(2025年)病理学技术基础知识题库及答案

(2025年)病理学技术基础知识题库及答案一、单项选择题1.10%中性福尔马林固定液的pH值应控制在A.5.0-5.5B.6.0-6.5C.7.0-7.4D.8.0-8.5答案：C解析：中性福尔马林通过磷酸盐缓冲维持pH7.0-7.4，可减少组织酸变性，更好保存抗原和核酸。2.石蜡切片常规厚度要求为A.1-2μmB.3-5μmC.6-8μmD.9-10μm答案：B解析：3-5μm厚度既能保证切片连续性，又能避免细胞重叠影响观察，是HE染色、免疫组化的标准厚度。3.免疫组化中“内源性生物素”干扰最常见于A.肌肉组织B.神经组织C.肝、肾组织D.脂肪组织答案：C解析：肝、肾等实质器官细胞内含有较多内源性生物素，使用链霉亲和素-生物素系统时易与检测系统结合，导致假阳性。4.冰冻切片染色时，“冰晶”形成的主要原因是A.组织未充分固定B.冷冻温度过高（-15℃以上）C.切片后未及时染色D.组织含水分过多答案：B解析：冷冻温度需控制在-20℃至-25℃，温度过高（如-15℃）会导致水分子缓慢结晶，形成较大冰晶破坏组织形态。5.吉姆萨染色主要用于显示A.胶原纤维B.神经纤维C.血液细胞及寄生虫D.基底膜答案：C解析：吉姆萨染料含天青和伊红，对血细胞胞质、寄生虫（如疟原虫）的核质着色鲜明，是血液学和寄生虫检测的常用方法。二、多项选择题1.组织脱水不彻底可能导致的后果包括A.透明时组织收缩变硬B.石蜡包埋时蜡无法渗入C.切片时出现裂隙或断裂D.HE染色时胞核着色浅答案：ABCD解析：脱水不彻底会使组织内残留水分，透明剂（如二甲苯）无法完全置换乙醇，导致蜡渗透障碍；包埋后组织硬脆，切片易断裂；残留水分还会稀释染液，影响着色。2.免疫组化结果判读需考虑的因素有A.阳性对照是否显色B.阴性对照是否无显色C.着色部位（胞核/胞质/胞膜）D.阳性细胞比例答案：ABCD解析：需通过对照验证实验有效性，结合着色定位（如Ki-67应定位于胞核）和阳性率（如HER2需判断3+比例）综合判读。3.分子病理中PCR扩增失败的常见原因包括A.引物设计特异性差B.DNA模板降解C.Taq酶保存不当失活D.退火温度过高答案：ABCD解析：引物二聚体、模板断裂、酶活性丧失或退火温度偏离Tm值均会导致扩增失败。三、简答题1.简述石蜡切片制作中“透明”步骤的目的及操作要点。答案：目的：通过透明剂（如二甲苯）置换组织内的脱水剂（乙醇），使组织具有透明性，利于石蜡渗入。操作要点：①脱水需彻底（无水乙醇处理），否则透明不充分；②透明时间依组织类型调整（如肝、脾15-30分钟，皮肤、骨组织1-2小时）；③避免过度透明（超过2小时），防止组织变脆；④使用新鲜透明剂，避免乙醇污染影响蜡渗透。2.HE染色中“细胞核着色过浅”可能的原因及解决方法。答案：可能原因：①苏木素染液失效（氧化过度或保存不当）；②分化时间过长（盐酸乙醇分化液处理过久）；③蓝化不充分（自来水冲洗时间不足或未用稀氨水）；④切片脱蜡不彻底（二甲苯处理时间短，残留石蜡阻碍染液渗透）。解决方法：定期更换苏木素染液（观察液面是否有金属膜）；缩短分化时间（显微镜下监控至胞核轮廓清晰）；延长蓝化时间（流水冲洗10分钟或用0.5%氨水浸泡30秒）；增加脱蜡步骤（二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟）。3.简述免疫组化中“热修复”的原理及操作注意事项。答案：原理：通过高温（95-100℃）使甲醛固定导致的蛋白质交联断裂，暴露被掩盖的抗原表位（如福尔马林固定的组织中，抗原表位常与赖氨酸残基结合）。注意事项：①修复液选择（pH6.0柠檬酸缓冲液用于大多数抗原，pH9.0EDTA用于某些胞核抗原如ER、PR）；②温度控制（避免煮沸导致组织脱落）；③冷却方式（自然冷却至室温，避免骤冷影响修复效果）；④组织类型（脑、肝等软脆组织需降低修复时间，防止脱片）。四、案例分析题某实验室对胃腺癌标本进行CK7（细胞角蛋白7）免疫组化染色，结果显示：阳性对照（已知CK7阳性的卵巢癌组织）显色正常，阴性对照（PBS替代一抗）无显色，但胃腺癌组织切片中出现背景非特异性染色（胞质弥漫淡染）。分析可能原因及解决措施。答案：可能原因：①一抗浓度过高（非特异性结合增加）；②封闭不充分（血清封闭时间短或浓度低，未阻断组织内非特异性蛋白结合位点）；③二抗与组织内免疫球蛋白交叉反应（如使用兔源二抗，而组织含内源性兔IgG）；④洗涤不彻底（缓冲液残留导致二抗或检测系统非特异性吸附）。解决措施：①梯度稀释一抗（如原1:200调整为1:300-1:400），预实验确定最佳浓度；②延长封闭时间（从10分钟延长至30分钟）或更换封闭液（如使用动物血清与BSA混合液）；③更换二抗种属（如改用鼠源二抗）或使用预吸附二抗（减少交叉反应）；④增加洗涤次数（从3次增加至5次，每次5分钟），确保彻底去除未结合试剂。五、操作题描述“肾脏穿刺组织（约0.5cm×0.2cm）”的石蜡包埋前处理流程（从固定到包埋）。答案：①固定：立即放入10%中性福尔马林（体积为组织20倍以上），4℃固定4-6小时（避免过度固定影响抗原）；②取材：在解剖显微镜下确认肾小球数量（需≥10个），修切为0.3cm×0.2cm×0.1cm的小块（厚度≤2mm）；③脱水：70%乙醇2小时→80%乙醇2小时→90%乙醇2小时→95%乙醇Ⅰ1小时→95%乙醇Ⅱ1小时→无水乙醇Ⅰ30分钟→无水乙醇Ⅱ30分钟（梯度脱水避免组织收缩）；④透明：二甲苯Ⅰ15分钟→二甲苯Ⅱ15分钟（观察组织是否透明，未透明延长5分钟）；⑤浸蜡：56-58℃石蜡Ⅰ30分钟→石蜡Ⅱ1小时（使用真空浸蜡机可缩短时间至45分钟，提高蜡渗透）；⑥包埋：将组织切面朝下放入包埋框，调整方向（皮质面向上），倒入新鲜石蜡，冷却至完全凝固（冰水浴加速但需避免冰晶）。六、判断题1.冰冻切片染色时，组织冷冻前无需固定（）答案：×解析：除快速诊断外，多数冰冻切片需先经4%多聚甲醛或乙醇短暂固定（1-5分钟），防止细胞内酶类破坏抗原或组织溶解。2.原位杂交（ISH）中，探针标记可使用生物素、地高辛或荧光素（）答案：√解析：生物素/地高辛标记用于酶联显色（如DAB），荧光素标记用于荧光显微镜观察，均为常用标记方法。3.组织标本长期保存时，10%中性福尔马林可无限期使用（）答案：×解析：福尔马林易氧化提供甲酸，导致pH降低，建议每3个月更换一次固定液，或添加0.5%碳酸镁中和酸。七、填空题1.瑞氏染色中，细胞胞质着色主要依赖染液中的（）成分，胞核着色主要依赖（）成分。答