肺热清解煮散与传统汤剂的黄酮类与核苷类成分含量比较

肺热清解煮散与传统汤剂的黄酮类与核苷类成分含量比较【摘要】目的：为探索肺热清解煮散与传统汤剂的黄酮类与核苷类成分含量差异，建立测定两种剂型中芦丁及三种核苷类成分含量的HPLC法。方法：采用HPLC法测定肺热清解传统汤剂与散剂中芦丁的含量检测方法：色谱柱为EnhanselExceedC18柱（4.6×250nm，5μm）；以乙腈-0.5%冰醋酸为流动相，梯度洗脱，260nm波长下检测，检测时间为40min。建立HPLC法测定肺热清解传统汤剂与散剂中三种核苷类的含量检测方法：色谱柱为EnhanselExceedC18柱（4.6×250nm，5μm）；以甲醇-水为流动相，梯度洗脱，260nm波长下检测，检测时间为30min。结果：芦丁、尿嘧啶、胞苷、肌苷分别在0.0065~0.2076mg·mL-1（r=0.9999）、0.00155~0.04960mg·mL-1（r=0.9999）、.0.00352~0.1148mg·mL-1（r=0.9999）、0.00803~0.25704mg·mL-1（r=0.9999）范围内线性关系良好，两种剂型平均加样回收率分别平均为100%（RSD=0.12%）、98.92%（RSD=0.045%）、99.98%（RSD=0.05%）、99.055%（RSD=0.0595%）。汤剂的芦丁含量为0.0150mg·g-1，煮散的芦丁含量为0.0170mg·g-1。汤剂中的尿嘧啶含量为0.0162mg·g-1，煮散中的尿嘧啶含量为0.0243mg·g-1。汤剂中的胞苷含量为0.0344mg·g-1，煮散中的胞苷含量为0.0725mg·g-1。汤剂中的肌苷含量为0.01921mg·g-1，煮散中的肌苷含量为0.7160mg·g-1。结论：肺热清解煮散比传统汤剂有效成分溶出多，疗效可能更好。【关键词】肺热清解方；芦丁；黄酮类；核苷类；高效液相色谱法ComparetheContentonFlavonoidandNucleosideinFeireqingjieBoiledPowderandtheTraditionalDecoration

【Abstract】Objective:ToestablishanHPLCmethodfordeterminingrutinandthreenucleosideinFirefightingboiledpowderandthetraditionaldecoration,comparingcontentdifferencesbetweentheboiledpowderandthetraditionaldecoration.Methods:rutinanalysisusedHanselExceedC18column(4.6×250mm,5μm)withacetonitrile-0.5%aceticacidgradientelation(detectionat260nmfor40min).Nucleosideanalysisemployedmethanol-watergradientonthesamecolumn(260nm,30min).Results:Linearrangeswere0.0065-0.2076mg·mL-1(r=0.9999)forPutin,0.000155-0.04960mg·mL-1(r=0.9999)foruracil,0.00352-0.1148mg·mL-1(r=0.9999)fortidiness,and0.00803-0.25704mg·mL-1(r=0.9999)forcosine.Meanrecoverieswere100%(RSD=0.12%),98.92%(0.045%),99.98%(0.05%),and99.055%(0.0595%)respectively.Therutincontentinthedecoctionis

0.0150mg·g⁻¹,whileintheboiledpowderitis

0.0170mg·g⁻¹.Theuridinecontentinthedecoctionis

0.0162mg·g⁻¹,whereasintheboiledpowderitis

0.0243mg·g⁻¹.Thecytidinecontentinthedecoctionis

0.0344mg·g⁻¹,comparedto

0.0725mg·g⁻¹

intheboiledpowder.Theinosinecontentinthedecoctionis

0.01921mg·g⁻¹,whiletheinosinecontentintheboiledpowderis0.7160mg·g⁻¹.Conclusion:Thelung-heat-clearingboiledpowderallowsmoreeffectivecomponentstodissolvecomparedtothetraditionalmethod,potentiallyofferingbetterefficacy.【Keywords】FeireqingjieFlavonoidnucleosideHPLC前言中药传统汤剂是把多种药物复汤分散在汤剂中煎煮浓缩，具有见效快、吸收好的特点REF_Ref32573\r\h[1]，对药材原有性质能实现最大程度的保留，对症治疗能够取得显著的效果。中药煮散是在中医药理论的指导下，将中药材粉碎成一定的粒度，分装或用时称取，加入水或引药煎煮，连同药末一起或者去渣服用的一种剂型REF_Ref3255\r\h[2]。相关文献提到，中药煮散具有简便康快、药效确切、可规范化、可个性化的应用优势。中药煮散用量小，其适度粉碎后具有较大的比表面积从而使得有效成分更容易溶出，并且粉碎后的粉体均匀地分散在水溶液中，能够获得有效物质稳定、均一的汤液，有助于疗效的增加。煮散既保持了传统汤剂的所有特性，又因以独特的节省药材、煎煮时间短等优势，源远流长、流传千年REF_Ref3288\r\h[3]。分析不同的中药剂型的成分差异具有双重目的。在质量控制方面，通过测定黄酮类和核苷类物质在不同剂型中的含量变化，能够揭示生产工艺对药物活性成分保留率的影响，为建立更加精准的质量评价体系奠定了基础。另外，从临床应用角度可知，黄酮类具有抗炎、抗氧化、抑菌、降血糖降血脂、抗肿瘤等作用REF_Ref3321\r\h[4]，而核苷类物质则在抗病毒、抗癌、调节免疫系统功能等方面效果显著REF_Ref3353\r\h[5]。比如所研究肌苷能够增强肥大细胞脱颗粒，减轻巨噬细胞、淋巴细胞对进行免疫调节REF_Ref3373\r\h[6]。肺热清解煮散为中山市黄圃人民医院协定处方，具有清热宣肺、止咳平喘之效，临床上主要用于急性支气管炎及肺部感染的治疗。该方由桑白皮MORICORTEX、芦根PHRAGMITISRHIZOMA、川贝母FRITILLARIAECIRRHOSAEBULBUS等10味中药组成REF_Ref3422\r\h[7]，处方组成药味中含有较多的黄酮与核苷类成分。本课题采用高效液相色谱法建立对肺热清解煮散与传统汤剂中黄酮类与核苷类成分的含量测定方法，以芦丁、肌苷、胞苷、尿嘧啶的含量作为指标，比较两种不同剂型中有效成分的含量差异，提高其疗效与安全性，以便于更好地控制产品的质量，确保中药药品的安全性和有效性。同时也能为肺热清解煮散与传统汤剂的质量标准研究、临床上治疗肺热证研究提供实验数据参考。材料与仪器材料所用中药饮片均经田素英副教授鉴定符合2020版《中国药典》一部的标准。见REF_Ref14613\h表STYLEREF1\s2-1。所用试剂、对照品见REF_Ref14652\h表STYLEREF1\s2-2。表STYLEREF1\s2-SEQ表\*ARABIC\s11材料一览表表STYLEREF1\s2-SEQ表\*ARABIC\s12实验主要试剂仪器所用主要仪器见REF_Ref14679\h表STYLEREF1\s2-3。表STYLEREF1\s2-SEQ表\*ARABIC\s13实验主要仪器实验方法与结果芦丁的含量测定供试品溶液的制备肺热清解煮散供试品溶液将方中药材按比例称取后置于100mL锥形瓶中，以料液比为1:10加入60%甲醇水溶液，浸泡30min后超声，超声60min，频率为480w，温度20℃，放冷，用尼龙纱布过滤，定容至100mL容量瓶中，将样品至于离心机中，在10000r·min-1条件下处理15min，收集离心管上层液体，经0.22μm微孔滤膜过滤后，最终获得待测煮散样品溶液。肺热清解汤剂供试品溶液准确称取处方规定量的药材粉末，置入100mL锥形瓶内，按1:10的固液比加入60%甲醇水溶液，静置浸提30min后，在20℃条件下进行超声处理（功率480W，时间60min）。待溶液冷却后，先用尼龙纱布粗滤，再转移至100mL容量瓶定容。随后以10000r/min的转速离心15min，收集上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤，最终制得汤剂供试品溶液。对照品溶液的制备准确称取芦丁对照品适量，用甲醇溶解并稀释，制备成0.02076mg·mL-1的标准溶液，备用。色谱条件与系统适应性试验色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.5%冰醋酸为流动相B，按REF_Ref20589\h表STYLEREF1\s3-1进行梯度洗脱，流速1mL·min-1，柱温30℃，检测波长260nm，进样量为10uL。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s11梯度洗脱程序T/minA/%B/%00.199.910109020257528366432901032.10.199.9400.199.9系统适应性试验分别取汤剂供试液、煮散供试液及芦丁对照液，按照上述色谱条件进行检测，实验结果如下（见REF_Ref9082\h图1）。在汤剂、煮散与芦丁对照品色谱图中的比较中，保留时间约22min处有吸收峰，理论塔板数在11000以上，分离度在1.8以上，表示此方法系统适用性良好。T/minT/min图SEQ图\*ARABIC1系统适用性试验HPLC图谱A-芦丁对照品B-汤剂供试品C-煮散供试品线性关系考察取“3.1.2”项制备的芦丁对照品溶液（0.02076mg·mL-1），用甲醇逐级稀释，得到0.00065、0.00130、0.00519、0.01038mg·mL-1的系列标准溶液。按照“3.1.3”色谱条件进样分析，以峰面积（Y）对浓度（X，mg·mL-1）进行线性回归，绘制标准曲线，如REF_Ref9229\h图2所示。结果表明，芦丁在0.00065~0.02076mg·mL-1范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=93083961.8988x-16309.7993（r=0.9999），符合定量分析要求。图SEQ图\*ARABIC2芦丁对照品标准曲线精密度试验取芦丁对照品溶液按“3.1.3”的色谱条件进行测定，重复进样分析芦丁对照液6次，记录峰面积，并计算结果的相对标准偏差，结果如REF_Ref24765\h表STYLEREF1\s3-2所示。峰面积均值为176731.1667，RSD为0.0026%（n=6）,表示该测定方法下仪器具有良好的精密度。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s12精密度试验结果序号峰面积平均峰面积RSD（%）1176479176731.16670.002621765713177399417712951767406176069重复性实验用精密称量法平行制备6份处方药材，分别参照"3.1.1"项下的方法制备传统汤剂和煮散两种形式的供试品溶液。按照"3.1.3"项下的色谱条件进行分析检测，记录特征峰面积并计算RSD值。实验结果如REF_Ref15178\h表STYLEREF1\s3-3所示，汤剂供试品峰面积均值为102563.3，六次平行测定的相对标准偏差为0.1933%；煮散供试品实验结果结果可见REF_Ref15204\h表STYLEREF1\s3-4，峰面积均值为98059.8，RSD值达到0.0451%（n=6），表示该测定方法下样品稳定性良好。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s13汤剂供试品重复性实验结果序号峰面积平均峰面积RSD（%）1102907102563.50.193328663531247524807235127880692484表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s14煮散供试品重复性实验结果序号峰面积平均峰面积RSD（%）19355098059.80.045121008373974954926535104195699629稳定性实验采用万分之一分析天平准确称取处方药材1份，参照"3.1.1"项方法分别制备传统汤剂与煮散两种形式的供试品溶液。样品于制备后0、4、8、12及24小时五个时间点，在"3.1.3"项规定的色谱条件下进行HPLC分析，记录供试品中的指标成分色谱峰面积，并计算各时间点测定结果的相对标准偏差（RSD）。汤剂供试品实验结果如REF_Ref25138\h表STYLEREF1\s3-5所示，峰面积均值为101938，RSD为0.0269%（n=6）。煮散供试品实验结果结果如REF_Ref15247\h表STYLEREF1\s3-6所示，峰面积均值为100211.8，RSD为0.0866%（n=6）,表示该测定方法下样品稳定性良好。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s15汤剂供试品稳定性实验结果序号时间（h）峰面积平均峰面积RSD（%）101029071019380.0269241035943810139041210435752497442表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s16煮散供试品稳定性实验结果序号时间（h）峰面积平均峰面积RSD（%）1093550100211.80.086624945573893606412110709524108637加样回收率实验精密称取6份处方中所有药材，加入适量标准品，依据“3.1.1”项下操作，制得6份汤剂与煮散的供试品溶液。依据“3.1.3”项下色谱条件分析试样，记录峰面积。基于“3.1.4”项建立的线性回归方程，对芦丁标准品含量进行定量分析，并考察方法回收率及精密度。REF_Ref25278\h表STYLEREF1\s3-7所示，传统汤剂组的平均加样回收率为98.36%，六次平行测定的相对标准偏差为0.0237%；如REF_Ref25343\h表REF_Ref15420\h表STYLEREF1\s3-8所示，煮散组的回收率均值为103.21%，RSD同样为0.0593%（n=6）。结果表明，本分析方法具有良好的准确度和重现性。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s17汤剂供试品加样回收率实验结果序号样品含量（mg）加入量（mg）实测值回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）10.00360.00380.0075101.18998.3640.023720.00330.00350.006797.21230.00260.00280.005396.37240.00380.00350.006795.82850.00280.00290.0057101.11560.00270.00300.005798.467表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s18煮散供试品加样回收率实验结果序号样品含量（mg）加入量（mg）实测值回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）10.00360.00380.0076105.127103.2060.059320.00370.00390.0080109.50930.00350.00370.007299.11040.00320.00350.006696.20850.00330.00350.006798.55060.00340.00360.0074110.731供试品溶液中芦丁的含量测定取样品3批，精密称定处方中所有药材，参照“3.1.1”项下操作方法制备汤剂与煮散供试品溶液。基于“3.1.4”项下建立的线性回归方程，对芦丁标准品含量进行定量分析，结果如REF_Ref25559\h表STYLEREF1\s3-9所示。汤剂的芦丁含量为0.0150mg·g-1，RSD为0.0572%，煮散的芦丁含量为0.0170mg·g-1，RSD为0.0286%。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s19供试品含量测定结果编号汤剂（mg·g-1）煮散（mg·g-1）10.01490.017520.01410.017030.01580.0165x±s0.01±0.000.02±0.00RSD（%）0.05720.0286核苷类的含量测定供试品溶液的制备肺热清解煮散供试品溶液将方中药材按比例称取后置于100mL锥形瓶中，以料液比为1:10加入质量分数为0.9%生理盐水，浸泡30min后超声，超声60min，频率为300w，温度20℃，放冷，用尼龙纱布过滤，定容至100mL容量瓶中，将样品至于离心机中，在10000r·min-1条件下处理15min，收集离心管上层液体，经0.22μm微孔滤膜过滤后，最终获得待测煮散样品溶液。肺热清解汤剂供试品溶液确称取处方规定量的药材粉末，置入100mL锥形瓶内，以料液比为1:10加入质量分数为0.9%生理盐水，浸泡30min后超声，超声60min，频率为300w，温度20℃，放冷，用尼龙纱布过滤，定容至100mL容量瓶中，随后以10000r/min的转速离心15min，收集上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤，最终制得汤剂供试品溶液。对照品溶液的制备按REF_Ref15488\h表STYLEREF1\s3-10所示，精密称定以下各对照品适量，加超纯水溶解并配制成混合对照品溶液，以供备用。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s110对照品浓度品种混合对照品溶液mg·mL-1尿嘧啶0.04960胞苷0.11248肌苷0.25704色谱条件与系统适应性试验色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以超纯水为流动相B，按REF_Ref15590\h表STYLEREF1\s3-11进行梯度洗脱，流速1mL·min-1，柱温30℃，检测波长260nm，进样量为10uL。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s111梯度洗脱程序T/minA/%B/%01992549630199系统适应性试验取汤剂供试液、煮散供试液及其对照液，按照上述方法进行检测，实验结果如下（见REF_Ref30492\h图3）。在供试品汤剂、煮散两种剂型与混合对照品色谱图中的比较中，保留时间约5min、6min、17min处有吸收峰，三种对照品理论塔板数在均在6000以上，分离度均在3.9以上，表示此方法系统适用性良好。图SEQ图\*ARABIC3系统适用性试验HPLC图谱混合对照品（1-尿嘧啶；2-胞苷；3-肌苷）B-汤剂供试品C-煮散供试品精密度试验取混合对照品溶液按“3.2.3”项下的色谱条件进行测定，重复进样分析混合对照液6次，记录峰面积，并计算结果的相对标准偏差，结果如REF_Ref25830\h表STYLEREF1\s3-12所示。尿嘧啶峰面积均值为415457.5，RSD为0.000428%（n=6）。胞苷峰面积均值为239791.67，RSD为0.000452%（n=6）。肌苷峰面积均值为147056.67，RSD为0.000930%（n=6）。上述结果说明该测定方法下仪器具有良好的精密度。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s112精密度试验结果类别序号峰面积平均峰面积RSD（%）14155972415749尿嘧啶3415357415457.50.000428441538154153826415279胞苷1239916239791.670.00045222399383239746423971552397556239680肌苷1147167147056.670.00093021471753147075423971552397556239680核苷类线性关系考察采用逐级稀释法，将"3.3"项下制备的混合标准品溶液依次稀释为原浓度的1/2、1/4、1/16和1/32，建立五个不同浓度梯度的标准系列。各梯度溶液参照“3.2.3”项规定的色谱参数进行液相分析。以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得线性方程与线性范围。尿嘧啶线性关系考察采用“3.2.2”项制备的混合标准品溶液，经系列稀释后获得尿嘧啶标准品溶液，其浓度梯度依次为：0.00155、0.00310、0.01240、0.02480及0.04960mg·mL-1。以对照品浓度（X，mg·mL-1）为自变量，色谱峰面积（Y）为因变量进行线性回归分析，如图4所示，所得标准线性回归方程为Y=42807584.5984x+7460.6777（r=0.9999）。结果表明，尿嘧啶在0.00155~0.04960mg·mL-1浓度范围内呈现优异的线性响应，完全符合定量分析要求。图SEQ图\*ARABIC4尿嘧啶的标准曲线胞苷线性关系考察采用“3.2.2”项制备的混合标准品溶液，经系列稀释后获得胞苷标准品溶液，其浓度梯度依次为：0.00352、0.00703、0.02812、0.05624及0.1148mg·mL-1。以对照品浓度（X，mg·mL-1）为自变量，色谱峰面积（Y）为因变量进行线性回归分析，如图5所示，所得标准线性回归方程为Y=18673575.3459x+1893.7154（r=0.9999）。结果表明，胞苷在0.00352~0.1148mg·mL-1浓度范围内呈现优异的线性响应，完全符合定量分析要求。图SEQ图\*ARABIC5胞苷的标准曲线肌苷线性关系考察采用“3.2.2”项制备的混合标准品溶液，经系列稀释后获得肌苷标准品溶液，其浓度梯度依次为：0.00803、0.01600、0.6426、0.12852及0.25704mg·mL-1。以对照品浓度（X，mg·mL-1）为自变量，色谱峰面积（Y）为因变量进行线性回归分析，如图6所示，所得标准线性回归方程为Y=14229242.9829x+2821.1216（r=0.9999）。结果表明，胞苷在0.00803~0.25704mg·mL-1浓度范围内呈现优异的线性响应，完全符合定量分析要求。图SEQ图\*ARABIC6肌苷的标准曲线重复性实验精密称取方中所有药材6份，按“3.2.1”项下操作得供试品溶液，以“3.2.3”项下的色谱条件进行测定，记录峰面积，并计算结果的相对标准偏差。汤剂供试品中核苷类的重复性实验结果如REF_Ref26574\h表STYLEREF1\s3-13所示。尿嘧啶峰面积均值为65937，RSD为0.1471%（n=6）。胞苷峰面积均值为81767.8，RSD为0.1018%（n=6）。肌苷峰面积均值为217426.3，RSD为0.1464%（n=6）。煮散供试品核苷类的重复性实验结果如REF_Ref26702\hREF_Ref26702\h表STYLEREF1\s3-14所示。尿嘧啶峰面积均值为83597.3，RSD为0.0355%（n=6）。胞苷峰面积均值为99661.5，RSD为0.0667%（n=6）。肌苷峰面积均值为185871.7，RSD为0.0402%（n=6）。上述结果表示该测定方法下样品重复性良好。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s113汤剂供试品重复性实验结果类别序号峰面积平均峰面积RSD（%）尿嘧啶161938659370.1471277862356558455622576746666896胞80.101829102138922046953858595467680411948862272280肌苷3193406217426.30.1464423773552118856194366表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s114煮散供试品重复性试验结果类别序号峰面积平均峰面积RSD（%）183982284178尿嘧啶38546883597.30.035548306757814368674611026892104330399264胞苷49657699661.50.06675883066106804肌苷1182868185871.740.040221882713193406417531551810046194366稳定性实验采用万分之一分析天平准确称取处方药材1份，参照“3.2.1”项方法分别制备传统汤剂与煮散两种形式的供试品溶液。样品于制备后0、4、8、12及24小时五个时间点，在"3.2.3"项规定的色谱条件下进行HPLC分析，记录供试品中的指标成分色谱峰面积，并计算各时间点测定结果的相对标准偏差（RSD）。汤剂供试品中的核苷类稳定性实验结果如REF_Ref15789\h表STYLEREF1\s3-15所示，尿嘧啶峰面积均值为87912.4，RSD为0.0347%（n=6）。胞苷峰面积均值为61210.4，RSD为0.0635%（n=6）。肌苷峰面积均值为180628.8，RSD为0.0570%（n=6）。煮散供试品核苷类的稳定性实验结果结果如REF_Ref15808\h表STYLEREF1\s3-16所示，尿嘧啶峰面积均值为87926.6，RSD为0.0320%（n=6）。胞苷的峰面积均值为129723.6，RSD为0.0513%（n=6）。肌苷峰面积均值为185317.8，RSD为0.0632%（n=6）。上述结果表示该测定方法下样品稳定性良好。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s115汤剂供试品稳定性试验结果类别序号时间（h）峰面积平均峰面积RSD（%）1091938尿嘧啶249002387912.40.034738849004128521052487491胞苷105807061210.40.0635245942738578764126430752466372肌苷10194802180628.80.05702418838538174409412172243524173305表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s116煮散供试品稳定性试验结果类别序号时间（h）峰面积平均峰面积RSD（%）10836352486746尿嘧啶388869887926.60.03204129045452490100胞苷10122689129723.60.0513241368043812338141213585752412988710199222肌苷24194366185317.80.063238180442412169691524182868加样回收率实验精密称取6份处方中所有药材，加入适量标准品，依据“3.2.1”项下操作，制得6份汤剂与煮散的供试品溶液。依据“3.2.3”项下色谱条件分析试样，记录峰面积。基于“3.2.5”项建立的线性回归方程，对各标准品含量进行定量分析，并考察方法回收率及精密度。如REF_Ref27887\h表STYLEREF1\s3-17所示，在传统汤剂组中，尿嘧啶的平均加样回收率为97.44%，六次平行测定的相对标准偏差为0.0475%；胞苷的平均加样回收率为100.33%，六次平行测定的相对标准偏差为0.0596%；肌苷的平均加样回收率为99.13%，六次平行测定的相对标准偏差为0.0778%。如REF_Ref28586\h表STYLEREF1\s3-18所示，在煮散组中，尿嘧啶的回收率均值为100.10%，六次平行测定的相对标准偏差为0.0399%；胞苷的平均加样回收率为99.62%，六次平行测定的相对标准偏差为0.0407%；肌苷的平均加样回收率为98.98%，六次平行测定的相对标准偏差为0.0386%。结果表明，本分析方法具有良好的准确度和重现性。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s117汤剂供试品加样回收率试验结果类别序号样品含量（mg）加入量（mg）实测值回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）尿嘧啶10.00610.00630.012093.799997.74390.047520.00600.00610.011793.191630.00540.00550.0112105.220240.00520.00520.0104100.541050.00710.00720.014298.586960.00680.00700.013595.123910.01280.01300.025194.803320.01370.01400.027195.7598胞苷30.01450.01460.0303108.4809100.33450.059640.01530.01550.0318106.604750.01380.01400.027295.684360.01430.01500.0294100.673710.07380.07400.141591.526520.06600.06620.128894.846230.7370.07400.1524106.3724肌苷40.07380.07410.1558110.688199.12570.077850.06980.07010.138598.049860.07150.07170.138493.2713表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s118煮散供试品加样回收率试验结果类别序号样品含量（mg）加入量（mg）实测值回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）尿嘧啶10.00580.00610.011899.127100.10280.039920.00550.00570.0115104.818930.00570.00580.0116101.565140.00540.00560.010693.500750.00580.00600.0120102.991660.00560.00600.011598.6277胞苷10.02120.02150.042599.068799.61630.040720.01940.01950.0390100.516530.01970.01990.0409106.619740.01870.01900.036694.399450.02100.02120.041797.450760.02130.02140.042699.6425肌苷10.07380.07400.141591.526599.12570.038620.06600.06620.128894.846230.7370.07400.1524106.372440.07380.07410.1558110.688150.06980.07010.138598.049860.07150.07170.138493.2713供试品溶液中核苷类的含量测定取样品3批，精密称定处方中所有药材，按照“3.2.1”项下操作方法制备汤剂与煮散供试品溶液。依据“3.2.3”项下的色谱条件下进行进样分析，并代入“3.2.5”项下对应的指标成分的标准曲线计算其含量，结果如REF_Ref28550\h表STYLEREF1\s3-19所示。汤剂中的尿嘧啶含量为0.0162mg·g-1，RSD为0.5658%，煮散中的尿嘧啶含量为0.0243mg·g-1，RSD为0.0105%。汤剂中的胞苷含量为0.0344mg·g-1，RSD为0.1793%，煮散中的胞苷含量为0.0725mg·g-1，RSD为0.0258%。汤剂中的肌苷含量为0.1921mg·g-1，RSD为0.1173%，煮散中的胞苷含量为0.1760mg·g-1，RSD为0.0284%。表STYLEREF1\s3-SEQ表\*ARABIC\s119供试品核苷类含量测定结果类别编号汤剂（mg·g-1）煮散（mg·g-1）尿嘧啶10.02670.024220.00960.024230.01230.0246x±s0.02±0.010.02±0.00RSD（%）0.56580.0105胞苷10.04070.072920.02830.074130.03420.0705x±s0.03±0.010.07±0.00RSD（%）0.17930.0258肌苷10.18230.171020.17610.176130.21790.1810x±s0.19±0.020.18±0.01RSD（%）0.11730.0284结论与讨论结论本实验采用HPLC法对芦丁及三种核苷类成分进行含量测定并进行方法学考察。芦丁在260nm下有特定吸收峰，且芦丁浓度与峰面积成正比关系。在方法学考察中，本实验以浓度[X]对峰面积[Y]的线性回归方程为线性方程为Y=93083961.8988x-16309.7993，其相关系数r=0.9999，线性范围为0.0065~0.2076mg·mL-1；仪器精密度良好，RSD值为0.0027%；该方法具有较高的稳定性，两种剂型RSD值不超过0.01%；方法重现率较高，两种剂型RSD值不超过0.2%；结果表明，两种剂型平均加样回收率和RSD值大约在100%和0.12%。三种核苷类成分（尿嘧啶、胞苷、肌苷）在260nm下有特定吸收峰，且其浓度与峰面积成正比关系。在方法学考察中，三种核苷类成分按出峰时间排序，以浓度[X]对峰面积[Y]的线性回归方程分别为Y=42807584.5984x+7460.6777（r=0.9999）、Y=18673575.3459x+1893.7154（r=0.9999）、Y=14229242.9829x+2821.1216（r=0.9999），线性范围分别为0.00155~0.04960mg·mL-1、0.00352~0.1148mg·mL-1、0.00803~0.25704mg·mL-1；仪器精密度良好，RSD值均在0.0009%以下；该方法具有较高的稳定性，RSD值均在0.12%以下；方法重现率较高，RSD值均在0.15%以下；结果表明，平均加样回收率范围在97.74~100.33%和RSD值皆在0.078%以下。经过实验，建立起肺热清解煮散与汤剂中黄酮类和核苷类成分的含量测定方法，经过方法学考察，该方法适用性较高，稳定性、重复性良好。综上所述，本实验数据表明，在大多数情况下，煮散剂的应用具有操作简单、药材利用率高、疗效确切等显著优势。相较于传统汤剂的应用与煎煮方式，该方法不仅有效地节约了中药材的用量，提高了有效成分的煎出率，减少挥发性成分损失，大大缓解了当前优质中药材资源培养困难、使用率不高等困境，还能够便于患者携带、医院代煎形式的推广。医院代煎模式相较于家庭的煎煮更加的科学、方便，保证了药液中有效成分的含量足额，又能建立起科学、系统、可追溯的质量控制标准及评价体系，可以确保中药煮散的安全性、有效性和稳定性REF_Ref3582\r\h[11]，医院有质量患者也放心。讨论本研究以中山市黄圃医院的院内制剂肺热清解口服液的原配方为基础，对比分析了传统汤剂与煮散剂两种剂型的质量差异。通过测定关键有效成分的含量变化，旨在为临床合理选用剂型提供科学依据，优化该剂型的临床应用方案。指标成分的选择芦丁（C27H30O16）广泛存在于芸香科植物如槐米、荞麦中，为淡黄色针状结晶，属于黄酮苷类物质，由槲皮素（C25H