高中三维专题二轮复习学案生物江苏专版第一部分专题八现代生物科技专题

专题八现代生物科技专题

点清二线明；面广一专题主干知识整合

.......1建议］学忖理一理,平时4H二朝，考前忆二忆

［理清一知识联系］

基因工程的慨令及基本工具体内受精和早期胚胎发育

川因I：程的某本操作程序胚体外受希和早期胚胎培并

基内r程的应用与蛋白质工程的

胚胎移植

I

胚胎分割

细胞I：程的概念胚胎观

现专胚胎干细胞

基工程、

题

植物细胞的全能性因代生物学

就面藤豕1植物组附

，工程技术什转基因生物的安全性

生物技术的

的安么

植物体细胞杂交安全性和伦生物技术的伦理问题

—

全性理问题

生物武器的种类

动物细胞培养和伦

核移机技木动物绢胞理问

生杰「•程特点

动物细胞咬含工程题与

生态工程原理

嬴降瀛丽备生态

4为I•程的实例和发展前景

工程

聚焦基困工程的总理及应用高

考

高

琮合考我基因三程后蛋白质【比胚胎工程技术及应用

考

考

考

什

植物细鼠1：程及应用什聚焦胚胎干细胞

么

动物细电工应及应用么

你合考着生态工程的总理及应用

［记清——主干术语］

1.基因工程操作的基本工具有限制性核酸内切醵、DNA连接酶和载体。

2.限制酶具有检显性，即一种限制酶只能识别特定的核甘酸序列，并在特定的位点上

进行切割。

3.质粒是常用的载体，它是一种小型的环状DNA分子，具有一个至多个限制酶切割

位点及标记基因。

4.基因工程的基本操作程序：目的基因的获取一基因表达载体的构建一将目的基因导

入受体细胞f目的基因的检测与鉴定。

5.基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

6.目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，导入动物细胞常用显微注射法，导入微

生物细胞常用感受态细胞法。

7.检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因常用货运一分壬杂交技术，检测目的

基因是否进行了转录同样是采用分子杂交技术，检测目的基因是否翻译成蛋白质常用抗原

—抗体杂交技术。

8.蛋白质工程的操作过程：从预期的蛋白质功能出发f设计预期的蛋白质结构一推测

应有的氮基酸序列一找到相对应的脱氧核甘酸序列（基因）一基因表达一产生需要的蛋白质。

9.植物组织培养的基本过程：

外植体三空愈伤组织*根、芽~植物体。

10.植物体细胞杂交需要用藤解法制备原生质体，所用的酶包括纤维素.酸和果胶酶。

11.人工诱导原生质体融合的方法分为物理法和化学法，物理法包括离心、振动、电

激等，化学法一般用塞乙一酵作为诱导剂。

12.动物细胞培养需横足的条件有充足的营养、适宜的温度和pH、气体及无菌、无鎏

的环境。

13.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高，并可以大量制备的优点。

14.诱导动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。

15.早期胚胎发育的过程：受精卵一卵裂期一桑根胚一囊胚一原肠胚。

16.胚胎的早期培养所需培养液的成分包括：无机盐、有机盐（两盐）；维生素、激素（两

素）；氨基酸、核苴酸（两酸）以及水、血清等。

17.胚胎移植的基本程序：对供、受体的选择和处理一配种或进疝人工授精一对胚胎

的收集、检查、培养或保存一胚胎移植一移植后的检查。

18.胚胎移植过程中两次使用激素，第一次用孕激素对供、受体进行同期发情处理，

第二次用促性腺激素对供体进行超数排卵处理。

19.生态工程建设的目的是遵循自然界物质循环的规律，充分发挥资源的生产潜力，

防止环境污染，达到经济效益与生态效益的同步发展。

20.生态工程所遵循的基本原理有物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡

原理、整体性原理及系统学和工程学原理。

［澄清——思维误区］

关注点1“载体”与“膜载体”区分不清

［澄清］基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是

DNA分子，其功能是携带目的基因进入受体细胞；膜载体是蛋白质，其功能是协助某些物

府进出细胞。

关注点2误认为限制酶是一种酶

［澄清］限制酶是一类酶，而不是一种酶。

关注点3误认为启动子是起始密码子（RNA）,终止子是终止密码子（RNA）

［澄清］启动子（DNA片段）中起始密码子（信使RNA上的三个相邻碱基）；终止子（DNA

片段）K终止密码子（信使RNA上的三个相邻碱基）。

关注点4对蛋白质工程的实质与基因工程的实质认识不清

［澄清］基因工程是定向改造或生产人类所需蛋白质（一般为自然界中存在的蛋白质），

而蛋白质工程是定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品(可生产

自然界中不存在的蛋白质)。

关注点5误认为植物组织培养产生新个体属于有性生殖

［澄清］植物组织培养产生新个体不属于有性生殖，而属于无性繁殖，细胞分裂方式为

有丝分裂，包括脱分化和再分化两个阶段。

关注点6误认为获取细胞产品与人工种子的时期相同

［澄清］获取细胞产品的时期应为脱分化之后再分化之前的愈伤组织，而制作人工种子

需要在再分化后形成的胚状体阶段。

关注点7对植物组织培养与动物细胞培养的区别不明

［澄清］(1)植物组织培养和动物细胞培养都存在细胞的培养过程，但植物细胞可以先分

裂再分化，而动物细胞只分裂不分化。

(2)植物组织培养可鼠培养成新个体，动物细胞培养只能培养出一团细胞，不能培养成

一个新个体。

关注点8对受精标志与受精完成的标志认识不清

［澄清］(1)卵子是否受精的标志是第二极体的形成(即在透明带和卵细胞膜间隙观察到

两个极体)。

(2)受精完成的标志是雌雄原核融合成含二倍染色体的合子。

关注点9误认为胚胎发育的过程中，细胞的全能性完全相同

［澄清］胚胎发育的过程中，细胞的全能性并非完全相同，桑格胚具有全能性，囊胚是

开始分化的阶段，原肠胚时期已出现高度分化。

关注点10对胚胎移植中的“同种”认识不清

［澄清］同种动物之间进行胚胎移植易成功。这里的“同种”是指“同物种”。

关注点11误认为胚胎分割是有性生殖

［澄清］胚胎是由受精卯形成的，属于有性生殖；胚胎分割技术属于无性生殖，也属

于克隆。

关注点12认为不同的生态工程所依据的原理相同

［澄清］建立不同的生态工程时要依据不同的原理，因她制宜，不能相互照搬。

关注点13误认为实现生态经济有时可以不遵循生态学的基本原理

［澄清I实现生态经济一定要遵循生态学的基本原理，如果违背这个原理，就一定会由

盛转袤，最终导致崩溃。

关注点14误认为污染物是不能利用的资源

【澄清I对环境造成危害的污染物，采取一定的措施和技术，就能够进行回收和循环利

用，这样不但能够减少环境污染，而且提高了资源的利用效率，减少了资源的浪费。

专题复习2。

向主攻点之（一）

基因工程和克隆技术

串基础

主干知识◎一网打尽（基稳才能楼高）

一、基因工程

1.基因工程的基本工具（填图）

识别特定的核苛酸序列并切开特定部位

1/HW

限制性核的两个核甘酸之间的用磷酸二葡键

基酸内切博

因慢到产生黏件末端或\平末端

工

在两个核甘酸之同形成回磷酸：防键以

程

DNAizHW

的连接两个DNA片段

连接施

基DNA连接陈连接团黏性末端

本^T,DNA连接施：既能连接粘性末端

工也能连接回平末端

具

一凰胆入噬菌体的有生物、⑦动植物病温等

投体

7须具备口能自我狂制:有一个至多个国限制都切

的豕祥口割位在:仃特殊的剧标记枚I-

2.基因工程的基本操作程序（填空）

（1）目的基因的获取途径:

方法具体操作

直接分离从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取

化学己知核昔酸序列的较小基因,直接利用DNA合成仪用化学方法合成，

合成不需要模板

逆转

以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成

录法

人

①原理：DNA复制

工

②条件：模板DNA、引物、脱氧核昔酸、热稳定的DND聚合酶

合

PCR:变性：90〜95℃,DNA解旋

成

技术1

心皿复性：55〜60C，⑦引物与单链ENA结合

扩增

延伸：70〜75C,在⑻热稳定的DNA

聚合酶作用下合成子链

⑵基因表达载体的构建——重组质粒的构建:

①表达载体的组成：目的基因+启动壬+终止壬+标记基因+复制原点。

②启动子和终止子：启动子是RNA聚合酶结合位点,启动转录；终止子是终止转录的

位点。

⑶将目的基因导入受体细胞:

植物细胞动物细胞微生物细胞

农杆菌转化法、基因

常用方法显微注射技术感受态细胞法（用Ca?+处理）

枪法、花粉管通道法

受体细胞受精卵、体细胞受精卵原核细胞

（4）目的基因的检测与鉴定：

①导入检测：DNA分子杂交技术（使用DNA探针）。

'转录检测：分子杂交技术检测mRNA

②表达检测｛翻译检测：用相应的抗体进行抗原一

^抗体杂交

③个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等接种实验。

3.蛋白质工程（填图）

基因修饰或辿操作蛋预期蛋白质的功能

।

因合成白设计预期的⑻蛋白质结构

质设计

工推测应有的氨族酸序列

改造现有蛋白质,沌程।

或制造出口新的程找到相对应的团脱到核仔

结果

蛋白成酸赤列（基因）

二、细胞工程

1.植物细胞工程的基本技术（填图）

外植体蛆色B急伤组织再分化•胚状体或丛芽红植株i

△-裒利1£市一

叫/植物组织K养技术鹘谕旃蔽右淞赢；

/二二二二二二二

*、,理论♦组胞腴的⑶流动性、细胞:

\*/、（植物0f体叫杂交技的全能性-------：

基本|过程

耐丽信加底二位蕨体ft!不氤施瀛二褊旅去二后痴而记

2.动物细胞培养（填图）

动物组织一打单个细胞一细胞用液一切原代培养一传代培养

过程

I妆

除确

3性

长

因

子W

臬

・

元

之

素

伽

清

入

⑹血

比苏凰无神胸碍代亲分

...............'二二二二二二二二二二

出5七管1+而温FL；温度:因36.5±0.5C

里媚a,匕炮靠幽।I温度和泌丹山：甑左红一

3.动物细胞核移植技术（填图）

一_^」胚胎细胞核移植

:动物体细胞核，」^至

:具有Q］全能件厂麻础②体细胞梭移植一

基木过程|

.................1.....................

⑶核移植一重组细胞一国里:组胚胎一个体

4.动物细胞融合与单克隆抗体(填图)

「X2三标G品y：通卷施「扇SI工豆:而赖不

方法

动物细胞融容'念义;突破「防,啕

而施H好血流册£:它方法的局限：

用

特异性强、由国祸蘸而瓯

优点

同灵敏度高、单克隆抗体员用冏于治疗疾病:

并可大收制备;和团运载药物:

制备

B淋巴细胞+骨惭瘤细胞一阳杂交瘤细胞一单克隆抗体

研考点

高频考点◎一包在内(方向比努力更重要)

［考什么--------------考点・考法探究］

考点(一)基因工程的操作工具、原理及应用

1.将经过扩增的DNA和质粒用相同的限制酶进行如右图所示的切...

割，电泳得到纯净的B片段和D片段，将两种片段置于适宜的缓冲液(4；

中用DNA连接酶处理。如果只考虑两个片段的环状连接，则能形成不(())

同核昔酸序列的环状DNA的种类是()\士夕

A.6种B.3种

C・2种D.1种

解析：选A只考虑两个片段的环状连接，能形成的环状DNA有B片段与B片段同

向连接的、B片段与B片段反向连接的、D片段与D片段同向连接的、D片段与D片段反

向连接的、B片段与D片段同向连接的及B片段与D片段反向连接的，共6种。

I联知识］基因工程中的限制酶和DNA连接酶

(1)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。限制酶是一类酶，不是一种酶。限制

酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性

失活。

(2)在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末

端。

(3)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是脱氧核甘酸之间的磷酸二酯键(不是氢键)，只

是一个切开，一个连接。限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别

序列或识别序列已经被修饰。

(4)限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因

的完整性，有利于对目的基因的检测。

（5）为使目的基因与载体形成相同的DNA片段末端连接,通常使用同一种限制酶将二者

切割，但如果不同的限制酶切割DNA分子所产生的末端也存在互补关系时，则两末端也可

连接。用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和

目的基因之间的连接。

2.（2017•江苏高考）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划

通过多聚能链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化

处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

模板DNA引物1引物2

E3CZ3

941cl步骤1

一乏三二忑继续循环

72C1步骤

55rI步骤2CZ3

..-^-....<23

_____________CZ3

tZ255ct步骤2

72cl步骤3

第二轮循环

*-.......--

------------tZ294c步骤：

⑴从高表达MT蛋白的生物组织中提取niRNA,通过_______获得用丁PCR

扩增。

（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2）,为方便构建重组质

粒，在引物中需要增加适当的________________位点。设计引物时需要避免引物之间形成

,而造成引物自连。

（3）图中步骤1代表,步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一

轮循环。

（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏

的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但________的引物需

要设定更高的退火温度。

（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有（填序号：

①升高退火温度②降低退火温度③重新设计引物）。

解析：（l）PCR技术可在体外对DNA进行扩增，模板可以是mRNA经过逆转录获得的

cDNAo（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2）时，需在引物中

增加适当的限制性核酸内切酶的识别序列，便于目的基因与质粒的连接。为了避免引物自

连，设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对。（3）根据PCR的过程可知，图中步骤

1为变性，步骤2为退火（复性），步骤3为延伸，这三个步骤构成一个循环。（4）退火温度的

设定与引物长度、碱基组成有关，过高的退火温度会破坏引物与模板的碱基配对。因G、C

之间的氢键数多于A、T之间的氢键数，故GC含量高的引物需要设定更高的退火温度。（5）

如果PCR反应得不到任何扩增产物，可能的原因是退火温度过高使扩增效率降低，也可能

是未按照目的基因两端的核昔酸序列来设计引物.因此可以采取的措施是降低退火温度、

重新设计引物等。

答案：(1)逆转录cDNA(2)限制性核酸内切酶微基互补配对(3)变性(4)引物与

模板GC含量高

⑸②③

［联知识I解读PCR技术_____________________________________

(1)原理：利用DNA双链复制的原理，在体外将基因的核昔酸序列不断地加以复制，

使其数量呈指数方式增加。

(2)条件及作用：

条件作用

在一定的缓冲液中进行提供相对稳定的pH环境

四种脱氧核昔酸作为合成DNA子链的原料

DNA母链作为DNA复制的模板

TaqDNA聚合酶催化合成DNA子链

引物使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核甘酸

90〜95℃变性：使DNA片段双链解开

温度

55〜60℃复性：使解链的两条DNA单链分别与相应的引物结合

控制

70〜75℃延伸：ThqDNA聚合酶催化子链合成

(3)解题规律总结:

①模型图示：

轮循环二轮循环三轮循环

!-----

/-A

模板/・.\B=A

DNA/

\

BE

----；/■A

-----；

——；

②规律总结:

循环数第一轮甯一$6-第三轮第〃轮

DNA分子数2482"

含引物的DNA分子数2482"

含引物A(或B)的DNA分子1=2'-13=22-17=23-12"-1

同时含引物A、B的DNA分子数0=2,-22=2~26=23-22〃一2

共消耗的引物数量2=22-26=23-214=2-22"+i—2

含与脱氧核甘酸链等长的DNA分子数0=21-20=22-42=23-62n-2n

DNA分子种类2455

考点（二）综合考查基因工程的应用

3.（2017・南京一楼）下图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因。请据

图回答问题：

Gfp①狗N②L—、

联p.飞

鬻囊产

“小■居®

小鼠C代孕母仪1＞移植

（1）据图分析可推知，载体上的Neo为________基因，其表达产物可与发挥作

用而最终将的胚胎干细胞筛选出来。

（2）完成过程①需要的工具酶是,完成过程②常用的方法是____________,

完成过程⑤后，胚胎干细胞应与囊胚中的部位相结合。

（3）进行过程⑥之前，要对代孕母鼠用某种激素处理，目的是

（4）胚胎干细胞的培养装置应置于的气体环境中，以保证培养环境pH

的相对稳定。

解析：（1）根据题意知.Gfp是目的基因.所以载体上的Ne。为标记基因。根据困可知.

其表达产物可与G418发挥作用而最终将导入目的基因的胚胎干细胞缔选出来。（2）完成过

程①需要的工具酶是DNA连接酶，完成过程②常用的方法是显微注射法，完成过程⑤后，

胚胎干细胞应与囊胚中的内细胞团部位相结合。（3）过程⑥是胚胎移植，进行胚胎移植之前，

对代孕母鼠进行同期发情处理。（4）细胞培养液中通入含5%的CO2的空气可以保证培养环

境pH的相对稳定。

答案：（1）标记G418导入目的基因（2）DNA连接酶

显微注射法内细胞团（3）使其同期发情（4）含一定量（5%）的CO?

I防易错1—基因工程操作中的易错点

（1）基因工程操作过程中只有第三步（将目的基因导入受体细胞）没有碱基互补配对现

象。

（2）目的基因的插入位点不是随意的，基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的

基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

（3）植物细胞的全能性较高，可经植物组织培养成为完整植物体，因此受体细胞可以是

受精卵也可以是体细胞；动物基因工程中的受体细胞一般是受精卵。

（4）基因表达载体中，启动子（DNA片段）#起始密码子（信使RNA上三个相邻碱基）；终

止子（DNA片段）#终止密码子（信使RNA上的三个相邻城基）。

（5）基因表达载体的构建是最核心的一步，在体外进行。个体水平上的检测和鉴定是衡

量基因工程操作是否成功的最简单最有效的方法。

考点（三）植物细胞工程及应用

4.（2017•苏州一楼）设计植物体细胞杂交实验时，如果期望获得性状优良的作物新品种，

通常不需要考虑的是（）

A.选择具有优良性状的亲本

B.选择能去除细胞壁的酶

C.亲本间的生殖隔离

D.培养基中生长素和细胞分裂素的浓度及比例

解析：选C设计植物体细胞杂交的目的是期望获得性状优良的作物新品种，所以需

要选择具有优良性状的亲本；由于细胞壁的存在会阻碍细胞的融合，所以要用纤维素酶和

果胶酶去除细胞壁；由于植物体细胞杂交可以打破物种间的界限，故不需要考虑亲本间的

生殖隔离；培养基中生长素和细胞分裂素的浓度及比例会影响细胞的脱分化和再分化。

5.研究小组用土壤农杆菌与陆地棉叶肉细胞原生质体共同培养获得了转基因陆地棉，

过程如下。请回答下列问题:

（1）图a表示从已经消毒的叶片中剪取部分植物组织细胞，图b表示制备原生质体，培

养皿中要加纤维素酶和果胶酶，其原因是O

（2）图c表示用培养基培养原生质体，培养基中加入了适宜浓度的蔗糖，其主要作用是

和。培养一段时间后，将其与土壤农杆菌混合

培养，使重组Ti质粒进入,重组Ti度粒上______________段携带了目的

基因，可以整合到植物细胞的__________________上。然后通过离心（图d）的方法，除去

多余的土壤农杆菌。

（3）图e表示将原生质体培养成愈伤组织，然后将其转移到含有一定抗生素的培养基中

进行培养（图f）,抗生素的作用是o

（4）将愈伤组织转移培养基继续培养（图g）,同时注意调整植物生长调节剂的种类和含

量，其原因是________________________________________,最终获得完整的植株（图h）。

解析：困示是通过土壤农杆菌与植物细胞原生质体共培养的方法获得转基因植物的过

程。a为获取植物细胞；b为去除细胞壁获取原生质体的过程；c为用培养基培养原生质体;

d为土壤农杆菌与桢物细胞原生质体共培养：。表示脱分化过程：f袤示用选择培养基进行

筛选培养；g表示再分化过程；h表示转基因植物幼苗。（1）图b表示用纤维素酶和果胶酶两

种酶来制备原生质体，原因是植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，纤维素酶和果胶酶

可除去细胞壁。（2）图c表示用培养基培养原生质体，培养基中加入了适宜浓度的蔗糖，其

主要作用是为原生质体提供碳源、能源并调节渗透压维持原生质体的形态，将其与土康农

杆菌共同培养，使携带目的基因的Ti质粒的T・DNA进入植物细胞，整合到植物细胞的染

色体（染色体DNA）上，然后通过离心的方法，除去多余的土壤农杆菌。（3）图e表示将原生

质体培养成愈伤组织，然后将其转移到含有一定抗生素的培养基中进行培养（图f）,抗生素

的作用是筛选出含目的基因的植物细胞。（4）植物生长调节剂的种类和含量会影响愈伤组织

的分化，故将愈伤组织转移培养基继续培养（图g）,同时注意调整植物生长调节剂的种类和

含量。

答案：（1）植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，纤维素酶和果胶酶可除去细胞壁（2）

为原生质体提供碳源和能源调节渗透压维持原生质体的形状原生质体（植物细胞）

T-DNA染色体（染色体DNA）（3）筛选出含目的基因的植物细胞（4）植物生长调节剂的

种类和含量会影响愈伤组织的分化

［联知识］关注植物细胞工程的几个问题

（1）植物细胞A和植物细胞B杂交获得的杂种细胞的类型有三种：AA型、BB型、AB

型，符合要求的只有AB型，需要进行筛选。

（2）杂种细胞形成的标志：新的细胞壁的生成。

（3）杂种植株遗传物质的变化：杂种植株的变异类型属于染色体变异，杂种植株的染色

体数通常是两亲本细胞染色体数目之和，杂种植株属于异源多倍体。

（4）植物组织培养时植物激素和光照的使用：

①植物激素的使用：脱分化阶段先使用生长素，后使用细胞分裂素，以促进细胞的分

裂；再分化阶段生长素比例较高，以促进根的形成。

②光照的使用：脱分化阶段不需要给予光照，再分化阶段需要给予光照，以利于叶绿

素的形成。

（5）利用植物组织培养生产细胞产物时，有时只需将外植体培养到愈伤组织，从愈伤组

织中获取产物。

考点（四）动物细胞工程及应用

6.（2017・南通一模）下列关于动物细胞培养技术的叙述，错误的是（）

A.生物组织经胰蛋白酶消化处理制成细胞悬液，再培养可获得单层细胞

B.研究中使用的细胞通常培养至10代以内，以保持正常的二倍体核型

C.为防止杂菌污染，生物组织、培养液及培养用具需要进行灭菌处理

I）.动物细胞培养是制备单克隆抗体、细胞核移植、胚胎工程等技术的基础

解析：选C生物组织灭菌处理后会死亡，无法培养，生物组织通常做消毒处理C

7.胰岛B细胞移植是一种有效治疗糖尿病的方法。利用小鼠再生胰腺提取物（RPE）可

定向诱导人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）分化成胰岛B细胞。请回答下列问题：

（1）取人羊膜组织刮除血块、上皮细胞，冲洗后剪碎，然后用酶处理,

最终制成hAMSCs悬液。将细胞悬液放入培养瓶中进行原代培养，当细胞贴壁生长到一定

阶段时，出现现象，此时细胞停止分裂增殖，这时需要将细胞进行相关

处理，然后进行传代培养。

（2）取传至第3代的hAMSCs放入细胞培养板，同时加入RPE进行诱导分化培养。该

代hAMSCs能保持细胞正常的。诱导分化培养15天后，提取细胞的

,用胰岛素基因探针进行分子杂交，可初步检测hAMSCs是否分化成胰岛

B细胞。（3）用人的杂交瘤细胞来生产人源单克隆抗体难以成功，因此单克隆抗体大都来自

鼠源。但鼠源单抗在人体内使用时，会产生较强的免疫原性，为解决这一问题，发明了嵌

合抗体，大致过程如图所示：

v区111110

CK1【加，

HH

抗体示意图

肿的抗原免疫小鼠,

U/

取小淋巴细胞小双骨他抽细胞么4

I—:〃构戏

杂交热细胞株U＞获取抗体V1、\1基因

筛选检测

克隆培养抗体分泌细胞

鼠源服J克隆抗体X

嵌合抗体能降低鼠源抗体的免疫原性，从图中可以推测，免疫原性的产生主要与抗体

的（填“V区”或"C区”）有关，嵌合抗体的生产属于_______________，程范畴。

（4）科学家们用细胞融合实验证明，分化的细胞中存在“闲置不用”的结构基因。他们

把大鼠肝肿瘤细胞和小鼠成纤维细胞融合成杂交瘤细胞，筛选出含有两套肝细胞染色体和

一套成纤维细胞染色体的细胞。这些细胞既保持了合成大鼠肝细胞3种特异蛋白的能力,

也合成了小鼠肝细胞这3种蛋白，但是在正常的小鼠成纤维细胞中从不合成这些蛋白质。

由此可见，融合实验证明了小鼠成纤维细胞

解析：⑴用胰蛋白酹（或胶原蛋白酶）处理人羊膜组织，可制成hAMSCs悬液。将细胞

悬液放入培养瓶中进行原代培养，当细胞贴壁生长到一定阶段时，会出现接触抑制现象。

（2）10代以内的细胞可以保持正常的二倍体核型，因此传至第3代的hAMSCs能保持细胞

正常的（二倍体）核型。细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此要检测hAMSCs是否分

化成胰岛B细胞，可提取细胞的RNA（或mRNA）,用胰岛素基因探针进行分子杂交。（3）

从图中可以推测，免疫原性的产生主要与抗体的C区有关。嵌合抗体的生产属于蛋白质工

程范畴。（4）融合实验证明了小鼠成纤维细胞含有不表达的但肝细胞专一表达的基因，在特

定条件下这些“闲置基因”也可表达。

答案：（1）胰蛋白（或胶原蛋白）接触抑制

（2）（二倍体）核型RNA（3）C区蛋白质（4）含有不表达的但肝细胞专一表达的基

因，在特定条件下这些“闲置基因”也可表达

［联知识］关注制备单克隆抗体的两个常考点

（1）三种细胞的特点：

①免疫的B淋巴（浆）细胞：能分泌抗体，不能增殖。

②骨髓瘤细胞：能大量增殖，不能分泌抗体。

③杂交瘤细胞：既能分泌抗体，又能大量增殖。

（2）两次筛选目的不同：

①第1次：获得能分泌抗体的杂种细胞。

②第2次：获得能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞。

［怎样考--------------考题•考情分析］

1.（2014•江苏高今）（多选）下列关于基因工程技术的叙述，错误的是（）

A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核昔酸序列

B.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应

C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因

D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达

解析：选ABC限制性核酸内切酶大多特异性识别6个核昔酸序列，但并非都只识别

6个核昔酸序列；PCR中耐高温的DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用；载体质粒上

抗生索抗性基因可作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，而不是抗生素合成基因；目

的基因导入受体细胞后不一定都能正常表达。

2.（2016•江苏高考）下列有关细胞工程的叙述，正确的是（）

A.PEG是促细胞融合剂，可直接诱导植物细胞融合

B.用原生质体制备人工种子，要防止细胞破裂

C.骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体

D.核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体

解析：选DPEG是促细胞融合剂，能诱导植物原生质体融合，融合前需先用酶解法

去除植物细胞的细胞壁；制备人工种子应该用组织培养形成的胚状体、不定芽、顶芽和腋

芽等为材料，而不是原生质体；单克隆抗体是杂交瘤细胞产生的，骨髓瘤细胞不能分泌抗

体；利用核移植技术克隆动物时，是将体细胞的细胞核移入去除细胞核的卵母细胞中，所

以克隆动物的线粒体DNA来自供卵母体。

3.（2014•江苏高考）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后

在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题:

莒

澄

-H

M

为

称

程

过