病理科基孔肯雅热检测试题及答案

病理科基孔肯雅热检测试题及答案一、单项选择题（每题1分，共30分。每题只有一个最佳答案）1.基孔肯雅热（CHIKV）属于哪一病毒科？A.黄病毒科B.披膜病毒科C.布尼亚病毒科D.呼肠孤病毒科答案：B2.CHIKV基因组为单股正链RNA，其长度约为：A.3.7kbB.7.4kbC.11.8kbD.15.2kb答案：C3.下列哪项不是CHIKV结构蛋白？A.CB.E1C.E2D.NS1答案：D4.在RT-PCR检测中，CHIKV最稳定的保守靶基因是：A.E1B.E2C.nsP1D.26S启动子区答案：A5.用于CHIKV血清学确诊的“金标准”抗体是：A.IgAB.IgMC.IgGD.IgE答案：B6.下列哪种细胞系对CHIKV最敏感且常用于病毒分离？A.VeroE6B.A549C.C6/36D.BHK-21答案：C7.在C6/36细胞上培养CHIKV，最适温度是：A.25℃B.28℃C.33℃D.37℃答案：B8.CHIKV引起细胞病变效应（CPE）的典型形态为：A.细胞圆缩、脱落B.合胞体形成C.胞浆内包涵体D.细胞拉长呈纺锤形答案：A9.实时荧光RT-PCR中，用于检测CHIKVRNA的内参基因常选用：A.β-actinB.GAPDHC.18SrRNAD.无需内参答案：D10.下列哪项可造成CHIKVRT-PCR假阴性？A.标本反复冻融1次B.引物覆盖E1-226突变位点C.提取试剂含carrierRNAD.使用热启动Taq酶答案：B11.在宏基因组测序中，CHIKV序列占比≥多少时可考虑为阳性？A.0.1%B.1%C.5%D.10%答案：B12.关于CHIKVIgM捕获ELISA，下列说法正确的是：A.包被抗人IgGB.检测抗原为E1/E2重组蛋白C.酶标二抗为抗人IgM-μ链D.底物显色后需加终止液硫酸答案：C13.下列哪项不是CHIKV交叉反应抗体干扰源？A.登革病毒B.奥尼永尼翁病毒C.罗斯河病毒D.日本脑炎病毒答案：D14.在免疫组化中，CHIKV抗原主要定位于：A.胞核B.胞浆C.胞膜D.线粒体答案：B15.用于石蜡切片抗原修复的常用缓冲液是：A.Tris-HClpH6.0B.EDTApH8.0C.柠檬酸pH6.0D.PBSpH7.4答案：C16.下列哪种染色可显示CHIKV感染后滑膜组织中的病毒抗原？A.HEB.PASC.免疫荧光D.抗酸答案：C17.在病毒中和试验（PRNT）中，判定CHIKV阳性需抑制率≥：A.30%B.50%C.70%D.90%答案：B18.PRNT中，病毒稀释度常采用：A.2倍系列B.5倍系列C.10倍系列D.100倍系列答案：C19.下列哪项可减少CHIKV中和试验的细胞毒性干扰？A.加入1%琼脂覆盖层B.使用Vero细胞C.加入2%FBSD.使用CPE终点法答案：A20.关于CHIKV微中和法（microneutralization），错误的是：A.可在96孔板完成B.读板时间为72hC.需使用中性红染色D.无需病毒回滴答案：D21.在全自动核酸提取中，CHIKVRNA回收率下降最常见原因是：A.磁珠过量B.洗脱体积>100μLC.蛋白酶K失活D.乙醇浓度<70%答案：C22.下列哪项属于CHIKV分型基因？A.E1-226B.E2-209C.nsP3-284D.3'UTR答案：A23.东/中/南非洲（ECSA）型CHIKV特征性突变是：A.E1-A226VB.E2-I211TC.nsP1-L374FD.E1-D284E答案：A24.关于CHIKV数字PCR（dPCR），正确的是：A.需标准曲线B.可绝对定量C.灵敏度低于RT-PCRD.不能区分活病毒答案：B25.在生物安全方面，CHIKV培养应在：A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-4答案：B26.下列哪项不是CHIKV实验室暴露后预防措施？A.立即用75%乙醇消毒B.报告生物安全官C.服用奥司他韦D.医学观察14天答案：C27.关于CHIKV质控品，正确的是：A.可使用灭活病毒B.不可使用假病毒C.无需覆盖突变株D.无需冷链运输答案：A28.在多重RT-PCR体系中，CHIKV与登革病毒共用：A.反转录酶B.引物对C.探针荧光通道D.内标答案：A29.下列哪项可导致CHIKVIgG假阳性？A.类风湿因子B.溶血C.脂血D.高胆红素答案：A30.关于CHIKV快速层析试纸条，错误的是：A.检测IgM/IgGB.灵敏度>95%C.需血清5μLD.结果15min内读取答案：B二、配伍题（每题1分，共10分。每组选项可重复选用）A.病毒分离B.实时RT-PCRC.IgMELISAD.PRNTE.免疫组化31.急性期血标本，发病2天，首选32.慢性关节炎滑膜活检，检测抗原33.疫苗免疫后评价中和抗体34.回顾性血清流行病学调查35.疑似病例，RNA阴性但需确诊答案：31-B32-E33-D34-C35-C三、填空题（每空1分，共20分）36.CHIKV基因组5'端具有________结构，3'端具有________尾。答案：帽子；Poly(A)37.在E1蛋白中，第226位氨基酸由丙氨酸突变为________，可增强病毒对________蚊的适应性。答案：缬氨酸；白纹伊蚊38.实时RT-PCR阈值（Ct）≤________判定为CHIKVRNA阳性。答案：3839.病毒滴度TCID50计算公式为：l其中L为________，d为________。答案：最高稀释度对数；稀释系数对数40.免疫组化一抗工作浓度需经________矩阵确定，常用封闭剂为________血清。答案：棋盘滴定；山羊41.多重荧光PCR需选择不同________的探针，通道间________应<5%。答案：荧光基团；串扰值42.质控品应覆盖高、中、低三个浓度，其中低值应接近________限。答案：检测43.数字PCR分区数一般为________，可检测单拷贝。答案：2000044.病毒培养出现CPE后，需用________染色验证，镜下可见________色折光颗粒。答案：结晶紫；紫45.交叉反应鉴别需用________Westernblot，抗原经________电泳分离。答案：免疫印迹；SDS四、判断题（每题1分，共10分。正确写“T”，错误写“F”）46.CHIKV可在4℃长期保存而不失活。答案：F47.灭活CHIKV可用于BSL-1实验室。答案：T48.IgM阳性即可排除登革感染。答案：F49.实时RT-PCR探针5'端标记FAM，3'端标记BHQ1可防延伸。答案：T50.PRNT抗体滴度≥1:10即具有保护力。答案：F51.石蜡切片脱蜡需用二甲苯。答案：T52.病毒分离阴性可完全排除CHIKV感染。答案：F53.微中和法可用AlamarBlue替代中性红。答案：T54.数字PCR无需反转录即可检测RNA。答案：F55.快速试纸条阳性结果需经实验室方法确认。答案：T五、简答题（每题6分，共30分）56.简述CHIKV实时RT-PCR引物设计原则。答案：1.选择E1保守区，跨膜域避开高突变；2.引物长度18-22bp，Tm值58-60℃；3.探针Tm高于引物8-10℃；4.扩增子80-150bp；5.无二级结构，3'端无互补；6.经BLAST验证特异性，覆盖ECSA/Asian/WA三型。57.列举三种CHIKV血清学交叉反应原因并给出解决策略。答案：1.登革IgG交叉：采用E1/E2重组抗原+登革抗原吸附；2.类风湿因子：用IgM-μ链捕获法+RF吸附剂；3.奥尼永尼翁病毒：PRNT确认，提高病毒特异性。58.写出TCID50计算实例：某96孔板10倍系列稀释，-3到-7稀释度阳性孔数分别为8/8、6/8、3/8、1/8、0/8，求TCID50。答案：L=-3，d=1，S=(8+6+3+1)/4=4.5l即10^-7/0.1mL，换算为10^8TCID50/mL。59.描述CHIKV免疫组化步骤及注意事项。答案：步骤：切片脱蜡→抗原修复→3%H2O2阻断→10%山羊血清封闭→加一抗4℃过夜→HRP标记二抗37℃30min→DAB显色→苏木素复染→封片。注意：设阴性对照；DAB显色3min内镜控；避免干片；一抗浓度需预实验。60.比较病毒分离、RT-PCR、IgM检测在发病第1-7天的灵敏度。答案：病毒分离：第1-3天>80%，随后下降；RT-PCR：第1-5天>95%，第7天约50%；IgM：第1-3天<20%，第5-7天>80%。六、案例分析（共20分）61.患者，男，34岁，从斯里兰卡回国，发热39℃、关节痛2天。血常规：WBC3.2×10^9/L，PLT85×10^9/L。发病第2天采血送检。（1）应首先做哪两项实验室检测？（4分）（2）若RT-PCRCt=34，应如何报告？（4分）（3）若RT-PCR阴性，IgM阳性，下一步如何处理？（4分）（4）一周后患者仍关节肿痛，复查IgG滴度1:640，IgM1:320，能否诊断慢性基孔肯雅关节病？（4分）（5）实验室应如何向疾控报告？（4分）答案：（1）实时RT-PCR与登革NS1抗原联合检测；（2）Ct=34>3