细胞传代操作规范考核试卷

细胞传代操作规范考核试卷考试时长：120分钟满分：100分一、单选题（总共10题，每题2分，总分20分）1.细胞传代操作中，以下哪种培养基成分是主要提供碳源和能量？A.氨基酸B.葡萄糖C.维生素D.胰蛋白酶2.当细胞生长至接近培养皿底部80%-90%时，应进行传代，其主要目的是？A.防止细胞过度拥挤B.促进细胞快速增殖C.降低培养基消耗D.增加细胞异质性3.以下哪种方法不属于常用的细胞消化方式？A.胰蛋白酶消化B.EDTA消化C.酚-氯仿提取D.PBS洗涤4.细胞传代过程中，离心速度通常设定为多少？A.1000rpmB.3000rpmC.5000rpmD.8000rpm5.以下哪种容器材质最适合长期培养贴壁细胞？A.透明聚丙烯B.透明聚碳酸酯C.透明聚四氟乙烯D.透明聚乙烯6.细胞冻存时，常用的保护剂是？A.胰蛋白酶B.DMSO（二甲基亚砜）C.PBS缓冲液D.葡萄糖7.细胞接种密度过高可能导致？A.细胞凋亡B.细胞分化C.细胞衰老D.细胞融合8.以下哪种操作不属于无菌操作规范？A.手臂消毒后伸入超净台B.培养皿边缘用酒精灯火焰灭菌C.培养基直接倒入培养皿D.吸管头在火焰上烧灼9.细胞传代过程中，消化时间过长可能导致？A.细胞活力下降B.细胞形态改变C.细胞污染D.细胞数量减少10.以下哪种细胞类型最适合用于快速传代实验？A.成纤维细胞B.神经胶质细胞C.癌细胞D.胚胎干细胞二、填空题（总共10题，每题2分，总分20分）1.细胞传代前，需用______对培养皿进行彻底清洗。2.胰蛋白酶消化后，需用______终止消化反应。3.细胞冻存时，常用______作为保护剂。4.细胞接种密度通常为______×10^4cells/cm²。5.细胞消化过程中，可通过______观察细胞状态。6.细胞冻存管需在______条件下保存。7.细胞传代过程中，离心速度通常为______×g。8.无菌操作时，需用______对超净台进行消毒。9.细胞接种前，需用______对培养皿进行灭菌。10.细胞冻存时，常用______作为冻存液基础。三、判断题（总共10题，每题2分，总分20分）1.细胞传代时，消化时间越长越好。（×）2.细胞冻存时，可直接将细胞悬液倒入冻存管。（×）3.细胞接种密度越高，细胞生长越快。（×）4.细胞消化后，需用PBS清洗3次。（√）5.细胞冻存时，需缓慢降至-80℃。（√）6.细胞传代过程中，离心速度越高越好。（×）7.细胞接种前，需用酒精灯火焰灭菌培养皿边缘。（√）8.细胞冻存时，常用DMSO作为保护剂。（√）9.细胞消化过程中，可通过显微镜观察细胞状态。（√）10.细胞传代时，可直接将细胞悬液倒入培养皿。（×）四、简答题（总共3题，每题4分，总分12分）1.简述细胞传代的基本步骤。答：①消化细胞：用胰蛋白酶消化贴壁细胞；②终止消化：加入含血清的培养基终止消化；③收集细胞：用吸管吹打形成细胞悬液；④离心收集：1000rpm离心5分钟；⑤重悬细胞：用新鲜培养基重悬细胞；⑥接种细胞：按预定密度接种到培养皿中。2.细胞冻存时，为何需加入DMSO？答：DMSO作为冷冻保护剂，可降低细胞内水分结冰的损伤，同时提高细胞对低温的耐受性。3.细胞传代过程中，如何判断细胞消化程度？答：可通过显微镜观察细胞形态，消化适度的细胞呈圆形，边缘清晰；过度消化则细胞破碎，边缘模糊。五、应用题（总共2题，每题9分，总分18分）1.某实验室需将培养皿中的成纤维细胞传代到新的培养皿中，请详细描述操作步骤及注意事项。答：操作步骤：①消化细胞：用移液枪加入1mL胰蛋白酶（含0.02%EDTA）于培养皿中，置于37℃孵育2-3分钟；②观察细胞：显微镜下观察细胞变圆，边缘起皱即可终止消化；③终止消化：加入3mL含血清的培养基终止消化；④收集细胞：用吸管吹打形成细胞悬液，1000rpm离心5分钟；⑤重悬细胞：弃上清，加入新鲜培养基重悬细胞；⑥接种细胞：按1×10^4cells/cm²密度接种到新的培养皿中。注意事项：①消化时间不宜过长，防止细胞损伤；②无菌操作，避免污染；③接种密度不宜过高，防止细胞过度拥挤。2.某研究人员需将细胞冻存备用，请详细描述冻存及复苏步骤，并说明关键点。答：冻存步骤：①收集细胞：按上述传代步骤收集细胞，调整细胞浓度至1×10^6cells/mL；②加入冻存液：加入等体积的冻存液（含10%DMSO和90%FBS）；③分装冻存管：每管1mL细胞悬液；④预冷：将冻存管置于-4℃预冷1小时；⑤冷冻：4℃→-20℃（2小时）→-80℃（24小时）；⑥保存：-80℃冰箱长期保存。复苏步骤：①解冻：37℃水浴快速解冻；②重悬：加入预温培养基重悬细胞；③接种：按1×10^4cells/cm²密度接种到培养皿中。关键点：①DMSO浓度需准确，过高损伤细胞，过低保护不足；②冷冻过程需缓慢，防止细胞内结冰；③复苏时需快速解冻，避免细胞失水。【标准答案及解析】一、单选题1.B葡萄糖是主要碳源，提供细胞能量。2.A防止细胞过度拥挤导致生长停滞。3.C酚-氯仿提取用于核酸提取，非细胞消化。4.A1000rpm离心力适中，避免细胞损伤。5.B聚碳酸酯材质透明度高，适合长期培养。6.BDMSO是常用冷冻保护剂。7.A接种密度过高导致细胞缺氧凋亡。8.C培养基需灭菌后使用。9.B过度消化导致细胞形态改变。10.C癌细胞增殖速度快，传代周期短。二、填空题1.高压蒸汽灭菌2.含血清的培养基3.DMSO4.1×10^45.显微镜6.-80℃7.10008.70%酒精9.干热灭菌10.PBS缓冲液三、判断题1.×过度消化损伤细胞。2.×需预冷后再冷冻。3.×过高密度导致生长停滞。4.√PBS清洗去除残留胰蛋白酶。5.√缓慢降温减少结冰损伤。6.×高速离心损伤细胞。7.√灭菌防止污染。8.√DMSO是常用保护剂。9.√显微镜观察消化程度。10.×需预温培养基重悬。四、简答题1.细胞传代基本步骤：消化细胞→终止消化→收集细胞→离心收集→重悬细胞→接种细胞。2.DMSO降低细胞内水分结冰损伤，提高低温耐受性。3.通过显微镜