(2025年)免疫组化理论知识考核题库与答案

(2025年)免疫组化理论知识考核题库与答案一、单项选择题1.免疫组化技术的核心原理是利用（）之间的特异性结合反应，通过标记物显色实现抗原定位检测。A.抗原与补体B.抗体与半抗原C.抗原与抗体D.抗体与糖蛋白答案：C2.以下哪种标记物常用于免疫组化显色系统，其显色产物为棕褐色且不溶于水？A.荧光素（FITC）B.碱性磷酸酶（AP）C.辣根过氧化物酶（HRP）D.胶体金答案：C3.中性福尔马林固定组织时，最适浓度为（），过高或过低均可能影响抗原保存。A.1%~3%B.4%~6%C.10%~15%D.20%~25%答案：B4.抗原修复过程中，热修复法（如高压锅、微波）的主要作用是（）。A.破坏组织中的酶活性B.断裂蛋白质间的甲醛交联键C.增加抗体的渗透能力D.清除组织中的脂类物质答案：B5.用于区分上皮源性肿瘤的常用标记物是（）。A.Vimentin（波形蛋白）B.CK（细胞角蛋白）C.S-100（神经组织标记）D.CD34（血管内皮标记）答案：B6.免疫组化实验中，“同型对照”的主要目的是（）。A.验证一抗的特异性B.排除二抗的非特异性结合C.确认组织中存在目标抗原D.检测显色系统的有效性答案：B7.以下哪种情况最可能导致免疫组化结果出现“背景过深”？A.抗体孵育时间过短B.封闭血清浓度过高C.洗涤步骤不充分D.抗原修复温度过低答案：C8.双免疫组化染色时，若两种一抗均来源于兔，需采用（）技术避免交叉反应。A.酶消化法B.顺序染色法C.热修复法D.生物素-亲和素系统答案：B9.内源性过氧化物酶活性较高的组织（如血细胞）需在实验前用（）处理以消除干扰。A.3%过氧化氢甲醇溶液B.10%中性福尔马林C.0.01M柠檬酸盐缓冲液D.5%牛血清白蛋白答案：A10.评估免疫组化结果时，“阳性细胞定位”的关键意义在于（）。A.判断抗体浓度是否合适B.区分特异性染色与非特异性染色C.计算阳性细胞比例D.确定组织是否固定良好答案：B11.以下哪种抗体属于多克隆抗体的特点？A.针对单一抗原表位B.特异性高但敏感性低C.可能与同源抗原交叉反应D.批间差异小答案：C12.免疫组化实验中，“阳性对照”应选择（）。A.已知不含目标抗原的组织B.与待测组织同类型的阳性组织C.空白载体（如PBS代替一抗）D.与待测组织不同来源的组织答案：B13.抗原修复液的pH值对结果影响显著，检测细胞核抗原（如Ki-67）时常用（）。A.酸性修复液（pH2.0~3.0）B.中性修复液（pH6.0~7.0）C.碱性修复液（pH8.0~9.0）D.强碱性修复液（pH10.0~11.0）答案：C14.免疫组化结果判读时，“弱阳性”通常指（）。A.阳性细胞比例<10%且染色强度弱B.阳性细胞比例10%~50%且染色中等C.阳性细胞比例>50%且染色强D.阳性细胞散在分布但无明确定位答案：A15.以下哪种固定方式最易导致抗原表位破坏？A.4℃中性福尔马林固定6小时B.室温乙醇固定30分钟C.未及时固定的组织室温放置4小时D.10%福尔马林固定24小时答案：C二、多项选择题1.影响免疫组化染色结果的关键因素包括（）。A.组织固定时间与方法B.抗体浓度与孵育时间C.洗涤液的离子强度D.实验室温度与湿度答案：ABCD2.常用的免疫组化显色系统包括（）。A.HRP-DAB系统B.AP-快红系统C.荧光素标记系统D.胶体金银染系统答案：ABCD3.关于抗原修复的描述，正确的有（）。A.酶消化法适用于对热敏感的抗原B.热修复需避免修复液完全蒸发C.修复时间过长可能导致组织脱落D.所有抗原均需进行抗原修复答案：ABC4.免疫组化质量控制的要点包括（）。A.设置阳性、阴性及同型对照B.使用经过验证的抗体C.记录实验条件（如温度、时间）D.定期校准实验设备答案：ABCD5.双标免疫组化的注意事项包括（）。A.两种一抗需来自不同种属B.显色剂应互不干扰（如DAB与快红）C.需先进行热修复再进行酶消化D.第二种抗体孵育前需彻底阻断第一种抗体答案：ABD6.导致免疫组化假阴性的常见原因有（）。A.抗原在固定过程中过度交联B.一抗效价降低或稀释过度C.显色时间不足或显色剂失效D.组织切片过厚（>5μm）答案：ABC7.关于抗体保存的描述，正确的有（）。A.长期保存应分装后-20℃冻存B.避免反复冻融C.短期使用可4℃保存（≤1个月）D.稀释后的抗体可室温保存答案：ABC8.评估免疫组化结果时需关注（）。A.阳性细胞的定位（胞膜/胞质/胞核）B.阳性细胞的比例（如0%~100%）C.染色强度（弱/中/强）D.背景染色的干净程度答案：ABCD9.内源性生物素干扰常见于（）。A.肝脏组织B.肾脏组织C.肠道组织D.淋巴结答案：ABC10.免疫组化在肿瘤诊断中的应用包括（）。A.确定肿瘤来源（如上皮/间叶/神经）B.评估增殖活性（如Ki-67）C.检测治疗靶点（如HER2、PD-L1）D.鉴别良恶性肿瘤答案：ABCD三、简答题1.简述免疫组化技术的基本流程。答案：基本流程包括：①组织取材与固定（常用4%中性福尔马林）；②脱水、透明、包埋（石蜡包埋）；③切片（厚度3~5μm）与贴片；④脱蜡复水（二甲苯脱蜡，梯度乙醇复水）；⑤抗原修复（热修复或酶消化）；⑥阻断内源性酶（如3%H₂O₂）；⑦封闭非特异性结合位点（血清封闭）；⑧孵育一抗（4℃过夜或室温1~2小时）；⑨洗涤后孵育二抗（与一抗种属匹配）；⑩显色（如DAB或快红）；⑪复染（苏木素染核）；⑫脱水透明封片；⑬显微镜观察与结果判读。2.解释“热修复”的作用机制及操作要点。答案：机制：甲醛固定会导致蛋白质分子间形成亚甲基交联，掩盖抗原表位；热修复通过高温（95℃~121℃）破坏这些交联键，使抗原表位重新暴露。操作要点：①选择合适的修复液（如柠檬酸盐缓冲液pH6.0或EDTA缓冲液pH8.0~9.0）；②修复时间需优化（通常10~30分钟），避免过长导致组织脱落；③修复后需自然冷却至室温，防止抗原表位再次隐蔽；④修复液需完全覆盖切片，避免干燥。3.如何解决免疫组化实验中“背景染色过深”的问题？答案：可能原因及解决措施：①封闭不充分：增加封闭血清浓度（如10%正常血清）或延长封闭时间；②抗体浓度过高或孵育时间过长：降低一抗/二抗稀释度，缩短孵育时间；③洗涤不彻底：增加洗涤次数（3次×5分钟），使用含0.05%Tween-2的PBS洗涤液；④试剂污染：更换新鲜配制的缓冲液，检查二抗是否过期；⑤内源性生物素或酶干扰：对富含生物素的组织（如肝、肾）使用无生物素检测系统，或提前用生物素阻断剂处理。4.比较单克隆抗体与多克隆抗体在免疫组化中的优缺点。答案：单克隆抗体：优点为特异性高（仅识别单一抗原表位）、批间差异小；缺点为可能因抗原表位变异导致漏检，对固定后变性的抗原敏感性较低。多克隆抗体：优点为敏感性高（识别多个抗原表位）、对变性抗原兼容性好；缺点为特异性较低（可能与同源抗原交叉反应）、批间差异大（不同动物来源效价不一）。5.简述免疫组化阳性对照的意义及选择原则。答案：意义：验证实验体系的有效性，确保“阴性结果”是由于组织中不含目标抗原，而非实验操作失败（如抗体失效、显色系统故障）。选择原则：①与待测组织类型相同（如同为腺癌）；②已知目标抗原强阳性（如用乳腺癌组织作为ER阳性对照）；③与待测组织同时处理（同批实验），确保实验条件一致；④若无法获取同源组织，可使用商品化阳性对照片。四、案例分析题案例1：某实验室对一例胃腺癌标本进行CK（细胞角蛋白）染色，结果显示切片整体染色极弱，阳性对照（已知CK阳性的肠癌组织）染色正常。分析可能原因及解决方法。答案：可能原因：①待测组织固定不当（如固定时间过短，抗原未充分保存；或固定时间过长，抗原过度交联）；②抗原修复不充分（胃腺癌可能需要更强的修复条件，如EDTA缓冲液pH9.0代替柠檬酸盐缓冲液）；③一抗与胃腺癌中的CK亚型不匹配（如使用CK7而胃腺癌主要表达CK20）。解决方法：①回顾组织固定记录，确认固定时间（建议4%中性福尔马林固定6~24小时）；②尝试调整抗原修复条件（如延长修复时间至30分钟或更换高pH修复液）；③更换一抗为广谱CK（如AE1/AE3）或针对胃腺癌常见CK亚型的抗体（如CK20）。案例2：某实验室进行HER2双标染色（兔抗HER2+鼠抗CK），结果显示两种显色（DAB棕褐色与AP快红色）大量重叠，无法区分。分析可能原因及改进措施。答案：可能原因：①两种一抗种属相同（均为兔或均为鼠），导致二抗交叉结合；②显色剂选择不当（如两种显色剂均为酶促反应，未使用物理阻断）；③第二种抗体孵育前未彻底阻断第一种抗体的残留结合位点。改进措施：①选择不同种属来源的一抗（如兔抗HER2+鼠抗CK）；②使用顺序染色法：先孵育第一种一抗及二抗-酶复合物，显色后用酸/醇灭活酶活性，再孵育第二种一抗及另一酶标记的二抗，最后二次显色；③在第二种抗体孵育前，用过量同种属IgG封闭第一种抗体的结合位点。案例3：某实验室进行CD3（T淋巴细胞标记）染色，结果显示阴性对照（PBS代替一抗）出现明显棕褐色背景，而阳性对照（淋巴结）染色正常。分析可能原因及处理方法。答案：可能原因：①二抗非特异