一轮复习 人教版微生物的培养技术及应用作业

能力验收评价（三十六）微生物的培养技术及应用（共3页）

一、选择题

1.下列有关微生物营养物质的叙述，正确的是（）

A.是碳源的物质不可能同时是氮源

B.微生物的培养都需要提供碳源、氮源、水、无机盐，缺一不可

C.蛋白族来源于植物，营养全面

D.液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养

解析：选D是碳源的物质同时也可以是氮源，如牛肉膏和蛋白陈均可作为碳源和氮

源，同时还提供维生素，A错误；并非所有微生物的培养基中都必须含有碳源、氮源，自

养的微生物不需要碳源，固氮微生物不需要氮源，B错误：妥白陈来源于动物，含有短、

维生素和有机氮等营养物质，C错误；液体培养基中不加任何凝固剂，这种培养基的成分

均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，利于微生物扩增培养，D正确。

2.下列有关制备培养基和倒平板的具体描述，正确的是（）

①待培养基冷却至40c左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿盖放

在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰

④用左手的拇指和食指完全打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立

即盖上培养皿的皿盖⑥等待平板冷却5〜10s,将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在

上

A.®®®®B.@®®

C.@@@©D.③⑤

解析：选D待培养基冷却至50七左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，

①错误；不能将灭过菌的培养皿盖放在桌面上，因为桌面上可能有杂菌，②错误；右手拿

锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰，高温可防止杂菌污染，③正确；倒平板时培养皿只需要打

开一条稍大于瓶口的缝隙，④错误；右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿

盖，⑤正确；等待平板冷却5〜10min,待培养基冷却凝固后，将平板倒过来放置，使皿盖

在下，皿底在上，⑥错误。

3.在微生物培养和现代生物学实验中的许多方面都要进行无菌操作，防止杂菌污染。

下列操作错误的是（）

①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽抱

②接种操作要在酒精灯火焰附近进行③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消

毒④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌⑤培养基要进行湿热灭菌⑥加入培

养基中的指示剂和染料不需要灭菌

A.（1X3）B.®®C.（3X5）D.④⑥

解析：选D无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体、操作的

空间、操作者的衣着和手等；需进行灭菌的有用于微生物培养的器皿、接种工具、培养基、

添加剂（指示剂或染料）等。家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能

灭菌。

4.下列有关土壤中尿素分解菌的分离和培养的叙述，正确的是（）

A.培养基中加入尿素作为唯一碳源，该培养基是鉴别培养基

B.测定土壤中分解尿素的细菌数量和测定土壤中放线菌的数量可采用相同的稀释度

C.细菌合成的服酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高

D.利用稀释涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的细菌的分离计数和纯化鉴定

解析：选C培养基中加入尿素作为唯一氮源，该培界基是选择培养基，A错误；因

为土堞中各类微生物的数量不同，故为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行

分离，B错误；细菌合成的腺酶能将尿素分解成氨，氧会使培养基的碱性增强，pH升高，

可加入酚红指示剂进行检测，C正确；只用稀释涂布平板法不能芸定分解尿素的细菌，塞

定分解尿素的细菌应该用加酚红的鉴别培养基，D错误。

5.下列关于“检测土壤中某种微生物总数”实验操作的叙述，错误的是（）

A.一般选择距地表约3〜8cm的土壤层进行取样

B.不同微生物均可取104、1（氏IO,倍的土壤稀释液进行接种操作

C.将实验组和对照组平板倒置，一般在适宜且恒温条件下培养1〜2d

D.确定对照组无菌后，选择菌落数在30〜300之间的实验组平板进行计数

解析：选B绝大多数细菌分布在距地表3〜8cm的土壤层，所以土壤取样时应选取

距地表约3〜8cm的土壤层，A正确；不同微生物在土壤中的含量不同，计数时，所选用

的土堞稀释度也不同，B错误；将实验组和对照组平板倒置，一般在适宜且恒温条件下培

养1—2（1,使培养基上的菌落数稳定，避免计数时遗漏，使数据更准确，C正确；确定对

照组无菌后，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30〜300之间的平板进行计数，D正

确。

6.（2022•枣庄模拟）筛选是分离和培养微生物新类型常用的手段。下列有关技术中不能

筛选成功的是（）

A.在全营养的LB培养基（普通培养基）中，筛选大肠杆菌

B.在尿素固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物

C.用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物

I）.在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体的微生物

解析：选A在全营养的LB培养基中，几乎所有细菌都能生长，不能筛选出大肠杆菌；

在尿素固体培养基中，只有能分解尿素的微生物才能生长，不能分解尿素的微生物因缺乏

氮源不能生长，能够筛选分解尿素的微生物；在纤维素为唯一碳源的培养基上，只有能分

解纤维素的微生物才能生长，不能分解纤维素的微生物因兼乏碳源不能生长，能筛选分解

纤维素的微生物；在培养基中加入不同浓度的氯化钠，能筛选抗盐突变体微生物。

7.下表是某同学配制的一种培养基的配方。下列有关叙述正确的是（）

成分蛋白陈乳糖K2HPO4伊红亚甲蓝琼脂

含量/g

将上述4物质溶解后，用蒸储水定容到1000mL

A.若根据用途划分，该培养基属于选择培养基

B.若用该培养基筛选土壤中的尿素分解菌，应将蛋白陈改成尿素

C.在该培养基上生长的大肠杆菌，其菌落颜色呈红色

D.该培养基中含有维生素，若培养霉菌需将pH调至碱性

解析：选B从用途看此培养基属于鉴别培养基，伊红和亚甲或可用来鉴别大肠杆菌，

A错误；用该培养基筛选土壤中的尿素分解菌，需要将蛋白冻去掉，用尿素作为唯一的氮

源，H正确；在该培界基上生长的大肠杆菌，其菌落颜色为具有金属光泽的深紫色，C错误；

该培养基中的蛋白陈含有维生素，若培养霉菌需将pH调至酸性，D错误。

8.（2022♦济南模拟）也门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。

在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养，实脸基本步骤如下。下列叙述错误的

是（）

I配制I|灭菌、—Ir-1r-^

屋基I一|薛蔡I一回一直］一醯

A.在培养时，需将培养皿倒置，若不倒置培养，将导致无法形成单菌落

B.在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有服酶，它能以尿素

作为氮源；若有Hp,则茵落变黑

C.临床上用*4C呼气试验检测人体是否感染Hp,其基本原理是Hp能将"C标记的尿

,4

素分解为NH3和CO2

D.步骤X表示接种，在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养

基平面上，菌液稀释的目的是获得单菌落

解析：选B在培养时，需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，将导

致无法形成单菌落，A正确；在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp可

产生腺酶，它能以尿素作为氮源，若有Hp存在会分解尿素，培养基pH会升高，酚红指示

剂将变红，B错误；临床上用|十呼气试验检测人体是否感染Hp,幽门螺杆菌可产生腺酶,

能分解尿素为菌体提供氮源，故Hp能将14c标记的尿素分解为N%和MCO2,C正确；步

骤X表示接种，在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上，

菌液稀释的目的是获得单菌落，D正确。

9.在微生物培养过程中，由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为。电培养物。平板划

线法和稀释涂布平板法是常用的获取纯培养物的方法。下列相关叙述错误的是（）

A.两种纯化方法的核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度

B.用稀释涂布平板法进行微生物计数时，所得数据往往比实际值偏小

C.获取纯培养物的过程中，应根据微生物的种类调整培养基的pH

D.对10mL土样样液稀释106X101。个

解析：选D获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，因此两种先化方法的核

心都是要防止杂菌污■染，保证培养物的纯度，A正确；因为当两个或多个细胞连在一起时,

平板上观察到的只是一个菌落，因此用稀释涂布平板法进行微生物的计数时，所得数据往

往比实际数据偏小，B正确；因为不同的微生物所需的最适pH条件不同，因此，在获取纯

培养物的过程中，应根据微生物的种类调整培养基的pH,C正确；用稀释涂布平板法统计

微生物的数量时，一般选择菌落数在30〜300的平板进行计数，D错误。

10.生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子

的种类，研究小组将该菌的悬浮液在不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的平板培

养基上涂布均匀，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区

域，培养结果如图所示。下列说法错误的是（）

A.倒平板后不接种，直接培养可判断培养基是否被污染

B.倒平板后需要进行灭菌处理

C.图示结果表明该菌需要生长因子乙和丙

D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选

解析：选B可通过培养空白培养基判断培界基是否被污染，A正确。应该先将培养基

灭菌再倒平板，B错误。图中菌落生活在乙、丙区域之间，说明需要生长因子乙和丙，C

正确。不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选某些菌种，I）正确。

11.（2022•天淖■一棋）为了分离和钝化高效分解石油的细菌，科研人员用被石油污染过的

土壤进行如图A所示的实验。同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分

布如图B所示。下列叙述错误的是（）

A.步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是步骤③的培养基中石油是唯一碳源

B.步骤⑤振荡培养的目的是提高培养液溶氧量，同时使菌体与培养液充分接触

C.图B培养基的结果可能是由于涂布不均匀造成的

D.步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出能分解石油的细菌

解析：选D该实验的目的是分离和纯化高效分解石油的细菌，因此步骤③与步骤②

中培养基成分相比，最大的区别是步骤③的培养基中石油是唯一碳源，A正确；步骤⑤需

要振荡培养，原因是提高培养液中（溶解）氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，

提高营养物质的利用率，B正确；图B采用的接种方法是稀释涂布平板法，出现图B结果（菌

落分布不均匀）可能的操作失误是涂布不均匀，C正确；步骤⑤后取样测定石油含量的目的

是筛选出分解石油能力最强的细菌，D错误。

12.饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，若在饲料中添加植酸酶,

则能催化其水解为可以吸收利用的磷酸盐等。如图是从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌

株的过程，图中①〜⑤表示操作过程。下列说法错误的是（）

A.通过图中①〜④逐渐稀释，目的是获得单个菌落

B.图中培养基从功能上讲属于选择培养基

C.高压蒸汽灭菌锅灭菌的要求是100C

D.实验结果显示产植酸酶的理想菌株是E菌株

解析：选C分析题困可知，①〜④过程是梯度稀释过程，目的是对菌液进行稀释，

涂布后在平板上可获得单个细菌繁殖而来的菌落，A正确；由题意可知，该实验的目的是

从作物根部土壤中分离产核酸酶的菌株，因此图中的培养基应该是选择培养基，B正确；

高压蒸汽灭菌锅灭菌的要求是压力为100kPa,温度为121°C的条件下，维持15〜30min,

C错误；实验结果显示，E的透明圈最大，因此产植酸酶的理想菌株是E菌株，D正确。

13.硝化细菌是化能自养菌，通过NHj-NO3-NO3的氧化过程获取菌体生长繁殖所

需的能量，在水产养殖中具有重要作用，下表是分离硝化细菌的培养基配方。下列说法错

误的是（）

组分含量组分含量

(NH4)2SO40.5gNaH2P。40.25g

NaCI0.3gNa2cO31g

琼脂

FeSO40.03g15g

HO定容至1000mL

MgSO4().03g2

K2HPO40.75g——

A.（NH4）2SO4可作为硝化细菌的氮源和能源

B.培养基中的Na2c03是硝化细菌的主要碳源

C.K2HPO4和NaH2PO4能维持培养基的pH

D.硝化细菌能清除水体中的铁态氮及亚硝态氮

解析：选B由题干信息可知，硝化细菌通过NH；-NO£fNO二的氧化过程获取能量，

故通过分析培养基成分可知（NH4）2SO4可作为硝化细菌的氮源和能源，A正确；硝化细菌为

自养型生物，以培养基中的NHj为氮源和能源，将COz和水合成糖类，故硝化细菌的主要

碳源是CCh,R错误：分析培林基成分，其中K2HPO4和NaH2PO4可维持培养基的pH,C

正确；硝化细菌能将NH；氧化成NOf,进而将NOT氧化成NOJ,故可用硝化细菌清除水

体中的铁态氮及亚硝态氮，D正确。

14.生物兴趣小组的三位同学吃冰激凌后有两人严重腹泻，他们怀疑冰激凌中大肠杆

菌超标。于是他们设计实验对此冰激凌进行检测。下列实验操作合理的是（）

A.再去小店买一个同样品牌的同种冰激凌，然后配制伊红一亚甲蓝培养基（该培养基

可用来鉴别大肠杆菌），灭菌、倒平板

B.取10mL刚融化的冰激凌作为原液进行梯度稀释、稀释倍数为IX10〜IX10,

C.取各个稀释浓度的冰激凌液各0.1mL,用涂布平板法进行接种，每个浓度涂3个

平板，共培养18个平板，在适宜温度下培养48h

D.统计菌落数目，以菌落数代表大肠杆菌数会导致统计结果比实际值偏小

解析：选D正确的做法是再去小店随机买多个同样品牌的同种冰激凌，A错误；

测定细菌的数量，一般选用1（尸、10\IO，，倍的稀释液进行培养，B错误；实验应该设置对

照，取各个稀释浓度的冰激凌液各0.1mL,用涂布平板法进行接种，每个浓度涂3个平板，

再取一个平板接种等量无菌水（作为对照），共培养19个平板，在适宜温度下培养48h,当

对照组无菌落生长时，选择菌落数在30〜300的平板进行计数，C错误；因为当两个或多

个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故以菌落数代表大肠杆菌数会导致统

计结果比实际值偏小，D正确。

二、非选择题

15.硅酸盐细菌是一种时礴、能分解原始岩石矿物的芽花杆菌，该菌株的菌落具有透

明、隆起、粘性强等特征。下表为硅酸盐细菌的培养基配方。

MgSO-7CaC

成分蔗糖4土壤矿物琼脂

Na2HPO4FeCh

H2OO3

含量/g52120

(1)该培养基从物理性质划分属于培养基，通过该培养基成分可知：硅酸盐细

菌具有能力。

(2)探究硅酸盐细菌生长的pH范围和最适pH时，该培基中不需要添加,倒平

板前需用制备不同pH的平板，以pH=7.0的平板作为对照，接种后置于28〜

30℃环境中培养，观察记录其生长情况。

(3)分离和纯化硅酸由细菌时，由于该细菌在土壤中含量比较高，配制土壤悬浮液需进

行。为避免偶然因素的影响，还需o将处理过的菌液接种到

培养基上培养一段时间后。可挑选________________的菌落进行扩大培养。

解析：(1)由于该培养基中含有琼脂，因此该培养基从物理性质划分属于固体培养基，

通过该培养基成分可知：培养基成分中没有氮源，因此硅酸盐细菌具有固氮能力。(2)根据

题意可知，探究硅酸盐细菌生长的pH范围和最适pH时，该培养基中不需要添加CaCCh,

因为CaCO.i会影响培养基的pH。倒平板前需用灭菌的HC1或NaOH制备不同pH的平板，

以pH=7.0的平板作为对照，接种后置于28〜30'C环境中培养，观察记录其生长情况。(3)

根据题意可知，分离和他化硅酸盐细菌时，由于该细菌在土壤中含量比较高，配制土壤悬

浮液需进行一系列梯度稀释。为避免偶然因素的影响，还需每个稀释度设三个重复(或设置

重复组)。将处理过的菌液接种到培养基上培养一段时间后，可挑选透明、隆起、粘性强的

菌落进行扩大培养。

答案:⑴固体固氮(2)CaCO3灭菌的HC1或NaOH(3)一系列梯度稀释每个稀

释度设三个重复(或设置重复组)透明、隆起、粘性强

16.某生物兴趣小组，进行土壤中尿素分解菌的分离和计数实验。请回答下列问题：

(1)实验原理：尿素是一种重要的农业氮肥，并不能直接被农作物吸收，需要转变成氨,

才能被吸收，这个转变依赖于土壤中能产生_________的微生物的作用。

(2)实验步骤及结果分析：

I.配制培养基(成分：葡萄糖、Na2Hp0外KH2P0八MgSO4-7H2O.尿素、Y、H2O>

琼脂)，并制作无菌平板;

n.设置__________组和若干实验组，进行相关操作；

m.将各组平板置于恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

①为了更好地鉴别出此类微生物，在培养基配方中加入了Y,Y是__________o

②为了对实验的结果进行进一步统计，需要用法进行接种。具体情况如图:

③恒温培养48小时后，在稀释倍数为10$下，平板上的菌落数目在30〜300之间，小

组成员进行统计，应注意统计周围为__________菌落进行计数。统计三个平板的菌落数目，

分别为68、73、87,则锥形瓶中每亳升稀释液中，尿素分解菌的活菌数为个。

IV.实验结果分析:

兴趣小组的同学在统计菌落数目时，除了上述统计的菌落外，还发现有些菌落周围的

培养基没有变化，试分析这些菌落产生的可能原因：

_______________________________________________________________（答出一点即可）。

解析：（1）尿素分解菌能产生麻酶将尿素分解成氨，因此由尿素转变成氮的过程依赖于

土壤中能产生腺酶的微生物的作用。（2）11.为检验培养基是否受到杂菌污染，需要设置空白

对照组。III.①细菌合成的麻酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此

可以通过检查培养基的pH变化来鉴别尿素分解菌的存在，在培养基配方中加入的Y可以

是酚红指示剂。②分析图示实验过程可知，该实验采用了稀释涂布平板法进行接种，用于

计数土壤稀释液中尿素分解菌的数量。③当尿素分解菌产生的睬悔将尿索分解为氨后，使

pH升高，酚红指示剂会变红，因此应注意统计周围为红色的菌落进行计数。在稀释倍数为

1胪XI伊义10"个）。W.有些菌落周围的培养基没有变化，说明这些细菌不能产生麻酶进而利

用尿素作为氮源，而氟源为微生物生长所必需的，因此可推测可能存在固氮微生物，它们

能利用空气中的氮气作为氮源，而不利用培养基中的尿素，不能将尿素分解成氨（不与指示

剂作用），所以看到有些菌落产生而菌落周围的培养基没有变化。

答案，⑴服酶（2）II.空白对照III.①酚红指示剂②稀释涂布平板③XI。？W.存

在固氮微生物，它们能利用空气中的氮气作为氮源，而不利用培养基中的尿素，不能将尿

素分解成氨（不与指示剂作用），所以看到有些菌落产生而菌落周围的培养基没有变化

17.幽门螺杆菌是栖息在胃黏膜的螺旋形的细菌（该菌对万古霉素、两性霉素B等抗生

素不敏感，对青霉素高度敏感），感染后可引起胃炎等疾病。幽门螺杆菌能产生有枝强活性

的麻酶，该酶能催化热稳定性低的尿素分解为N%和CO?。体检时可通过尿素呼气试

验来检测幽门螺杆菌感染情况。受试者口服3c标记的尿素胶囊后，定时收集受试者吹出的

,4

气体并测定其中是否含有CO2以及量的多少，作为诊断指标。

（1）下列关于幽门