2025年生物技术工程师岗位招聘面试参考试题及参考答案

2025年生物技术工程师岗位招聘面试参考试题及参考答案一、单项选择题（共10题，每题2分，共20分）1.以下关于PCR技术的描述，错误的是：A.变性温度通常为9495℃B.TaqDNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性C.引物设计需避免自身互补形成发夹结构D.延伸时间取决于扩增片段长度2.限制性内切酶EcoRI识别的序列是：A.GAATTC（互补链CTTAAG）B.GGATCC（互补链CCTAGG）C.GCGGCCGC（互补链CGCCGGCG）D.AAGCTT（互补链TTCGAA）3.原核表达系统中，用于诱导T7启动子驱动的外源基因表达的常用诱导剂是：A.IPTG（异丙基βD硫代半乳糖苷）B.乳糖C.阿拉伯糖D.四环素4.以下哪种技术可用于检测蛋白质与DNA的相互作用？A.ELISA（酶联免疫吸附试验）B.EMSA（电泳迁移率变动分析）C.qPCR（实时荧光定量PCR）D.WesternBlot（蛋白质免疫印迹）5.动物细胞培养中，常用的无血清培养基添加的关键成分不包括：A.生长因子（如EGF、FGF）B.转铁蛋白C.胎牛血清D.胰岛素6.关于CRISPRCas9系统的描述，正确的是：A.Cas9蛋白仅能识别PAM序列（NGG）B.sgRNA由crRNA和tracrRNA融合而成C.该系统只能用于基因敲除，无法实现基因敲入D.脱靶效应是指Cas9切割非目标位点的现象7.以下属于第二代测序技术（NGS）的是：A.Sanger测序B.PacBio单分子实时测序C.Illumina边合成边测序D.Oxford纳米孔测序8.生物制药中，用于去除病毒的常用方法是：A.高压蒸汽灭菌B.0.22μm滤膜过滤C.100kDa超滤D.pH3.5酸性孵育9.以下关于质粒载体的描述，错误的是：A.通常包含复制起始位点（ori）B.必须含有抗生素抗性基因作为筛选标记C.多克隆位点（MCS）是多种限制性内切酶的单一酶切位点集中区域D.大小一般在120kb之间10.植物组织培养中，诱导愈伤组织形成的关键植物激素组合是：A.高浓度生长素+低浓度细胞分裂素B.低浓度生长素+高浓度细胞分裂素C.仅生长素D.仅细胞分裂素二、多项选择题（共5题，每题3分，共15分。错选、漏选均不得分）1.基因工程中，常用的真核表达系统包括：A.酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）B.毕赤酵母（Pichiapastoris）C.中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）D.昆虫细胞（SF9/SF21）2.以下属于生物安全三级（BSL3）实验室操作要求的是：A.实验人员需穿戴正压防护服B.所有操作在生物安全柜中进行C.实验室需配备双门高压灭菌器D.废弃物需经121℃高压灭菌30分钟3.蛋白质纯化常用的层析技术包括：A.离子交换层析（IEC）B.亲和层析（AC）C.凝胶过滤层析（GFC）D.反相层析（RPC）4.以下哪些因素会影响PCR扩增效率？A.Mg²+浓度B.引物退火温度C.dNTP浓度D.模板DNA的纯度5.基因治疗中，常用的病毒载体包括：A.腺相关病毒（AAV）B.慢病毒（Lentivirus）C.腺病毒（Adenovirus）D.逆转录病毒（Retrovirus）三、填空题（共10题，每空1分，共15分）1.大肠杆菌感受态细胞的制备常用________法，其原理是通过________处理增加细胞膜通透性。2.单克隆抗体制备的关键技术是________，其融合的细胞是________和________。3.实时荧光定量PCR（qPCR）中，常用的荧光标记方法包括________和________。4.细胞冻存时，常用的冻存液成分为________（体积比）的________和________。5.蛋白质二级结构的主要类型包括________、________和无规卷曲。6.基因编辑技术中，ZFN（锌指核酸酶）的核心功能域是________和________。四、简答题（共5题，第13题每题6分，第45题每题8分，共34分）1.简述Sanger双脱氧链终止法测序的基本原理。2.列举原核表达系统（大肠杆菌）与真核表达系统（CHO细胞）的优缺点比较（至少各3点）。3.解释“细胞传代”的概念，并说明贴壁细胞与悬浮细胞传代操作的主要区别。4.某实验室在进行重组蛋白表达时，发现目的蛋白以包涵体形式存在，可能的原因有哪些？请提出3种优化策略。5.基因治疗中，腺相关病毒（AAV）载体与慢病毒载体的主要区别是什么？从安全性、转染效率、整合特性、应用场景四方面分析。五、应用题（共3题，第1题8分，第2题10分，第3题18分，共36分）1.计算类：某实验室进行质粒转化实验，取10μL感受态细胞（浓度为1×10⁹CFU/μgDNA）与1ng质粒DNA混合，冰浴30分钟后热激90秒，加入990μLSOC培养基，37℃振荡培养1小时。取100μL转化液涂布于LB抗性平板，37℃培养16小时后，平板上长出240个菌落。计算该次转化的转化效率（单位：CFU/μgDNA），并说明转化效率的定义。2.分析类：某WesternBlot实验结果显示目标条带位置正确但信号极弱，可能的原因有哪些？请从样本处理、电泳、转膜、抗体孵育、显色5个环节至少各列举1个可能原因，并提出对应的改进措施。3.综合设计类：请设计一个利用CRISPRCas9技术敲除人源细胞中p53基因（已知其外显子211编码全长蛋白）的实验方案。要求包含以下关键步骤：（1）sgRNA设计原则（包括PAM序列要求、脱靶预测方法）；（2）Cas9sgRNA表达载体的构建（需说明载体元件）；（3）细胞转染方法及阳性克隆筛选（需说明筛选标记及鉴定方法）；（4）敲除效率验证（需列举至少2种分子生物学方法及原理）。参考答案一、单项选择题1.B（Taq酶无3'→5'外切酶活性，故无校正功能）2.A（EcoRI识别GAATTC，切割位点在G与A之间）3.A（IPTG是T7启动子的强诱导剂）4.B（EMSA通过DNA蛋白复合物迁移率降低检测相互作用）5.C（无血清培养基不含胎牛血清）6.D（脱靶效应指非目标位点切割）7.C（Illumina属于NGS第二代测序）8.D（pH3.5酸性孵育是病毒灭活常用方法，0.22μm滤膜无法去除病毒）9.B（筛选标记也可使用荧光蛋白等，非必须抗生素抗性）10.A（高生长素/细胞分裂素诱导愈伤）二、多项选择题1.ABCD（均为常用真核表达系统）2.BC（BSL3要求生物安全柜操作、双门高压灭菌器；正压防护服为BSL4要求）3.ABCD（均为蛋白质纯化常用层析技术）4.ABCD（Mg²+、退火温度、dNTP、模板纯度均影响PCR效率）5.ABCD（均为基因治疗常用病毒载体）三、填空题1.CaCl₂；Ca²+2.细胞融合；B淋巴细胞；骨髓瘤细胞3.SYBRGreen荧光染料法；TaqMan探针法4.9:1；胎牛血清；DMSO（二甲基亚砜）5.α螺旋；β折叠6.锌指DNA结合域；FokI核酸内切酶域四、简答题1.Sanger测序原理：利用双脱氧核苷酸（ddNTP）终止DNA链延伸。反应体系包含模板DNA、引物、dNTP（含少量荧光标记的ddNTP）、DNA聚合酶。延伸过程中，当ddNTP掺入时，链终止，生成不同长度的片段。通过毛细管电泳分离片段，根据末端ddNTP的荧光信号读取序列。2.原核与真核表达系统比较：原核（大肠杆菌）优点：培养成本低、周期短、表达量高；缺点：缺乏糖基化等翻译后修饰、可能形成包涵体、难以分泌表达。真核（CHO细胞）优点：具备正确翻译后修饰、可分泌表达、产物更接近天然蛋白；缺点：培养成本高、周期长、表达量较低。3.细胞传代：指将原代或传代细胞从原培养容器中取出，分瓶继续培养的过程。贴壁细胞需先用胰酶消化使细胞脱离培养皿，再离心收集后分瓶；悬浮细胞可直接取部分细胞悬液加入新鲜培养基分瓶，无需消化。4.包涵体形成原因及优化策略：原因：蛋白表达速率过快、宿主菌折叠能力不足、培养温度过高、蛋白疏水性区域暴露。优化策略：降低诱导温度（如2025℃）、使用分子伴侣共表达载体、优化诱导剂浓度（如降低IPTG浓度）、更换宿主菌（如Rosetta菌株补充稀有密码子tRNA）。5.AAV与慢病毒载体区别：安全性：AAV无致病性，免疫原性低；慢病毒可能激活原癌基因（整合型）。转染效率：慢病毒转染分裂/非分裂细胞，效率高；AAV感染效率因血清型而异。整合特性：AAV多为游离态，极少整合；慢病毒（HIV来源）可整合至宿主基因组。应用场景：AAV用于体内长期表达（如遗传病治疗）；慢病毒用于体外基因编辑（如CART细胞制备）。五、应用题1.转化效率计算：转化效率（CFU/μg）=（菌落数×稀释倍数）/转化用DNA量（μg）稀释倍数=总转化液体积（1000μL）/涂板体积（100μL）=10转化用DNA量=1ng=1×10⁻⁶μg转化效率=（240×10）/（1×10⁻⁶）=2.4×10⁹CFU/μg定义：每微克质粒DNA转化后获得的菌落数，反映感受态细胞的转化能力。2.WesternBlot信号弱原因及改进：样本处理：蛋白浓度过低（改进：增加上样量或提高裂解效率）。电泳：电压过高导致蛋白跑散（改进：降低电压至80100V恒压）。转膜：电流不足或时间过短（改进：湿转时增加电流至300mA，时间12小时）。抗体孵育：一抗浓度过低（改进：优化一抗稀释比，如从1:1000调整为1:500）。显色：ECL试剂失效（改进：更换新鲜ECL试剂，避光保存）。3.CRISPRCas9敲除p53实验方案：（1）sgRNA设计：靶点选择p53外显子2（编码DNA结合域），PAM序列为NGG（SpCas9）；脱靶预测：使用CRISPRDesignTool（如Benchling），筛选与其他基因同源性<80%的sgRNA。（2）载体构建：载体元件：CMV启动子（驱动Cas9表达）、U6启动子（驱动sgRNA表达）、嘌呤霉素抗性基因（筛选标记）、SV40polyA（转录终止）。（3）转染与筛选：转染方法：脂质体转染（如Lipofectamine3000）或电转（适用于难转染细胞）；筛选：转染48小时后，用2μg/mL嘌呤霉素筛选710天，获得稳定转染细胞；鉴定：挑单克隆扩增，提取基