(新教材)2023届高考生物一轮复习特训卷考点35微生物的培养技术及应用

考点35微生物的培养技术及应用

第一关小题自助餐自选狂刷

题组一刷基础小卷一一固知识

1.［2022•甘肃兰州一中高三试题］平板冷却凝固后要将平板倒置，其目的是（）

A.利于大肠杆菌的生长

R.防止空气进入

C.利于培养基的冷却

D.防止皿盖冷却水落入培养基造成污染

2.［经典模拟］下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是（）

成分蛋白腺葡萄糖K.HP0.伊红美蓝蒸馆水

含量10g10g2g0.4g0.065g1000mL

A.从物理性质看，该培养基属于液体培养基；从用途看，该培养基属于选择培养基

B.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白陈

C.该培养基缺少提供生长因子的物质

D.该培养基调节合适的山后就可以接种使用

3.［经典模拟］微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方

面也要进行无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是（）

①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽抱②接种操作要在酒精灯火焰附近

进行③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡

萄进行灭菌⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

A.B.②®C.③⑤I）.@@

4.［2022•四川乐山四校联考］某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实

验，实验过程包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此实验相关问

题的叙述中，正确的是（）

A.实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉

B.利用平板划线法对细菌进行分离、纯化并计数

C.观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照实验

D.培养基中含有的蛋白陈、淀粉可分别为细菌培养提供氮源和碳源

5.［2022•安徽省黄山市高三“八校联考”］蓝白底筛选是基因工程中筛选重组目的基

因常用的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落,可以颜色为依据直接筛选重组菌。

用于筛选的菌为B-半乳糖甘酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码B-半乳糖甘酶的部分缺失，

不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌B-半乳糖俘酣

缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个限制性酶切位点，便于插入H的基因。B-

半乳糖苜酶能够作用于一种无色化合物X-gal,使其变成蓝色物质。回答下列问题：

（1）玻璃和金属材质的实验器材利用方法灭菌。

（2）培养基灭菌后，需要冷却到°C左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝

要将平板倒置，其原因是o

（3）为防止杂菌污染，培养基中要添加_______o蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中

添加了O

（4）最终培养基出现的白色的菌落是（）

A.目的基因和载体结合

B.只含目的基因

C.只含载体

（5）若需要长期保存该菌种，可采用的方法是。

题组二刷提升小卷一一培素养

6.[2022•湖北襄阳市模拟]下列有关细菌培养的叙述，正确的是（）

A.不同细菌的菌落特征一般相同

B.在培养基中加入青霉素可促进细菌生长

C.用液休培养基培养破伤风杆菌的过程中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长

D.培养醋酸杆菌时，往培养液中通入氧气可以促进菌体快速增殖

7.[2022•辽宁沈阳市模拟]下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是（）

A.微生物培养基中产不都必须添加碳源或氮源

B.倒平板时，应将打开的培养皿皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C.接种前后，接种衣都要在酒精灯火焰上进行灼烧

D.实验结束后，带菌的培养基必须经灭菌处理后才能倒掉

8.[2022•天津市高三二模]为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员用被石油

污染过的土壤进行如图A所示的实验。同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的

菌落分布如图B所示。下列叙述错误的是（）

A.步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是步骤③的培养基中石油是唯一碳源

B.步骤⑤振荡培养的目的是提高培养液溶氧量，同时使菌体与培养液充分接触

C.图B培养基的结果可能是由于涂布不均匀造成的

D.步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出能分解石油的细菌

9.[2022•湖北襄阳市一模]巴氏杀菌乳是以生牛（羊）乳为原料，经巴氏杀菌等工序制

得的液体产品，杀灭了牛奶中有害菌群的同时也保存了营养物质和纯正口感。据国家标准每

毫升合格巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过5（）（）00个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶合适的消

毒温度的探究，相关实验操作不合理的是（）

A.配制牛肉膏蛋白陈培养基并在121℃、100kPa条件下处理15〜30min

B.将等量的新鲜牛奶分别置于60℃、70℃、80℃、90℃恒温水浴锅中处理3Dmin

C.对处理后的牛奶进行梯度稀释后，利用涂布法接种平板并在37℃下培养24h

I）.统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为牛奶最适消毒温度

10.某同学从植物中提取了W物质，并研究其抑菌效果。在平板中央处打孔后加入提取

物W,在适宜条件下培养一段时间测量抑菌圈的大小并计算抑菌圈平均增幅速率，实验方法

和结果如下图所示。据图分析下列说法错误的是（）

□提取物W丁散时间/h

A.将一定量菌液与冷却后的灭菌培养基混匀并倒平板可得到试验菌平板

B.在平板上打孔的钢管需要灼烧灭菌，目的是防止微生物污染平板

C.提取物代在培养基中扩散，加入提取物W后的2小时可获得最佳抑菌效果

【）.菌体浓度、提取物W的浓度和扩散时间会对抑菌圈直径的大小造成影响

题组三刷专项小卷一一提考能

11.[2022•阜新市高三模拟]（不定项选择）下列关于无菌操作的叙述正确的是（）

A.对培养皿中的菌株进行稀释时，盛有无菌水的试管仅消毒处理，会造成杂菌污染

B.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

C.利用组织培养技术繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒

D.接种时灼烧接种扑后立刻对苗种划线

12.[2021-江苏苏州市二模]（不定项选择）自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2

的细菌，将玉米种子用自身固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研

人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。以下叙述

正确的是（）

扩

大

培

养

磅固

能Ml

力

鉴

定

A.步骤①土样应取自当地深层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍

B.自生固氮菌是自养型生物，不可用血细胞计数板来计数土壤悬浮液中的菌体数

C.步骤②需充分振荡20min,主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中

D.步骤④所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源

13.[2022•江苏盐城市高三模拟]（不定项选择）乳链菌肽对许多革兰氏阳性菌，尤其是

对引起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，研究人员从新鲜牛奶中获得多株产乳链菌肽的

菌株，筛选并纯化菌株。为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌

性杀死细菌（细胞破裂）还是非溶菌性杀死细菌，科研人员将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液

中，随着发酵时间的延长，检测革兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实

验结果如图所示。下列叙述正确的是（）

2.核酸含量

3.加入乳链菌肽后的活菌数

A.制备培养基时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量氯化钠，以维持渗透

压

B.纯化的菌株临时保藏需要先接种到试管的固体斜面培养基上在合适的温度下培养，长

成菌落后放入4℃冰箱中保藏

C.以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为抑制细菌生长

D.口服乳链菌肽，不会改变人体肠道中的正常菌群，也不会进入内环境，推测可能的

原因是被消化道中蛋白酶所降解而被人体消化

14.（不定项选择）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。

下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（）

A.生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品

B.筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C.在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化

D.斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株

15.（不定项选择）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述不正确的是（）

A.高压灭菌加热结束后，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C.为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落

I）.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

16.（不定项选择）桔秆还田可增加土壤肥力，缓解环境污染。为分离分解纤维素的微生

物菌种，实现废物的资源化利用，研究人员设计了“土壤取样一选择培养一梯度稀释一涂布

平板一挑选菌株”的实验流程。下列叙述正确的是（）

A.配制培养基时，应在高压蒸汽灭菌之后调节pH

B.选择培养时，应使用纤维素为唯一碳源的培养基

C.进行梯度稀释时，应在酒精灯火焰旁完成各种操作

I）.挑选菌株后，应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃

题组四刷真题小卷一一登顶峰

17.[2021-天津卷]下列操作能达到灭菌目的的是i）

A.用免洗酒精凝胶搂手

B.制作泡菜前用开水烫洗容器

C.在火焰上灼烧接种环

D.防疫期间用石炭酸喷泗教室

18.[2021•浙江6月选考]下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是（）

A.测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板

B.红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数

C.涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细胞计数

D.酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度

19.[2021•山东卷]解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。

脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等曷接种

在醇溶青琼脂平板上培养，甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误

的是（）

A.甲菌属于解脂菌

B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源

C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比

D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力

20.[2021•北京卷]人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。

下述操作不正确的足（）

A.对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌

B.使用无菌棉拭子从皮肤表面取样

C.用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布

D.观察菌落的形态和颜色等进行初步判断

21.

[2021•山东卷]含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化

氢可以与硫酸亚铁铁结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种

菌的运动能力，用穿刺接种的方法分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铉的培养基上进行培

养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（）

A.乙菌的运动能力比甲菌强

B.为不影响菌的运匆需选用液体培养基

C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量

D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染

22.[2020•浙江7月]下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（）

A.利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物

民配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH

C.酵母菌不能直接利用糯米淀粉发醉得到糯米酒

I）.适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化

第二关大题自助餐自选精做

题组一等级考试题专项练

1.[2021•湖南卷]大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子

量可达12〜38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫

粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：

(1)纤维素睡是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即o

为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以为唯一碳源的固体培

养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于________培养基。

(2)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是。检测固体培

养基灭菌效果的常用方法是o

(3)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路___________

(4)为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌,

在37c条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是

菌株________,理由是—

秸秆残秸秆失重纤维素降

菌株秸秆总重(g)

重(g)'：%)解率魄)

A2.001.5124.5016.14

B2.001.5323.5014.92

C2.001.4229.0023.32

2.[2021•浙江1月，节选]回答下歹此一)小题：

(•)某环保公司从淤泥中分离到•种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了

固定化菌株。

(1)从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或法，两种方法均能在固体培养基上

形成________。对分离的菌株进行诱变、和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污

水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。

3.[2021•广东卷]中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H,以糖蜜(甘

蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖)为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材

料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。

搅拌器

U〉pH调节

开放式发酹系统

回答下列问题：

(1)为提高菌株II对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为

，并不断提高其浓度，经多次传代培养(指培养一段时间后，将部分培养物转入新

配的培养基中继续培养)以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用的方法

进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有

等。(答出两种方法即可)

(2)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵

系统，其培养基盐浓度设为60g/L,pH为10,菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统

不需要灭菌的原因是_______________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

(答出两点即可)

(3)研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果

发现发醉液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发

酵条件中可能是高密度培养的限制因素。

(4)菌株H还能通过分解餐厨垃圾(主要含蛋白质、淀粉、油脂等)来生产PHA,说明其

能分泌.

4.[2021•浙江6月，节选]回答下列(一)小题：

(一)回答与甘蔗醋制作有关的问题：

(1)为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的u.蔗渣为材料进行筛选。首先配制

醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH/0】、MgSOi溶解并定容，调节pH,再高压蒸汽灭

菌，经后加入3$体积的无水乙醇。然后将10g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养

基，振荡培养24h。用_______将少量上述培养液涂布到含CaCCh的分离培养基上，在30C

培养48ha再挑取分离培养基上具有的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成

分相同的培养基上培养24h后，置于4c冰箱中保存。

(2)优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取

合适接种量的菌液在30℃,15()r/min条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不

再上升，或者培养液中含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸

量高外，还应有________

________________________________________________________________________(答

出2点即可)等特点。

5.[2020•江苏卷]产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科

研人员开展了相关研究。请回答下列问题：

(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是(填编号)。

编号①②③④

物品培养基接种环培养皿涂布器

灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧

(2)称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经________后，获

得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌

悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌________个。

(3)为了进一步提高醉母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行

育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间

后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。

(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌

株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株进行后续相关

研究，理由是一

培养时间

6.[2018•江苏卷，31]酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来

源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。

研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下

列问题：

①称质土样②梯度稀糅③平板浇④划线⑤扩大

注分离纯化培养

(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基

的,及时对培养基进行分装，并进行灭菌。

(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约

________(在25℃、50℃或80C中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。

(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有

a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌

b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落

c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量

d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株

(4)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和________供应。

为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25X

16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上色细胞的个数应不少于

,才能达到每亳升3X109个活细胞的预期密度，

题组二科学探究类专项练

7.[2022•广西北海市模拟]某研究小组发现类产碱假单胞菌对黄脊竹蝗有较强的感染

力，并可引起其发病死亡，该小组成员以此展开实验探究。回答下列问题：

(1)用来培养类产碱假单胞菌的培养基为牛肉膏蛋白陈培养基，在此培养基中，为微生

物提供碳源的物质是。培养基配制时，灭菌和调pH的先后顺序

为o对培养基进行灭菌所用的仪器是o

(2)在培养类产碱假单胞菌的过程中，培养皿应倒置培养，其原因是。

(3)进行实验时，若要频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用

方法对其进行保存，这种方法的缺点是o

(4)研究发现：黄脊竹蝗幼虫在自然状态下感染类产碱假单胞菌后，于24小时后开始死

亡，72小时达到死亡高峰，染病后出现行动迟缓，伴有轻微痉挛的现象。为验证此菌是蝗

虫致死的原因，该研究小组成员从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并用该菌

___________________,观察到的现象是__________________________________________

8.[2021•金太阳大联考]褐煤碳化程度低、易挥发、易自燃，易污染环境，不利于储

存和远距离运输。利用微生物处理对褐燥进行气、液转化降解，形成清洁、经济有效的能源

物质，对保护环境及油气安全供应有着重要意义。回答下列相关问题：

(1)为了筛选到能高效降解褐煤的细菌，应选择的采集样本的场所为;筛选

时采用的培养基应该以为唯一碳源，可用法接种。

(2)研究者利用营养肉汁琼脂培养基(如下)进行实验，拟从4种备选细菌中筛选出对某

地褐煤降解效率高的菌种，

蛋白陈氯化钠牛肉浸取物琼脂蒸播水

5.0g5.0g3.0g15.0g1.0L

pH值调至7

①营养肉汁琼脂培养基中，蛋白陈的作用是，琼脂的作用是

②完成筛选的实验思路：在适宜条件下分别培养等审的4种备选细菌，分别加入

,一段时间后o

9.[2022•吉林长春市高三模拟]2021年6月1口起，江浙沪Starbucks所有门店将全

面试用Foopak生物可降解饮品杯。该饮品杯经填埋处理后，能被微生物经分解作用完全降

解・，可昔代传统塑料及普通部分降解饮品杯，从而避免“白色污染回答下列问题：

(1)从填埋Foopak生物可降解饮品杯的土壤中分离Foopak分解菌时，应先从土壤取

样，并接种在液体培养基上进行选择培养，目的是:再将选择后的样品进

行梯度稀释，接种到固体培养基上，需进行梯度稀释的原因是

____________________________________________________________________________O

(2)在整个分离过程中无杂菌污染，培养基上出现多种菌落特征，最可能的原因是

(3)在测定培养液中Foopak分解菌的数量时，需至少做三个重复实验。做重复实验的目

的是,做重复实验的方法是O

10.[2022•广东高三模拟]苹果醋是当下流行的风味饮品，是苹果汁经发酵后，再添加

适量苹果汁等原料而制成的饮品。苹果醋中的乙酸有软化血管、降低血压，能有效预防高血

压和心脑血管疾病。卜图是苹果醋饮品的工厂生产过程图。回答卜列有关问题：

(1)得到果醋醪液需要经过两次发酵，发酵②需要的发酵条件是一

________________________________________________________________________(写

出2点)。

(2)苹果醋含有较高浓度的乙酸，能够引起，导致细菌

死亡，使得大多数微生物不能生长繁殖，但市场保质期内的苹果醋饮品有时会发生“变质”

问题。某同学分析出现“变质”的原因可能如下：

①可能在灌装或包装过程中无菌操作不够规范，引起了耐酸性细菌污染；

②两次无菌操作采用,虽然使得饮品风味口感保持不变，但不能杀死

耐热性微生物；

③苹果浓缩汁中出现了食品污染常见的某种杆菌，在不利条件下形成芽抱或抱子，在条

件适宜时其大量繁殖，引起变质。

11.[2022•黑龙江佳木斯市模拟]谷氨酸钠是味精的主要成分，工业生产中常用谷氨酸

棒状杆菌发酵生产谷氨酸，下表是生物兴趣小组探究发酵条件对微生物数量和产物生产的影

响。

谷氨酸棒状杆单个菌体产

组别发酵条件

菌繁殖速率谷氨酸量

通入无C/N=

第一组较慢较多

菌空气3：1

通入无C/N=

第二组较快较少

菌空气4：1

请分析回答下列问题：

(1)谷氨酸棒状杆菌发酵的培养基中主要营养物质有,该培养基是一

种培养基。

(2)得到谷氨酸棒状杆菌数目可采用的计数方法是,用该方法计数过

程：取第二组的100倍的稀释液滴加到计数板(由25X16=400个小室组成，容纳液体总体

积为().1mn?)共有菌体42个，则1mL的第二组发酵液中有菌体个。

(3)由上述探究可知，要通过发酵得到人量谷氨酸，需首先不断向发酵液中通入

，将碳氮比设为培养一段时间，然后将发酵液中碳氮比改为继续

培养。

12.[2022•辽宁高三模拟]大肠杆菌是一类引起人和幼畜腹泻的重要病原菌，可通过食

物和

水源等途径传染。某生物兴趣小组欲从某患病犊牛龚便中检测大肠杆菌的数量，并分离

培养及鉴定。请回答下列问题。

(1)取10g新鲜的犊牛粪便按图示方法分离大肠杆菌，通过统计①平板上的菌落数，可

推测出样品中大约含有的活菌数，其原理是。若按照图中

①平板上的菌落数来计算，每克犊牛粪便中活菌数应为o

(2)分离出的大肠杆菌可通过图中两种接种方法进一步纯化，A所示的方法应如何使菌

液在培养基上均匀分布？；B所示的接种方法中用到的接种用具

应如何灭菌？____________

(3)接种好的培养基放入恒温箱中应倒置培养，这样做是为了o为检

测培养基的制备是否合格，应该怎么做_______________________________o

(4)兴趣小组进一步采用滤膜法测定犊牛饮用水中大肠杆菌的数量，过滤器滤膜的孔径

需(填“大于”或“小于”)大肠杆菌的直径，先将1000mL饮用水进行过温再

将滤膜转移到培养基上，最后培养基置于适宜条件下培养，得到________(填颜色)

的菌落，根据菌落数可判断大肠杆菌的数量。

（⑥事-细菌

⑥⑥一透明圈

（5）某位兴趣小组的同学用未经稀释的菌液涂布平板，结果培养基上被菌铺满，他把沾

有噬菌体的小纸片放在该培养基上继续培养，结果如图，请推测出现透明圈的原因是

考点35微生物的培养技术及应用

第一关小题自助餐自选狂刷

1.D平板冷却凝固后将平板倒置是为了防止皿盖冷却水落入培养基后造成污染，D正

确；此操作不是利于大肠杆菌的生长，A错误；空气仍然可以进入到平板中，B错误；倒置

对于培养基冷却没有太大影响，C错误。

2.B分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成

分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A错误；该培养基中的蛋白陈既

是唯一的氮源，也是碳源,而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B正确；该培养基中

存在的无机盐和蛋白陈中的某些物质可以看作是生长因子，C错误；对培养基调节完pH后

还要进行灭菌处理等操作才能使用，D错误。

3.I）无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处埋的有植物的外植体及操作人员的双手

等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂（指示剂或染色剂）等。煮沸可以杀死微生物的营

养细胞和一部分芽也，属于消毒；为防止空气中杂菌的污染，接种时要在酒精灯火焰附近进

行；家庭制作他蜀酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌：培养基常用高压

蒸汽灭菌。故④⑥操作错误。

4.D实验用过的带菌培养基要经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，以免污染环境，A错误；

应利用稀释涂布平板法对细菌进行分离、纯化并计数，B错误：要使该实验所得结果可靠，

还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，C错误；培养基中含有的蛋白陈、

淀粉分别为细菌培养提供了氮源和碳源，D正确。

5.答案：（1）干热灭菌（2）50防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染（3）抗生素

X-gal（4）A（5）甘油管藏法

解析：（1）玻璃和金属材质的实验器材可用干热灭菌的万法进行灭菌。（2）培养基灭南后，

需要冷却到50℃左右时才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒置，这样做可防止皿

盖上的冷凝水落入培养基而造成污染。（3）为防止杂菌污染，培养基中要添加抗生素。3-

半乳糖苗酶能够作用于一种无色化合物X-gal,使其变成蓝色物质，蓝白斑筛选能成功，是

因为培养基中添加了X-gal。（4）由于用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿

主菌B-半乳糖甘酶缺失部分补全的序列，因此最终培养基中出现的白色的菌落是目的基因

和载体结合的菌落，故选A。（5）若需要长期保存该菌种，可采用的方法是甘油管藏法，

6.D不同细菌的菌落特征一般不同，因此可以依据菌落的特征进行菌种的鉴定，A错

误；细菌对抗生素敏感，在培养基中加入青霉素可抑制细菌而促进真菌生长，B错误；破伤

风杆菌是严格厌氧型细菌，向液体培养基中通入氧气能抑制破伤风杆菌的生长，C错误；醋

酸杆菌属于好氧型细菌，因此在培养醋酸杆菌时，向培养液中通入氧气促进其有氧呼吸，有

利于菌体快速增殖，D正确。

7.B有些微生物可以利用空气中的无机碳源或无机氮源，故微生物培养基中并不都必

须添加碳源或氮源，A正确；倒平板时，应将培养皿皿盖打开一条缝，若放到一边，容易造

成杂菌污染，B错误；接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌，C正确；实验

结束后，带菌的培养基必须经灭菌处理后才能倒掉，以免污染环境或操作者，D正确。

8.D该实验的目的是为了分离和纯化高效分解石油的细菌，因此步骤③与步骤②中培

养基成分相比，最大的区别是石油是唯一碳源，A正确；步骤⑤需要振荡培养，原因是提高

培养液中（溶解）氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，

B正确；图B采用的接种方法是稀释涂布平板法，出现图B结果（菌落分布不均匀）可能的操

作失误是涂布不均匀，C正确；步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最

强的细菌，D错误。

9.D配制的牛肉言蛋白陈培养基需使用高压蒸汽灭菌法灭菌，即在121℃、100kPa

条件下处理15〜30min,将培养基彻底灭菌，以避免培养基上的微生物影响实验结果，A

正确；新鲜牛奶应使用巴氏消毒法消毒，为了探究新鲜牛奶合适的消毒温度，可将等量的新

鲜牛奶分别置于60℃、70℃、80℃、90C恒温水浴锅中处理30min,并检测不同温度处理

下的牛奶中微生物的数量进行比较，B正确；若要统计消毒后的牛奶中微生物的数量，可用

稀释涂布平板法接种，所以可对处理后的牛奶进行梯度稀释后，利用涂布法接种平板并在

37c下培养24h,C正确；由于温度过高会破坏牛奶中的营养成分，所以菌落数最少的组对

应的温度不•定是最适的消毒温度，因为还需要考虑牛奶的营养价值不被破坏，D错误。

10.C菌液中含有试验菌，将一定量菌液与冷却后的灭菌培养基混匀并倒平板可得到

试验菌平板，A正确；在平板上打孔时，需要防止打孔的纲管上可能存在的微生物污染平板，

因此在平板上打孔的钢管需要灼烧灭菌，B正确；抑菌圈的大小与抑菌效果呈正相关，提取

物W在培养基中扩散，加入提取物W后的2小时，抑菌圈的直径没有达到最大值，说明还没

有获得最佳抑菌效果，C错误：试验菌的数量随菌体浓度的增加而增多，W物质的分子数量

随提取物W的浓度的增加而增多，抑菌圈直径的大小随着提取物W扩散时间的延长而增大，

因此菌体浓度、提取物W的浓度和扩散时间都会对抑菌圈直径的大小造成影响，D正确。

11.AC对培养皿中的菌株进行稀释时，盛有无菌水的试管仅消毒处理，不能彻底消灭

杂菌，会造成杂菌污染，A正确；指示剂和染料中可能犯有微生.物，为了防止杂菌污染，加

入培养基中的指示剂和染料需要灭菌，B错误；利用组织培养技术无菌繁殖脱毒苗时，植物

的外植体要进行消毒，以避免被杂菌污染，C正确；接种时灼烧接种环之后，要冷却后再对

菌种划线，以免温度太高杀死菌种，D错误。

12.C1）自生固氮菌是需氧型生物，步骤①土样应取自表层的土壤，步骤③中的稀群梯

度分别为10,100,1000倍，所以土壤悬浮液稀释了1000倍，A错误：自生固氮菌是异

养型生物，计数方法是稀释涂布平板法，B错误；步骤②需充分振荡20min,主要目的是使

土壤中的微牛•物充分释放到无菌水中，C正确；步骤④所用的接种工具是涂布器，该选择培

养基的特点是不添加氮源，利用的是空气中的氮气，DE确。

13.ABD氯化钠属于无机盐，无机盐在培养基中具有调节和维持微生物细胞的渗透压

和pH的作用，故制备培养基时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量氯化钠，以

维持渗透压，A正确；纯化的菌株临时保藏需要先接种到试管的固体斜面培养基上在合适的

温度下培养，长成菌落后放入4℃冰箱中保藏，B正确；由分析可知，曲线3在加入乳链菌

肽后活菌数降为零，这说明是非溶菌性杀死细菌，C错误；口服乳链菌肽，不会改变人体肠

道中的正常菌群，也不会进入内环境，由此推测可能的原因是被消化道中蛋白酶所降解而被

人体消化，D正确。

14.BC漆酶降解“木质”，则漆酶菌株多存在于“木质”丰富的场所，故生活污水中

含有大显微生物，但不一定含有产漆酶的菌株，A错误；蹄选培养基中需要加入漆酶的底物,

通过菌落特征挑出产漆酶的菌落，B正确；在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯

化，C正确：斜面培养基中含有大量营养物，不能在常温下长期保存菌株，D错误。

15.ABC高压灭菌加热结束后，让其自然冷却后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后

才能开盖取物，A错误；倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿打开一条稍

大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖，E错误；灼烧接种环之后，要冷却后

才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种，C错误：皿底的标记不会因为盖子混淆而混淆，D

正确。

16.BCD配制培养基时，应在高压蒸汽灭菌之前调节pH,避免灭菌之后调pH造成杂

菌污染，A错误；选择培养时，为分离分解纤维素的微生物菌种，应使用纤维素为唯一碳源

的培养基，B正确；进行梯度稀移时，为了无菌操作，应在酒精灯火焰旁完成各种操作，C

正确；挑选菌株后，为了防止造成污染，应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃，D正确。

17.C用免洗酒精凝胶擦手属于消毒，A错误；制作泡菜前用开水烫洗容器属于消毒

过程，B错误；在火焰上灼烧接种环能达到灭菌H的，C正确；防疫期间用石炭酸喷洒教室,

属于消毒，D错误。

18.C可用血细胞十数板对原生质体进行计数，A正确；活细胞的细胞膜具有选择透

过竹、红墨水中的色素分子不能透过细胞膜，当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，红墨

水中的色素分子能进入细胞，所以可用红黑水检测细胞的存活状态并计数，B正确；划线分

离法不能用于细胞计数，C错误；酵母细胞的密度与浑浊度指标存在•定的数量关系，所以

酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度，D正确。

19.B根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解

成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确；

乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌

落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别

接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正硝；可以利用该平•板来比较解脂菌分

泌脂肪酶的能力，观察指标以菌落周围深蓝色圈的大小为依据，D正确。

20.C为避免杂菌污染干扰，需对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌，A正确；葡萄球

菌需从人体皮肤的微生物中分离，为避免杂菌污染，故需要使用无菌棉拭子从皮肤表面取样，

B正确：棉拭子上的微生物需要用平板划线法在培养基上进行接种，C错误；根据微生物在

固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别，【）正确。

21.B由题图可知，乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；实验所用培养基应为固体培

养基，B错误；硫化氢与硫酸亚铁钱结合形成黑色沉淀，该实验只能对甲、乙菌能否产生硫

化氢进行定性分析，并不能比较出两种菌产生硫化氢的量，C正确；穿刺接种等接种技术的

核心是防止杂菌污染，D正确。

22.A利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微

生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活，A错误；不同的

微生物生长所需的最适pH不同，如细菌适宜生活在中性偏碱环境，霉菌适宜生活在中性偏

酸环境，因此配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH,B正确：利用糯米酿酒需

要先进行糖化，酵母菌不能直接利用淀粉进行发酵，C正确；醋化醋杆菌的发酵底物为一定

浓度的酒一水混合物，适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化，D正确。

第二关大题自助餐自选精做

1.答案：（DG酶、J酶和葡萄糖甘酶纤维素选择（2）为了杀死培养基中的所有

微生物（微生物和芽抱、抱子）不接种培养（或空白培养）（3）将大熊猫新鲜粪便样液稀释

适当倍数后，取0.1niL涂布到若干个平板（每个稀释度至少涂布三个平板），对菌落数在30〜

300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数（4）C接

种C菌株后秸秆失重最多，纤维素降解率最大

解析：（1）纤维素醐是一种好合酶，一般认为它至少包括三种组分，即G酶、G酶和他

萄糖杏睡，前两种的使纤维素分解成纤维二糖，第三种麻将纤维二糖分解成葡萄糖。在用纤

维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。为

筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以纤维索为唯一碳源的固体培养基

上进行培养：培养基从功能上分类可分为选择培养基和鉴别培养基，故该培养基从功能上分

类属于选择培养基。（2）配制培养基常用高压蒸汽灭菌，即将培养基置于压力100kPa、温

度121°C条件下维持15〜3（）分钟，目的是为了杀死培养基中的所有微生物（微生物和芽抱、

抱了）。为检测灭菌效果可对培养基进行空白培养，即将未接种的培养基在适宜条件下培养

一段时间，若在适宜条件下培养无菌落出现，说明培养基灭菌彻底，否则说明培养基灭菌不

彻底。（3）为测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数，常采用稀释涂布平板法，在适宜

的条件下对大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌进行纯化并计数时，对照组应该涂布等量的无菌

水。将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1mL涂布到若干个平板（每个稀释度至少

涂布三个平板），对菌落数在30〜300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便

中纤维素分解菌活菌数。（4）测定酶活力时可以用单位时间内、单位体积中反应物的减少量

或产物的增加量来表示。力表格可知，在适宜的条件下，C菌株在相同的温度和时间下，桔

杆失重最多，纤维素降解率最大，说明该菌株的纤维素分解菌产生的纤维素酶活力最大。

2.答案：（一）（1）涂布分离单菌落筛选

解析：（1）分离纯化细菌最常用的方法是划线分离法或涂布分离法，两种方法均能在固

体培养基上形成单菌落。为了获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株，还需对分离的菌

株进行诱变处理，再经筛选和鉴定。

3.答案：（1）唯一碳源血细胞计数板计数诱变育种、基因工程育种（2）盐浓度为

60g/L的条件下，其他杂南因失水过多而死亡；pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，

生长繁殖受抑制（3）氧气Q或溶解氧）（4）蛋白前、淀粉防、脂肪的等

解析：（1）根据题意分析•，该实验的目的是提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，

结合微生物的代谢需求，其液体培养基应该以蔗糖作为唯一碳源,并不断提高其浓度，经多

次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌

株。培养过程中定期取样并用血细胞计数板计数的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。

此外，选育优良菌株的方法还有诱变育种、基因工程育种等。（2）已知，菌株H具有嗜盐、

酸碱耐受能力强等特性，因此当培养基盐浓度为60g/L,pH为10时，菌株H可正常持续发

酵60d以上，而盐浓度为60g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条件

下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制，故该系统不需要灭菌。（3）分析题意，扩大

培养时，营养物浓度、温度、M等条件适宜，而发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未

达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中氧气不足，使菌种进行无氧呼吸产生

乙醇，即氧气Q或溶解氧）是限制高密度培养的重要因素。（4）根据酶的专一性可知，菌株

H之所以能通过分解主要含蛋白质、淀粉、油脂等的餐厨垃圾来生产PHA,说明其能分泌蛋

白酶、淀粉醵、脂肪酷等。

4.答案：（1）冷却玻璃刮刀较大透明圈斜面（2）乙醇耐酒精度高、耐酸高

解析•：（-）（1）高压蒸汽灭菌刚结束时，培养基温度较高，要等培养基冷却后再加入3%

体积的无水乙醇。涂布分离法可用于单菌落分离，使用玻璃刮刀将待分离的菌液涂布到分离

培养基的整个平面上。醋酸菌发酵产生的醋酸会使培养基中的CaCOs分解，形成透明圈。菌

落小，透明圈大，代表着高产醋酸菌。菌种的贮存方法：在无菌操作下将单菌落用接种环取

出，再用划线法接种在斜面培养基上，培养24h后，置于4℃冰箱中保存。（2）醋酸发酵结

束的标志：产物不再增加（醋酸浓度不再上升）或原料消耗到最低值（乙醇含最达到最低）。优

质菌种不仅要求产酸高，还要耐高酸，同时还要耐酒精］原料）等特点。

5.答案：（1）④（2）梯度稀释4.6X10“或460000）（3）诱变脂肪（或油脂）较

大（4）B该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好

解析：（1）涂布器一般用干热灭菌法或灼烧灭菌法进行灭菌。（2）99mL无菌水中加入1.0

g土壤制成的菌悬液为10DmL,取稀释10倍后的菌悬液0.1mL涂布平板，平板上