微生物细胞工厂研发工程师岗位招聘考试试卷及答案

微生物细胞工厂研发工程师岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（10题，每题1分）1.微生物细胞工厂常用的模式菌株中，大肠杆菌属于______（原核/真核）生物。2.基因工程表达载体必备的三个关键元件是复制原点、______和标记基因。3.微生物发酵中，溶解氧（DO）控制通常通过调节搅拌转速和______实现。4.构建重组质粒时，可连接平末端和粘性末端的DNA连接酶是______连接酶。5.代谢工程中，敲除分支途径关键酶增强目的产物合成的策略称为______。6.微生物细胞工厂的核心是实现目的产物的______合成（高效/随机）。7.发酵培养基中，碳源除供能外，还作为______的原料。8.qPCR可用于检测重组菌株中______的表达水平。9.蛋白纯化常用层析方法包括离子交换层析、______和亲和层析。10.细胞工厂构建流程包括目的基因克隆、载体构建、转化、______和发酵验证。二、单项选择题（10题，每题2分）1.重组蛋白原核表达最常用的菌株是：A.酿酒酵母B.大肠杆菌C.枯草芽孢杆菌D.毕赤酵母2.大肠杆菌导入重组质粒常用方法是：A.电穿孔法B.氯化钙转化法C.农杆菌介导法D.基因枪法3.调控目的基因表达强度的元件是：A.复制原点B.抗性基因C.启动子D.终止子4.发酵pH下降时常用的中和剂是：A.盐酸B.氢氧化钠C.氨水D.硫酸5.过表达目的途径关键酶的目的是：A.提高底物利用率B.增加副产物C.降低温度D.缩短周期6.检测重组蛋白分子量的方法是：A.SDSB.ELISAC.HPLCD.GC7.乙醇发酵常用菌株是：A.大肠杆菌B.酿酒酵母C.枯草芽孢杆菌D.黑曲霉8.限制酶切割不产生的末端是：A.粘性末端B.平末端C.突出末端D.环状末端9.判断菌株生长阶段的常用指标是：A.DO浓度B.OD值C.培养基体积D.搅拌功率10.去除发酵液菌体的步骤是：A.层析B.离心C.透析D.干燥三、多项选择题（10题，每题2分）1.微生物细胞工厂常用表达系统包括：A.大肠杆菌B.毕赤酵母C.动物细胞D.植物细胞2.重组质粒构建关键步骤包括：A.目的基因获取B.载体酶切C.连接反应D.转化3.发酵优化主要参数包括：A.温度B.pHC.DOD.搅拌转速4.代谢调控策略包括：A.关键酶过表达B.分支途径阻断C.辅因子补充D.转录因子调控5.检测重组菌株稳定性的方法包括：A.连续传代测基因保留率B.发酵测产物产量变化C.PCR鉴定D.测序验证6.蛋白纯化常用方法包括：A.离子交换层析B.亲和层析C.凝胶过滤层析D.疏水层析7.发酵常用碳源包括：A.葡萄糖B.蔗糖C.淀粉D.甘油8.重组菌株筛选标记包括：A.抗生素抗性基因B.营养缺陷型基因C.荧光蛋白基因D.酶活性基因9.影响微生物生长的环境因素包括：A.温度B.pHC.DOD.渗透压10.细胞工厂应用领域包括：A.生物医药B.食品工业C.化工D.农业四、判断题（10题，每题2分）1.大肠杆菌无内质网，无法对重组蛋白糖基化修饰。（）2.毕赤酵母可实现重组蛋白分泌表达，便于纯化。（）3.限制酶只能识别切割双链DNA特定序列。（）4.发酵DO越高，菌株生长越好。（）5.过表达所有途径酶可提高目的产物产量。（）6.SDS分离蛋白与分子量相关，与电荷无关。（）7.酿酒酵母导入重组质粒常用电穿孔法。（）8.发酵氮源仅提供氮元素，不参与能量代谢。（）9.qPCR可定量检测目的基因mRNA水平。（）10.细胞工厂构建无需考虑目的产物毒性。（）五、简答题（4题，每题5分）1.简述微生物细胞工厂构建的基本流程。2.原核（大肠杆菌）与真核（毕赤酵母）表达系统的主要区别。3.发酵中DO控制的重要性及常用调控方法。4.简述蛋白纯化的基本步骤。六、讨论题（2题，每题5分）1.如何从基因工程和发酵工艺两方面提高目的产物产量？2.重组菌株发酵中产物产量下降的可能原因及解决方法？答案部分一、填空题答案1.原核2.启动子3.通气量4.T4DNA5.途径阻断6.高效7.细胞物质合成8.目的基因（mRNA）9.凝胶过滤层析10.重组菌株筛选二、单项选择题答案1.B2.B3.C4.C5.A6.A7.B8.D9.B10.B三、多项选择题答案1.AB2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABC6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABCD四、判断题答案1.√2.√3.√4.×5.×6.√7.√8.×9.√10.×五、简答题答案1.构建流程：①目的基因获取（PCR/基因合成）；②载体构建（酶切-连接重组表达载体）；③转化（重组载体导入宿主）；④筛选（标记基因筛选阳性克隆）；⑤发酵验证（摇瓶/罐发酵测产物）；⑥优化（代谢/工艺调控提高产量）。2.主要区别：①宿主：原核无真核细胞器，真核有内质网/高尔基体；②修饰：原核无糖基化，真核可实现；③表达：原核多包涵体（需复性），真核多分泌（易纯化）；④培养：原核生长快/培养基简单，真核生长慢/培养基复杂；⑤应用：原核适用于无修饰蛋白，真核适用于需修饰蛋白（如抗体）。3.DO控制：①重要性：DO不足抑制生长/产厌氧副产物，过高产生活性氧损伤细胞；②调控：通气量调节（增加流量）、搅拌转速（增强传质）、在线监测（反馈控制）、补料策略（控制碳源流速）。4.纯化步骤：①粗分离（离心/过滤除菌体）；②初步纯化（盐析/沉淀浓缩）；③精细纯化（亲和/离子交换/凝胶层析）；④脱盐浓缩（透析/超滤）；⑤质量检测（SDS/ELISA测纯度活性）。六、讨论题答案1.提高产量策略：①基因工程：过表达限速酶、阻断分支途径、更换强启动子、辅因子工程（补充NADH）；②发酵工艺：优化碳氮源比例、在线调控温度/DO/pH、分批补料（避免底物抑制）、连续发酵提高效率。例如，酿酒酵母过表达乙醇脱氢酶+补料葡萄糖，可提高乙醇产