环境监测实验室管理规范-标准菌种的使用规定

第第页标准菌种的使用规定文件编号：GL-011版次：A/0编制：日期：审核：日期：批准：日期：发放部门或人员□院长□质量负责人□技术负责人□检测室□质控室□内审员□设备管理员□其他文件控制印章受控号：生效日期：GL-011标准菌种的使用规定修改记录修改处修改内容修改人批准人生效日期1目的对微生物标准菌株进行有效管理，确保标准菌株符合要求，保证检测结果。2适用范围适用于标准菌株的购置、验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等。3职责3.1质量负责人：负责标准菌株购置计划的审批。3.2实验室主任：负责购置计划的审核。3.3微生物检测室工作人员：负责标准菌株需求计划的提出和标准菌株的配制、验收、评估、有效储存和正确的使用。4工作程序4.1供应商的选择：选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。4.2标准菌株和验收：实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚。同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。4.3冻干标准菌株的复活：4.3.1开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株保藏管上。4.3.2复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明或有关技术通则）进行复活。冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。挤压并旋转拭子，接种于初级培养平板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为25℃或37℃。多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为F1代。4.3.3将TSB生长的浓菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出，将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。将平板上生长的良好菌株接种于营养琼脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化钠营养琼脂）36℃培养24h当作工作菌株，记录为F3代。4.4工作菌株确认方法及依据大肠杆菌的确认依照“SN0169-1992出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法”执行。金黄色葡萄球菌的确认依照“SN/T0172-2010进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法”执行。沙门氏菌的确认依照“SN0170-1992出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法”执行。副溶血性弧菌的确认依照“SN/T0173-2010进出口食品中副溶血性弧菌检验方法”执行。4.5工作菌株的储存：4.5.1大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌接种于斜面上的可储存在2-8℃的冰箱内。4.5.2副溶血性弧菌在常温条件下保存。4.5.3储存期限：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌为3个月。4.6标准菌株的转接：4.6.1标准菌株的复苏：①菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。②每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。4.6.2标准储备菌株每转接一次须进行镜检确认。4.6.3工作菌株转接的方法：①、配制营养琼脂培养基（副溶血性弧菌加3%氯化钠）并分装在试管内，121℃高压灭菌15分钟后摆斜面，冷却后备用。②、在无菌条件下，用接种环挑取菌苔至新鲜斜面上作“之”字形划线接种，放置在36℃的培养箱内培养24小时。4.7工作菌株的使用：4.7.1内部质量控制：一个月一次阳性对照、培养基每批验收；4.7.2外部质量控制：能力验证、实验室比对；4.8工作菌株的期间核查4.8.1期间核查的频率：每半年对使用标准菌株进行一次期间核查。4.8.2工作菌株期间核查的方法及依据：同工作菌株的确认。3.9标准菌株的废弃4.9.1标准菌株如已老化、退化、或变异、污染等，经确认试验不符合的或该菌种已无