2026年生物医学实验室技术操作题库

2026年生物医学实验室技术操作题库一、选择题（每题2分，共20题）1.在进行酶联免疫吸附实验（ELISA）时，以下哪项操作是错误的？A.实验前需用酶标板清洗液彻底清洗酶标板B.加入标准品和样本时需使用不同吸头，避免交叉污染C.底物显色后应立即测定吸光度值，以免氧化影响结果D.实验过程中可使用乙醇擦拭酶标板表面以去除非特异性吸附2.离心机在操作时应注意什么？A.离心管必须对称放置，避免重心偏移B.高速离心时无需固定离心管盖，以节省时间C.离心后可直接倒置离心管，观察沉淀情况D.离心机可长时间连续运行，无需休息3.在进行聚合酶链式反应（PCR）实验时，以下哪项是PCR扩增的引物设计原则？A.引物长度应大于100bp，以提高扩增效率B.引物二聚体形成温度应低于PCR退火温度C.引物内部应存在发夹结构，以增强特异性D.引物3'端应含有多个G碱基，以促进延伸4.电泳实验中，以下哪项是琼脂糖凝胶电泳的注意事项？A.电泳缓冲液pH值应控制在6.0-8.0之间B.DNA片段越小，迁移速度越快C.电泳过程中可使用酒精清洗凝胶表面，以提高分辨率D.电泳结束后可直接用肉眼观察条带5.在进行流式细胞术实验时，以下哪项是细胞凋亡检测的常用方法？A.使用绿色荧光标记的AnnexinV/PI染料B.通过细胞表面标记物（如CD95）直接判断C.使用红色荧光标记的活细胞染料D.通过细胞核形态变化间接判断6.在进行WesternBlot实验时，以下哪项是转膜的注意事项？A.转膜时需使用甲醇预冷胶面，以提高转移效率B.转膜后可直接用抗体孵育，无需封闭C.转膜电压越高，转移效率越好D.转膜时间应控制在30分钟以内7.在进行细胞培养实验时，以下哪项是细胞传代的正确操作？A.直接用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗细胞，避免胰蛋白酶残留B.传代时需用移液枪轻轻吹打细胞，避免细胞脱落C.细胞接种密度应控制在1×10^4cells/cm²D.传代后可直接用抗生素处理，以防污染8.在进行微生物培养实验时，以下哪项是平板划线分离的注意事项？A.划线时需使用无菌接种环，避免污染B.划线后可直接用肉眼观察菌落形态C.划线前需用酒精灯火焰灭菌接种环30秒D.平板培养基需在高压蒸汽灭菌后立即使用9.在进行免疫组化（IHC）实验时，以下哪项是抗体孵育的注意事项？A.一抗孵育温度应控制在37℃-40℃之间B.二抗孵育时需使用封闭液，避免非特异性结合C.抗体浓度越高，染色效果越好D.孵育后可直接用DAB显色，无需清洗10.在进行实时荧光定量PCR（qPCR）实验时，以下哪项是内参基因选择的注意事项？A.内参基因表达量应与目标基因无关B.内参基因应稳定表达于所有实验组C.内参基因应使用低丰度引物，以提高灵敏度D.内参基因需经过预实验验证二、简答题（每题5分，共10题）1.简述酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本步骤。2.简述聚合酶链式反应（PCR）的原理及关键步骤。3.简述琼脂糖凝胶电泳的原理及注意事项。4.简述流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用原理。5.简述WesternBlot实验的基本步骤及关键点。6.简述细胞培养实验中无菌操作的注意事项。7.简述微生物培养实验中平板划线分离的原理及操作要点。8.简述免疫组化（IHC）实验的基本步骤及关键点。9.简述实时荧光定量PCR（qPCR）的原理及注意事项。10.简述生物医学实验室中生物安全柜的正确使用方法。三、操作题（每题10分，共5题）1.请描述进行聚合酶链式反应（PCR）实验的详细操作步骤，包括试剂准备、反应体系构建及结果检测。2.请描述进行琼脂糖凝胶电泳实验的详细操作步骤，包括凝胶制备、DNA样品加载及结果观察。3.请描述进行WesternBlot实验的详细操作步骤，包括转膜、抗体孵育及结果检测。4.请描述进行细胞培养实验的详细操作步骤，包括细胞接种、传代及冻存。5.请描述进行免疫组化（IHC）实验的详细操作步骤，包括组织固定、抗原修复及结果观察。答案与解析一、选择题答案1.D（乙醇会破坏包被抗体，影响结果）2.A（离心管需对称放置，避免失衡）3.B（引物二聚体形成温度应低于退火温度）4.A（琼脂糖凝胶电泳缓冲液pH值需控制在6.0-8.0）5.A（AnnexinV/PI染料是检测细胞凋亡的常用方法）6.A（甲醇预冷胶面可提高转移效率）7.B（传代时需用移液枪轻柔吹打，避免细胞脱落）8.C（划线前需灭菌接种环，避免污染）9.B（二抗孵育需用封闭液，避免非特异性结合）10.B（内参基因需稳定表达于所有实验组）二、简答题解析1.ELISA基本步骤：-包被：用酶标板包被抗体或抗原。-封闭：用封闭液封闭非特异性位点。-孵育：加入样本或标准品，孵育反应。-显色：加入酶底物，显色反应。-定量：用酶标仪测定吸光度值，计算结果。2.PCR原理及关键步骤：-原理：利用DNA聚合酶在体外扩增特定DNA片段。-关键步骤：变性（高温解链）、退火（低温结合引物）、延伸（中温延伸）。3.琼脂糖凝胶电泳原理及注意事项：-原理：利用电场使带电分子在凝胶中迁移，按大小分离。-注意事项：pH值、电压、DNA片段大小、凝胶浓度。4.流式细胞术检测细胞凋亡原理：-通过AnnexinV/PI染料结合细胞表面磷脂酰丝氨酸外翻和细胞膜完整性变化，检测凋亡。5.WesternBlot基本步骤及关键点：-步骤：电泳、转膜、封闭、孵育抗体、显色。-关键点：转膜效率、抗体特异性、结果定量。6.细胞培养无菌操作注意事项：-使用超净工作台、无菌器皿、酒精灯灭菌、避免污染。7.平板划线分离原理及操作要点：-原理：通过多次划线稀释细菌，获得单菌落。-操作要点：无菌接种环、分区划线、避免交叉污染。8.免疫组化（IHC）基本步骤及关键点：-步骤：组织固定、抗原修复、封闭、孵育抗体、显色。-关键点：抗原修复、抗体特异性、结果观察。9.qPCR原理及注意事项：-原理：通过荧光信号实时监测PCR扩增过程。-注意事项：内参基因选择、引物设计、反应体系优化。10.生物安全柜使用方法：-预清洁、检查滤网、戴手套操作、避免触碰内壁、定期维护。三、操作题解析1.PCR实验操作步骤：-试剂准备：PCR反应体系、引物、DNA模板、缓冲液、dNTPs、Taq酶。-反应体系构建：加入模板、引物、dNTPs、Taq酶、缓冲液，混匀。-程序设置：变性（95℃）、退火（55℃）、延伸（72℃），重复循环。-结果检测：琼脂糖凝胶电泳观察扩增产物。2.琼脂糖凝胶电泳操作步骤：-凝胶制备：称量琼脂糖、溶解、冷却、加入DNA染料。-DNA样品加载：用移液枪加载DNA样品及Marker。-电泳：接通电源、观察条带、拍照记录。3.WesternBlot操作步骤：-电泳：SDS分离蛋白质。-转膜：转移蛋白质至PVDF膜。-封闭：用封闭液封闭膜表面。-孵育抗体：孵育一抗、二抗。-显色：用ECL显色、成像系统检测。4.细胞培养操作步骤：-细胞接种：用移液枪接种细胞，控制密度。-传代：用胰蛋白酶消化细胞，重悬传