PCR检测上岗证试题及答案

PCR检测上岗证试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.PCR反应体系中，TaqDNA聚合酶的最适反应温度是：A.55℃B.72℃C.94℃D.60℃答案：B2.临床PCR实验室分区中，产物分析区的主要功能是：A.样本接收与处理B.PCR反应体系配制C.PCR扩增D.扩增产物的检测与分析答案：D3.以下哪种物质会对PCR反应产生抑制作用？A.去离子水B.乙二胺四乙酸（EDTA）C.牛血清白蛋白（BSA）D.二甲基亚砜（DMSO）答案：B4.实验室进行核酸提取时，若使用磁珠法，关键步骤是：A.细胞裂解B.磁珠与核酸结合C.磁珠洗涤D.核酸洗脱答案：B（注：磁珠法核心是磁珠与核酸的特异性结合，洗涤和洗脱是辅助步骤）5.定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是：A.荧光信号达到设定阈值时的循环数B.扩增产物量达到平台期的循环数C.引物与模板结合的最佳温度D.反应体系中dNTP耗尽的时间点答案：A6.实验室发生扩增产物污染时，最有效的处理方法是：A.用75%乙醇擦拭台面B.紫外线照射30分钟C.用10%次氯酸钠溶液浸泡D.更换实验服答案：C（次氯酸钠可有效降解核酸，紫外线对长片段DNA效果有限）7.以下关于PCR引物设计的描述，错误的是：A.引物长度建议18-25个碱基B.引物GC含量应控制在40%-60%C.引物3’端避免连续3个G/CD.引物5’端必须与模板完全匹配答案：D（5’端可添加酶切位点等非匹配序列）8.核酸提取质量的评估指标不包括：A.浓度（ng/μL）B.A260/A280比值C.片段完整性（电泳条带）D.样本采集时间答案：D9.临床PCR实验室的“单向工作流”要求是指：A.人员从污染区向清洁区移动B.试剂从扩增区向配制区移动C.样本从处理区向扩增区移动D.所有操作严格按照试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区顺序进行，不得逆向答案：D10.进行新型冠状病毒核酸检测时，若使用荧光PCR法，通常选择的靶基因是：A.ORF1ab和N基因B.S基因和E基因C.M基因和N基因D.ORF1ab和E基因答案：A（根据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》推荐）11.实验室使用的定量PCR仪校准周期应为：A.每3个月B.每6个月C.每年D.每2年答案：C（依据《临床基因扩增检验实验室工作规范》）12.以下哪种情况属于“假阳性”结果？A.阴性样本检测为阳性B.阳性样本检测为阴性C.弱阳性样本重复检测为阴性D.强阳性样本Ct值异常偏大答案：A13.核酸提取过程中，加入蛋白酶K的主要目的是：A.裂解红细胞B.降解蛋白质，释放核酸C.抑制核酸酶活性D.沉淀杂质答案：B14.实验室配制PCR反应体系时，错误的操作是：A.在生物安全柜中进行B.使用带滤芯的吸头C.先加酶后加模板D.每次吸取试剂后更换吸头答案：C（应最后加模板，避免交叉污染）15.关于医疗废物处理，正确的做法是：A.一次性手套直接投入生活垃圾桶B.阳性样本管高压灭菌后按感染性废物处理C.废弃的PCR反应管放入锐器盒D.核酸提取废液用清水稀释后排放答案：B二、多项选择题（每题3分，共15分，多选、错选、漏选均不得分）1.PCR实验室必须配备的设备包括：A.核酸提取仪B.荧光定量PCR仪C.超净工作台D.高速冷冻离心机答案：ABCD2.影响PCR扩增效率的因素有：A.引物浓度B.模板质量C.Mg²+浓度D.退火温度答案：ABCD3.实验室质量控制措施包括：A.室内质控（每次检测使用阴/阳性对照）B.室间质评（参加省级或国家级质控活动）C.仪器校准与维护记录D.人员培训与考核答案：ABCD4.生物安全二级实验室（BSL-2）的要求包括：A.实验室入口处设生物危害标识B.配备洗眼装置C.操作病原微生物时使用生物安全柜D.实验区域与办公区域分开答案：ABCD5.关于定量PCR结果判读，正确的是：A.Ct值≤37为阳性（根据试剂盒说明书）B.无Ct值且扩增曲线无明显指数增长为阴性C.Ct值在37-40之间需重复检测D.内参基因无扩增提示样本抑制或提取失败答案：ABCD三、判断题（每题2分，共20分，正确打“√”，错误打“×”）1.PCR实验室可以不设置独立的试剂准备区，与样本处理区共用。（×）2.核酸提取时，离心速度和时间不影响提取效率。（×）3.阳性对照的作用是验证扩增体系的有效性。（√）4.实验室发生样本溢洒时，应立即用纸巾擦拭并丢弃。（×）5.定量PCR仪的光学系统不需要校准。（×）6.引物二聚体的形成会导致Ct值偏小。（√）7.临床样本保存超过48小时应置于-20℃以下冷冻。（√）8.实验记录应包括试剂批号、仪器编号、操作人员等信息。（√）9.医疗废物交接时只需记录数量，无需记录种类。（×）10.核酸检测结果报告需经双人核对。（√）四、简答题（每题5分，共20分）1.简述PCR实验室分区的基本要求及各区域功能。答案：PCR实验室应严格划分为四个独立区域：①试剂准备区：用于储存、配制和分装PCR试剂（不含模板），需配备超净工作台和专用仪器；②样本处理区：用于样本接收、核酸提取及模板制备，需配备生物安全柜和核酸提取仪；③扩增区：用于PCR反应体系的组装和扩增，需配备定量PCR仪；④产物分析区：用于扩增产物的检测（如电泳、测序或荧光分析）。各区严格单向流动，不得交叉；各区域设备、耗材专用，避免污染。2.列举3种常见的PCR抑制物及其来源。答案：①血红蛋白（来自全血样本）：可抑制Taq酶活性；②肝素（抗凝剂）：通过螯合Mg²+抑制PCR反应；③胍盐（核酸提取试剂残留）：高浓度胍盐会破坏酶结构；④多糖（植物或粪便样本）：非特异性结合核酸或酶；⑤胆盐（粪便样本）：干扰酶活性。3.简述定量PCR实验中“内参基因”的作用。答案：内参基因（如β-actin、GAPDH）的作用包括：①监控样本质量：若内参无扩增，提示样本核酸降解或提取失败；②校正加样误差：通过内参Ct值标准化目标基因的Ct值，提高定量准确性；③评估抑制物存在：若内参Ct值异常偏大，可能存在PCR抑制物。4.实验室发现“假阴性”结果时，应从哪些方面排查原因？答案：①样本因素：样本采集部位错误、保存不当（如核酸降解）、抑制物过多；②提取环节：提取效率低（磁珠失效、裂解不充分）、洗脱体积不准确；③扩增体系：引物/探针失效（过期或保存不当）、酶活性下降（反复冻融）、反应条件错误（退火温度过高）；④仪器因素：PCR仪温度模块异常（如某孔温度偏差大）、荧光检测灵敏度下降；⑤操作因素：加样量错误（模板漏加或体积不足）、交叉污染（阴性样本被阳性污染）。五、案例分析题（15分）某实验室开展新型冠状病毒核酸检测时，出现以下情况：一批次检测中，10份临床样本的内参基因均无扩增，而阳性对照Ct=25，阴性对照无扩增。问题：（1）分析可能的原因（8分）；（2）提出处理措施（7分）。答案：（1）可能原因分析：①样本处理环节：样本核酸提取失败（如裂解液失效、磁珠未充分结合核酸、洗脱缓冲液错误）；提取过程中漏加关键试剂（如蛋白酶K）；提取仪故障（如磁珠分离不彻底）。②内参引物/探针问题：内参引物或探针过期、降解；引物/探针浓度错误（过低或过高）；引物/探针与样本种属不匹配（如使用人源内参但样本为动物源性）。③反应体系配制错误：内参引物/探针未加入反应体系；PCR混合液配制时漏加内参组分；移液误差导致内参试剂未加入（如吸头堵塞）。④仪器问题：定量PCR仪荧光通道设置错误（内参对应通道未开启）；光学元件污染（如激发光/检测器被遮挡）；温度模块异常导致内参扩增失败（但阳性对照正常，可能性较低）。（2）处理措施：①立即停止该批次检测，标记所有样本为“结果无效”；②核查实验记录：检查提取试剂批号、配制记录、仪器运行日志