pcr岗前培训考试试题及答案

pcr岗前培训考试试题及答案一、单项选择题（每题2分，共20题，计40分）1.PCR反应体系中，TaqDNA聚合酶的主要功能是：A.解旋DNA双链B.催化dNTP连接形成磷酸二酯键C.结合引物启动复制D.水解多余的dNTP答案：B解析：TaqDNA聚合酶是耐热DNA聚合酶，在引物引导下催化dNTP沿5'→3'方向合成DNA链，形成磷酸二酯键。解旋DNA双链由高温变性完成，引物结合由温度降低实现，水解dNTP非其功能。2.以下哪种物质是PCR扩增的必需成分？A.限制性内切酶B.逆转录酶C.Mg²+D.蛋白酶K答案：C解析：Mg²+是Taq酶的激活剂，影响酶活性和扩增特异性；限制性内切酶用于酶切，逆转录酶用于RT-PCR，蛋白酶K用于样本消化，均非常规PCR必需。3.实验室进行新冠病毒核酸检测时，样本处理区（二区）的主要操作不包括：A.样本编号登记B.核酸提取C.加样至扩增管D.磁珠法裂解液配置答案：A解析：样本编号登记属于试剂准备区（一区）或样本接收区（独立区域），样本处理区（二区）主要进行核酸提取、加样、裂解液配置等与样本直接接触的操作。4.关于PCR实验室分区，以下描述错误的是：A.各区空气压力应满足：试剂准备区＞样本处理区＞扩增区＞产物分析区B.不同区域物品不得交叉使用，需专用C.扩增区可使用普通冰箱保存扩增产物D.缓冲区需设置洗手池和换鞋/更衣设施答案：C解析：扩增产物含大量目标DNA，需严格密封保存于专用冰箱，避免气溶胶污染其他区域；其他选项均符合《临床基因扩增检验实验室管理办法》要求。5.实时荧光PCR扩增曲线的“平台期”形成的主要原因是：A.dNTP或引物耗尽B.Taq酶失活C.荧光信号达到仪器检测上限D.模板浓度过高答案：A解析：平台期是由于反应体系中原料（dNTP、引物）逐渐消耗，酶活性下降，扩增效率降低，最终产物积累趋缓；荧光信号上限是仪器参数限制，非主要原因。6.核酸提取过程中，若使用离心柱法，洗涤液的主要作用是：A.裂解细胞释放核酸B.结合核酸至吸附柱C.去除蛋白质、盐离子等杂质D.洗脱纯化的核酸答案：C解析：裂解液用于释放核酸（A），结合液促进核酸吸附（B），洗涤液去除杂质（C），洗脱液获取核酸（D）。7.以下哪种情况会导致PCR结果出现“假阴性”？A.样本采集量不足B.扩增程序中退火温度过低C.引物与模板非特异性结合D.产物分析区气溶胶污染答案：A解析：样本量不足可能导致目标核酸未被提取，出现假阴性；退火温度过低（B）、非特异性结合（C）易导致假阳性；气溶胶污染（D）主要影响后续实验，可能导致交叉污染阳性。8.实验室生物安全二级（BSL-2）的基本要求不包括：A.操作区与办公区分离B.配备生物安全柜C.工作人员需穿戴防护服、手套D.安装独立的空气净化系统答案：D解析：BSL-2实验室需分区、配备生物安全柜、个人防护，但独立空气净化系统（如负压）是BSL-3及以上要求。9.进行PCR实验时，若发现扩增曲线Ct值均＞38，最可能的原因是：A.引物浓度过高B.模板浓度过低C.荧光染料过量D.变性温度过高答案：B解析：Ct值与模板初始浓度成反比，模板浓度低则Ct值大；引物浓度过高（A）可能导致非特异性扩增，荧光染料过量（C）影响信号线性，变性温度过高（D）可能破坏酶活性，但均不直接导致Ct值显著增大。10.关于实验室废弃物处理，以下做法正确的是：A.一次性手套直接投入普通垃圾桶B.核酸提取废液用10%次氯酸钠浸泡30分钟后排放C.阳性扩增管高压灭菌后与普通垃圾混放D.废弃离心管清洗后重复使用答案：B解析：生物安全实验室废弃物需分类处理，核酸废液含感染性物质，需用10%次氯酸钠（有效氯10000mg/L）消毒；手套（A）、阳性管（C）需高压灭菌后按医疗废物处理；实验室器材禁止重复使用（D）。11.实时荧光PCR中，SYBRGreenI染料的作用原理是：A.与双链DNA小沟结合发出荧光B.与引物5'端标记的荧光基团结合C.被Taq酶水解后释放荧光D.特异性识别目标序列答案：A解析：SYBRGreenI是双链DNA嵌入染料，结合后荧光增强，非特异性检测；TaqMan探针（C）需水解，引物标记（B）常见于分子信标，特异性识别（D）是探针或引物设计功能。12.以下哪项不是PCR质量控制的关键环节？A.室内质控品的使用B.人员操作培训记录C.仪器校准与维护D.实验室温湿度监控答案：B解析：质量控制关注实验过程的准确性和可靠性，包括质控品（A）、仪器状态（C）、环境条件（D）；人员培训记录是实验室管理要求，非直接质量控制环节。13.核酸提取时，若样本为全血，需优先去除的干扰物质是：A.血红蛋白B.纤维蛋白原C.白蛋白D.免疫球蛋白答案：A解析：血红蛋白含亚铁离子，可抑制Taq酶活性，是全血样本中主要的PCR抑制剂；其他蛋白干扰较小。14.实验室发生样本泼溅时，正确的处理流程是：①立即停止操作②用吸水纸覆盖泼溅区域③喷洒10%次氯酸钠溶液④戴手套清理污染物⑤记录事件及处理过程A.①→②→③→④→⑤B.①→③→②→④→⑤C.①→④→②→③→⑤D.①→②→④→③→⑤答案：A解析：泼溅处理需先停止操作（①），覆盖减少气溶胶（②），消毒（③），再清理（④），最后记录（⑤）。15.关于PCR引物设计，以下说法错误的是：A.引物长度通常为18-25个核苷酸B.GC含量建议在40%-60%C.3'端避免连续3个G/CD.引物间可形成长于3bp的互补序列答案：D解析：引物间互补易形成引物二聚体，应避免；其他选项均为引物设计基本原则。16.新冠病毒核酸检测中，内参基因的作用是：A.验证样本核酸提取效率B.提高目标基因扩增效率C.区分不同病毒亚型D.减少扩增产物污染答案：A解析：内参（如人RPLP0基因）用于监测核酸提取过程是否有效，避免因提取失败导致假阴性。17.以下哪种仪器需定期进行温度校准？A.生物安全柜B.漩涡振荡器C.实时荧光PCR仪D.移液器答案：C解析：PCR仪的升降温准确性直接影响扩增结果，需定期校准（如使用温度验证系统）；移液器（D）需校准体积，生物安全柜（A）校准气流，漩涡振荡器（B）无严格温度要求。18.核酸提取完成后，若OD260/OD280比值为1.2，可能的原因是：A.核酸浓度过高B.蛋白质污染C.盐离子残留D.RNA污染答案：B解析：纯DNA的OD260/OD280约1.8，比值降低（如1.2）提示蛋白质污染；盐离子残留（C）影响OD260/OD230，RNA污染（D）对DNA比值影响较小。19.实验室收到一份咽拭子样本，标注为“2小时前采集，4℃保存”，其处理时限应不超过：A.2小时B.4小时C.6小时D.24小时答案：D解析：新冠病毒样本采集后4℃保存不超过24小时，-70℃可长期保存；若需延迟检测，应及时冷冻。20.以下哪项是PCR实验室“单向工作流”的核心目的？A.提高实验效率B.防止交叉污染C.便于设备管理D.符合美观要求答案：B解析：单向工作流（试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区）避免人员、物品逆向流动导致的气溶胶或产物污染。二、多项选择题（每题3分，共10题，计30分，少选得1分，错选不得分）1.PCR反应的基本步骤包括：A.变性B.退火C.延伸D.连接答案：ABC解析：PCR三步骤为变性（95℃解链）、退火（引物结合）、延伸（Taq酶合成DNA）；连接（D）是DNA连接酶功能，非PCR步骤。2.实验室生物安全防护的“一级屏障”包括：A.生物安全柜B.防护服C.手套D.实验室建筑结构答案：BC解析：一级屏障是人员防护装备（防护服、手套），二级屏障是实验室设施（生物安全柜、建筑结构）。3.导致PCR产物出现非特异性条带的可能原因有：A.引物特异性差B.退火温度过低C.dNTP浓度过高D.模板浓度过低答案：ABC解析：引物设计不佳（A）、退火温度低（B）、dNTP过多（C）均可能导致非特异性扩增；模板浓度低（D）易导致无扩增或Ct值大。4.核酸提取过程中，常用的裂解方法包括：A.酶解法（蛋白酶K）B.化学裂解法（胍盐）C.机械破碎法（珠磨）D.高温裂解法（煮沸）答案：ABCD解析：四种方法均为常见裂解方式，根据样本类型选择（如组织用珠磨，病毒用胍盐，细菌用酶解）。5.实时荧光PCR结果判读时，需关注的参数包括：A.Ct值B.扩增曲线形态C.阴性对照结果D.阳性对照Ct值范围答案：ABCD解析：Ct值（A）是定量依据，曲线形态（B）判断扩增有效性，阴阳性对照（C、D）验证实验可靠性。6.实验室质量控制记录应包括：A.仪器校准记录B.试剂批次及有效期C.人员操作失误记录D.室内质控结果答案：ABD解析：质量控制记录需涵盖影响结果的关键因素（仪器、试剂、质控），操作失误记录属于实验室管理，非质量控制必需。7.关于PCR实验室环境要求，正确的有：A.各区域需有明确标识B.地面、墙面应耐消毒、无渗漏C.产物分析区可设置排风扇D.缓冲区需安装紫外灯答案：AB解析：产物分析区（四区）需避免空气外流，排风扇（C）可能导致气溶胶扩散；紫外灯（D）通常用于各操作区台面消毒，非缓冲区必需。8.样本运输过程中需注意：A.使用防泄漏包装B.保持冷链（2-8℃或冷冻）C.与其他物品混装时需隔离D.标注生物危害标识答案：ABD解析：样本需单独包装（C错误），防泄漏（A）、冷链（B）、标识（D）是基本要求。9.以下哪些情况需重新进行人员培训？A.新试剂更换B.仪器升级C.操作流程修改D.年度考核合格答案：ABC解析：试剂、仪器、流程变化（A、B、C）可能影响操作，需培训；考核合格（D）无需重复培训。10.核酸检测结果审核时，需排除的异常情况包括：A.阴性对照出现扩增B.阳性对照Ct值超出预期范围C.样本Ct值在灰区（如37-40）D.内参基因无扩增答案：ABCD解析：阴性质控阳性（A）提示污染，阳性质控异常（B）提示试剂/操作问题，灰区（C）需重复检测，内参无扩增（D）提示提取失败，均需审核排除。三、判断题（每题1分，共10题，计10分）1.PCR实验室可以不设置缓冲区，各区域直接相连。（）答案：×解析：缓冲区是防止交叉污染的关键，需设置于相邻区域之间（如一区与二区之间）。2.移液器使用后应调至最大量程，以保护弹簧。（）答案：×解析：移液器长期置于最大量程会导致弹簧疲劳，应调至中间量程。3.核酸提取时，离心步骤的转速和时间需严格按照试剂盒说明书执行。（）答案：√解析：离心参数影响核酸结合效率，需按说明书操作。4.扩增产物可在样本处理区进行开盖操作。（）答案：×解析：产物分析区（四区）是唯一可处理扩增产物的区域，其他区域禁止开盖。5.实验室温湿度记录只需在出现异常时填写。（）答案：×解析：需每日记录温湿度，确保符合实验要求（如试剂保存、仪器运行）。6.同一批次检测中，若所有样本Ct值均＞35，可直接判定为阴性。（）答案：×解析：需结合阴阳性对照、内参结果综合判断，避免因提取失败导致假阴性。7.生物安全柜使用前需开机运行10分钟，确保气流稳定。（）答案：√解析：预运行可去除柜内残留污染物，保证操作安全。8.废弃的PCR扩增管可直接放入锐器盒。（）答案：×解析：扩增管含感染性物质，需先高压灭菌，再按医疗废物处理，锐器盒用于针头、玻片等尖锐物品。9.引物稀释时，可用双蒸水代替DEPC水。（）答案：×解析：DEPC水用于RNA实验（灭活RNase），DNA实验可用双蒸水，但需无DNase污染。10.实验室发生火灾时，应优先抢救实验数据和试剂。（）答案：×解析：人员安全是首要，应立即撤离并报警。四、简答题（每题5分，共6题，计30分）1.简述PCR实验室“四区一室”的功能划分及气流方向要求。答案：PCR实验室通常划分为四个功能区：（1）试剂准备区（一区）：配制反应体系，避免外源DNA污染；（2）样本处理区（二区）：样本接收、核酸提取，需防样本间交叉污染；（3）扩增区（三区）：PCR扩增反应，防扩增产物污染前区；（4）产物分析区（四区）：扩增产物检测（如电泳、荧光读取），为污染风险最高区域。气流方向需保持为：一区＞二区＞三区＞四区（正压递减），防止污染气流逆向扩散。2.列举5种PCR实验中常见的污染类型及对应的预防措施。答案：（1）气溶胶污染：扩增产物形成的微小颗粒，预防措施为分区操作、使用带滤芯枪头、定期紫外消毒。（2）交叉污染：样本间相互污染，预防措施为严格分样、一管一换枪头。（3）试剂污染：试剂中混入目标DNA，预防措施为分装试剂、专用移液器。（4）实验室环境残留污染：台面/仪器表面残留DNA，预防措施为每日用10%次氯酸钠擦拭。（5）内源性抑制物污染：样本中含Taq酶抑制剂（如血红蛋白），预防措施为优化提取方法、增加洗涤步骤。3.实时荧光PCR中，如何通过扩增曲线判断实验是否有效？答案：有效扩增曲线应具备以下特征：（1）基线期（前15-20个循环）荧光信号稳定，无明显波动；（2）指数期荧光信号呈对数增长，曲线陡峭；（3）平台期荧光信号趋于平稳，无骤升或骤降；（4）阴性对照无扩增曲线（或Ct值＞40），阳性对照Ct值在预期范围内（如18-30）；（5）内参基因（如人源基因）应出现有效扩增，Ct值≤35（根据实验室标准）。4.核酸提取过程中，若出现DNA得率低，可能的原因有哪些？答案：可能原因包括：（1）样本量不足或保存不当（如凝固血、反复冻融）；（2）裂解不充分（裂解液失效、时间/温度不足）；（3）吸附柱结合效率低（结合液未完全混合、离心转速/时间不足）；（4）洗涤过度（洗涤液残留抑制洗脱）或洗脱不充分（洗脱缓冲液体积少、温度低）；（5）操作失误（如吸弃液体时误吸沉淀、离心管未盖紧导致液体丢失）。5.简述实验室生物安全防护的基本要求（至少5项）。答案：（1）人员培训：掌握生物安全知识和操作规范，考核合格上岗；（2）个人防护：穿戴防护服、手套、口罩，必要时护目镜；（3）设备管理：生物安全柜定期检测，高压灭菌器验证有效性；（4）废弃物处理：分类收集，感染性废物高压灭菌后按医疗废物处理；（5）风险评估：实验前评估样本传染性，制定应急预案（如泼溅、刺伤处理）；（6）环境监控：每日记录温湿度，定期消毒台面、地面。6.某实验室检测新冠病毒时，发现阳性对照Ct值为32（预期18-25），同时多个样本Ct值＞38，分析可能原因及解决措施。答案：可能原因：（1）阳性对照稀释错误（浓度过低）；（2）扩增程序设置错误（如延伸时间过短、退火温度过高）；（3）试剂失效（Taq酶活性下降、引物/探针降解）；（4）仪器故障（PCR仪温度模块不准确，导致扩增效率降低）；（5）操作失误（加样体积不足、漏加关键试剂）。解决措施：（1）重新配制阳性对照，验证浓度；（2）核对扩增程序参数（温度、时间）与试剂盒说明书一致；（3）更换新批次试剂，并行检测验证；（4）使用温度验证系统校准PCR仪；（5）检查加样过程，必要时通过视频回放排查操作错误；（6）重复实验，确认问题是否解决。五、案例分析题（每题10分，共2题，计20分）案例1：某PCR实验室在进行流感病毒检测时，发现所有样本的内参基因均无扩增，但阴阳性对照结果正常。问题：分析可能原因及处理措施。答案：可能原因：（1）内参引物/探针失效（如降解、配制错误）；（2）核酸提取过程中内