分析细胞参数，但无法观察形态；-显微镜可观察形态，但效率低。四、实验设计题1.凋亡检测步骤：-细胞分组：对照组、药物组；-处理细胞：药物组加入药物，对照组加入溶剂；-吸收AnnexinV-FITC/PI；-流式细胞术检测凋亡率。2.重组蛋白纯化流程：-菌液裂解；-纳米柱纯化；-SDS鉴定（银染或考马斯亮蓝染色）。五、计算题1.细胞浓度计算：32细胞/0.1mm²×1000μL/mL=3.2×10⁶cells/mL2.dNTP浓度计算：2.5mM×10μL/1000μL=0.025mM（每种）3.保留时间差计算：Resolution=(t₂-t₁)/ΔtΔt=(t₂-t₁)/Resolution=1.5×1.0min=1.5mi