核酸检测员病毒鉴定能力测试试卷

核酸检测员病毒鉴定能力测试试卷考试时长：120分钟满分：100分试卷名称：核酸检测员病毒鉴定能力测试试卷考核对象：核酸检测员（中等级别）题型分值分布：-判断题（总共10题，每题2分）总分20分-单选题（总共10题，每题2分）总分20分-多选题（总共10题，每题2分）总分20分-案例分析（总共3题，每题6分）总分18分-论述题（总共2题，每题11分）总分22分总分：100分---一、判断题（每题2分，共20分）1.病毒核酸提取时，加入的蛋白酶K可以完全降解所有RNA和DNA。2.实时荧光定量PCR（qPCR）检测病毒时，循环阈值（Ct值）越低代表病毒载量越高。3.病毒基因组通常为单链RNA，如H1N1流感病毒。4.逆转录PCR（RT-PCR）可以同时检测RNA和DNA病毒。5.病毒核酸电泳时，条带越宽说明病毒载量越高。6.病毒鉴定时，基因序列比对相似度低于90%可能存在假阴性。7.通用型病毒检测试剂盒可以检测所有已知病毒。8.病毒核酸纯化时，乙醇沉淀法比硅胶膜法回收率更高。9.病毒鉴定报告需包含样本编号、检测项目、阳性/阴性结果及Ct值。10.空气传播病毒（如SARS-CoV-2）的检测优先采用鼻咽拭子采样。二、单选题（每题2分，共20分）1.下列哪种方法最适合检测病毒基因组完整性？（）A.PCR扩增B.电镜观察C.原位杂交D.蛋白质印迹2.病毒核酸提取时，加入的chaotropicagent（chaotropicagent）主要作用是？（）A.稳定RNA结构B.沉淀DNAC.去除蛋白质杂质D.提高PCR扩增效率3.病毒鉴定时，基因序列比对相似度最低的病毒可能属于？（）A.同一家族B.同一属C.不同科D.同一物种4.病毒核酸电泳时，出现弥散性条带可能提示？（）A.病毒载量高B.核酸降解C.电泳条件优化D.仪器故障5.逆转录PCR（RT-PCR）检测RNA病毒时，必须使用的酶是？（）A.蛋白酶KB.逆转录酶C.DNA聚合酶D.TaqMan探针6.病毒鉴定报告中的“阴性结果”意味着？（）A.样本中无病毒B.检测灵敏度不足C.需重复检测D.存在假阴性可能7.空气传播病毒检测时，采样频率越高，阳性率？（）A.越低B.越高C.不变D.无法确定8.病毒核酸提取时，加入的EDTA主要作用是？（）A.沉淀核酸B.活化酶蛋白C.螯合镁离子D.去除有机杂质9.病毒鉴定时，基因序列比对相似度最高的病毒可能属于？（）A.同一基因型B.不同亚型C.同一家族D.不同科10.病毒核酸电泳时，出现单一线性条带说明？（）A.病毒载量高B.核酸降解C.电泳条件优化D.仪器故障三、多选题（每题2分，共20分）1.病毒核酸提取时，常用的裂解方法包括？（）A.热裂解B.化学裂解C.机械裂解D.酶裂解2.病毒鉴定时，基因序列比对的主要用途是？（）A.确定病毒种类B.分析病毒进化C.检测耐药性D.验证检测准确性3.病毒核酸电泳时，出现多条弥散性条带可能提示？（）A.病毒载量高B.核酸降解C.电泳条件优化D.仪器故障4.逆转录PCR（RT-PCR）检测RNA病毒时，必须使用的试剂包括？（）A.逆转录酶B.DNA聚合酶C.引物D.RNA酶抑制剂5.病毒鉴定报告中的“阳性结果”可能需要进一步确认？（）A.重测样本B.基因测序C.抗原检测D.临床症状分析6.空气传播病毒检测时，采样部位的选择包括？（）A.鼻咽拭子B.口咽拭子C.咽拭子D.呼吸道灌洗液7.病毒核酸提取时，常用的纯化方法包括？（）A.乙醇沉淀B.硅胶膜吸附C.离心沉淀D.超滤8.病毒鉴定时，基因序列比对的主要数据库包括？（）A.GenBankB.EMBLC.DDBJD.NCBI9.病毒核酸电泳时，出现拖尾现象可能提示？（）A.病毒载量高B.核酸降解C.电泳条件优化D.仪器故障10.病毒鉴定时，基因序列比对的主要目的包括？（）A.确定病毒种类B.分析病毒进化C.检测耐药性D.验证检测准确性四、案例分析（每题6分，共18分）1.案例背景：某医疗机构接诊一名发热患者，采集鼻咽拭子样本进行病毒核酸检测。qPCR检测结果如下：-病毒ACt值：35-病毒BCt值：45-病毒CCt值：未检出问题：（1）根据Ct值判断，哪种病毒载量最高？（2）若病毒A为流感病毒，病毒B为腺病毒，临床意义是什么？（3）若患者症状加重，建议进一步检测什么？2.案例背景：某实验室使用RT-PCR检测一批冷链食品样本，发现部分样本出现弱阳性信号，但电泳条带模糊。问题：（1）可能的原因是什么？（2）如何优化检测条件？（3）若确认病毒存在，如何避免假阳性？3.案例背景：某疾控中心对某地区空气样本进行病毒检测，发现部分样本中存在未知病毒基因片段，基因序列相似度低于90%。问题：（1）如何进一步鉴定该病毒？（2）若为新型病毒，如何进行风险评估？（3）若无法确定病毒种类，如何报告检测结果？五、论述题（每题11分，共22分）1.论述题：试述病毒核酸检测的流程及其关键质量控制点。2.论述题：结合实际案例，分析病毒鉴定报告中的阳性/阴性结果可能存在的误差来源及应对措施。---标准答案及解析一、判断题1.×（蛋白酶K主要降解蛋白质，对RNA和DNA无作用）2.√（Ct值越低代表病毒载量越高）3.×（H1N1流感病毒为单链RNA，但其他病毒如冠状病毒为单链RNA）4.√（RT-PCR可检测RNA病毒，需先逆转录）5.×（条带越宽说明核酸降解严重）6.√（相似度低于90%可能存在假阴性或不同病毒）7.×（通用型试剂盒仅检测部分病毒）8.×（硅胶膜法回收率更高）9.√（报告需包含关键信息）10.√（鼻咽拭子采样效率高）二、单选题1.B（电镜观察可确认病毒形态）2.B（chaotropicagent主要作用是沉淀DNA）3.C（不同科可能存在较大差异）4.B（弥散性条带提示核酸降解）5.B（逆转录酶是必需酶）6.D（阴性结果可能存在假阴性）7.B（采样频率越高阳性率越高）8.C（EDTA螯合镁离子）9.A（同基因型相似度最高）10.C（单一线性条带说明电泳条件优化）三、多选题1.ABCD（热裂解、化学裂解、机械裂解、酶裂解均常用）2.ABD（主要用于确定种类、分析进化和验证准确性）3.AB（弥散性条带提示降解或载量高）4.ABCD（逆转录酶、DNA聚合酶、引物、RNA酶抑制剂均必需）5.ABCD（重测、基因测序、抗原检测、临床症状分析均需考虑）6.ABCD（鼻咽、口咽、咽拭子、呼吸道灌洗液均常用）7.ABCD（乙醇沉淀、硅胶膜吸附、离心沉淀、超滤均常用）8.ABCD（GenBank、EMBL、DDBJ、NCBI均为主要数据库）9.AB（拖尾现象提示降解或载量高）10.ABD（主要用于确定种类、分析进化和验证准确性）四、案例分析1.参考答案：（1）病毒A载量最高（Ct值35低于病毒B的45）。（2）流感病毒可能引起呼吸道感染，腺病毒可能引起上呼吸道症状，需结合临床症状诊断。（3）建议进一步检测病毒A/B的基因测序或抗原检测，以确认病毒种类和变异情况。2.参考答案：（1）可能原因：样本病毒载量低、提取效率低、PCR扩增条件不优。（2）优化方法：提高样本处理时间、优化引物浓度、调整退火温度。（3）避免假阳性：重复检测、使用内对照、排除污染源。3.参考答案：（1）进一步鉴定方法：基因测序、免疫荧光检测、电镜观察。（2）风险评估：评估传播能力、致病性、人群易感性。（3）报告方式：标注“未知病毒”并建议送检专业机构确认。五、论述题1.参考答案：病毒核酸检测流程包括：样本采集→核酸提取→核酸纯化→PCR/RT-PCR扩增→电泳/荧光检测。关键质量控制点：-样本处理：避免污染，确保病毒完整性。-提取效率：使用标准化的提取试剂盒，检测提取率。-PCR扩增：优化引物浓度、退火温度，使用内对照。-结果验证：重复检测、基因测序确认。2.参考答案：误差来源及应对措施：-样本采集：部位不当→优化采样方案。