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文档简介

DNA片段的扩增及电泳鉴定

抗除草剂大豆MON89788图示大豆是抗除草剂大豆MON89788吗？如何鉴定？提取大豆DNAPCR扩增抗除草剂基因（MON89788）电泳鉴定鉴定转基因大豆的流程一.实验设计组别阳性对照阴性对照实验组样品MON89788标准质粒

普通大豆待测大豆

结果一.实验设计二.进行实验（一）PCR扩增目的基因MON89788标准质粒

普通大豆DNA

待测大豆DNA

材料用量2×DetPCRMasterMix10μL正向引物(10μM)0.5μL反向引物(10μM)0.5μL模板DNA（用量为1pg-1μg）1μLddH2O补至20μL二.进行实验（一）PCR扩增目的基因移液离心扩增循环程序变性复性延伸预变性94℃,3min35循环94℃,30s55℃,30s72℃,1min终延伸72℃,5min//二.进行实验二.进行实验（二）琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理是什么？二.进行实验（二）琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理是什么？原理：DNA分子在中性条件下会带负电，在电场的作用下，DNA会朝着正极移动。DNA分子在凝胶中的迁移速率与DNA分子的大小和构象有关，DNA分子的碱基越少，迁移的速度越快。凝胶中的DNA分子可以通过染色，在紫外灯下被检测出来。二.进行实验（二）琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物1、制作琼脂糖凝胶2、电泳3、观察二.进行实验称琼脂0.3g，倒入锥形瓶中（1）称量（2）溶解向锥形瓶中倒入加入了核酸染料的TAE30mL，放入微波炉加热1min（3）组装制胶槽（4）倒胶倒胶，静置20min1、制作琼脂糖凝胶二.进行实验（1）组装电泳槽电泳槽中放入足量TAE，将凝固的琼脂糖凝胶放入电泳槽中，点样孔一端放在负极（黑色端）（2）加样吸取样品

10μL，分别打入相应点样孔内2、电泳二.进行实验2、电泳泳道1泳道2泳道3泳道4Mark阳性对照

阴性对照待测大豆

MARKERSample1Sample2Sample3二.进行实验3、观察Mark待测大豆阳性对照阴性对照点样孔1000bp500bp200bp100bp二.进行实验3、观察三.分析结果，得出结论（一）待测大豆是否为转基因大豆？原因是什么？（二）根据对照组的现象判断，实验结果是否可信？三.分析结果，得出结论MARKER阳性对照阴性对照待测大豆200bp100bp三.分析结果，得出结论（一）待测大豆是否为转基因大豆？原因是什么？（二）根据对照组的现象判断，实验结果是否可信？待测大豆不是为转基因大豆，实验组没有出现抗除草剂基因的条带可信，阳性对照出现条带，长度与MON89788基因相同（139bp）阴性对照未出现条带三.分析结果，得出结论（三）联系电泳的原理，思考：出现的产物一定是MON89788吗？也有可能是它的基因，因为电泳条带表示的是基因的长度，而不是特定的序列，因此产物有可能是长度与抗除草剂基因相同或相似的其他基因。三.分析结果，得出结论MARK

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