细胞培养基无菌配制技师（中级）考试试卷及答案

细胞培养基无菌配制技师（中级）考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.细胞培养基常用的基础液类型包括MEM、DMEM和______。2.无菌过滤培养基的滤膜孔径通常为______μm。3.血清灭活的标准温度是______℃，时间30分钟。4.CO₂培养箱维持培养基pH的常用CO₂浓度为______%。5.培养基中调节pH的主要试剂是______。6.超净工作台使用前紫外线消毒时间一般为______分钟。7.含血清培养基的储存温度通常为______℃（避光）。8.细胞培养基中常用的抗生素组合是______-链霉素。9.培养基无菌检测需在______℃条件下培养7天。10.细胞培养基的渗透压正常范围是______mOsm/kg。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.细胞培养基的适宜pH范围是（）A.6.0-6.5B.7.0-7.4C.7.8-8.2D.8.5-9.02.以下不能高压灭菌的试剂是（）A.双蒸水B.血清C.基础培养基粉末D.抗生素溶液3.过滤除菌前，含血清培养基通常需先（）A.离心B.煮沸C.加酒精D.加NaOH4.超净工作台的HEPA滤膜主要过滤（）A.细菌B.病毒C.真菌孢子D.颗粒5.培养基中加入血清的主要作用是（）A.调节渗透压B.提供生长因子C.杀灭细菌D.稳定pH6.无菌操作时，手消毒常用（）A.75%酒精B.0.1%新洁尔灭C.碘伏D.双氧水7.无血清培养基的储存温度可选择（）A.4℃B.-20℃C.室温D.37℃8.培养基无菌检测不合格的表现是（）A.无浑浊B.无菌落C.出现菌落D.pH稳定9.以下属于细胞培养基缓冲对的是（）A.NaHCO₃-CO₂B.NaCl-HClC.葡萄糖-蔗糖D.血清-白蛋白10.超净工作台使用时，风机开启时间应不少于（）A.1分钟B.5分钟C.10分钟D.15分钟三、多项选择题（每题2分，共20分）1.细胞培养基无菌配制的关键要点包括（）A.超净台消毒B.手消毒C.试剂无菌D.避免交谈2.血清灭活的目的是（）A.灭活补体B.杀灭支原体C.去除细菌D.稳定营养成分3.培养基pH异常的原因可能是（）A.NaHCO₃添加不足B.CO₂浓度偏离C.温度过高D.试剂污染4.过滤除菌的注意事项有（）A.滤膜孔径0.22μmB.避免滤膜破裂C.过滤前排气泡D.过滤后立即使用5.细胞培养基常用的抗生素是（）A.青霉素B.链霉素C.庆大霉素D.四环素6.培养基储存的要求是（）A.4℃避光B.避免反复冻融C.密封D.加血清后立即用7.无菌检测的方法包括（）A.直接接种法B.薄膜过滤法C.PCR法D.显色法8.影响培养基渗透压的因素是（）A.盐浓度B.葡萄糖含量C.血清含量D.pH9.超净工作台维护要点（）A.定期更换HEPA滤膜B.检测风速C.避免紫外线直射物品D.保持台面清洁10.细胞培养基的组成成分包括（）A.基础培养基B.血清C.抗生素D.NaHCO₃四、判断题（每题2分，共20分）1.所有细胞培养基都可高压灭菌（×）2.血清灭活温度为56℃，时间30分钟（√）3.培养基pH用1mol/LNaOH微调（√）4.无菌操作时可触碰无菌器材的边缘（×）5.培养基过滤后应立即分装（√）6.CO₂培养箱浓度需维持5%（√）7.PBS是细胞培养基的一种（×）8.含血清培养基可长期冻存（×）9.无菌检测需培养7天（√）10.超净工作台使用前需开启风机（√）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述细胞培养基无菌配制的基本流程答案：①准备无菌器材（滤器、培养瓶等）；②超净台紫外线消毒20min，开启风机5min；③称量基础培养基、NaHCO₃，加双蒸水溶解；④加灭活血清、抗生素；⑤0.22μm滤膜过滤除菌；⑥分装贴标签（名称、日期）；⑦4℃避光储存（含血清）或-20℃冻存（无血清）。2.血清灭活的注意事项有哪些？答案：①水浴锅恒温56℃±1℃，避免局部过热；②灭活后立即冰浴降温；③检查血清是否浑浊（浑浊弃用）；④避免反复冻融；⑤灭活后可加抗生素降低污染风险。3.培养基pH异常的调整方法？答案：①用1mol/LHCl（降pH）或NaOH（升pH）微调；②校准CO₂培养箱浓度；③避免培养基长时间高温暴露；④若污染则弃用，重新配制。4.无菌检测的结果如何判断？答案：①直接接种法：10ml培养基接种后37℃培养7天，无浑浊、无菌落为合格；②薄膜过滤法：100ml培养基过滤后培养，无生长为合格；出现浑浊或菌落则不合格。六、讨论题（每题5分，共10分）1.如何有效避免培养基配制中的污染？答案：①环境：超净台定期消毒（紫外线+酒精），实验室通风；②器材：高压/干热灭菌所有器材；③操作：戴无菌手套、口罩，避免交谈，手消毒；④试剂：血清灭活，抗生素按比例添加；⑤监控：配制后立即无菌检测，过滤避免滤膜破裂，分装密封。2.不同细胞系对培养基的要求有何差异？答案：①营养：HeLa用DMEM，淋巴细胞用RPMI1640；②血清：贴壁细胞（成纤维细胞）需10%，悬浮细胞（白血病细胞）5%-10%；③缓冲：依赖CO₂的用NaHCO₃，低血清用HEPES；④添加剂：神经细胞需NGF，干细胞需生长因子。选择需参考细胞系文献，预实验验证生长状态。答案汇总一、填空题1.RPMI16402.0.223.564.55.NaHCO₃6.207.48.青霉素9.3710.260-320二、单项选择题1.B2.B3.A4.C5.B6.A7.B8.C9.A10.