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DB22DB22/T1821—2013粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的Detectionoftrichothecenes-producingfungiingrainsbyPCRmethod2013-05-15发布2013-09-01实施吉林省质量技术监督局发布I1GB4789.15食品微生物学检GB/T6682分析实验室用水规WS/T230临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术单端孢霉烯前体（trichodiene）合成酶是催化所有真菌单端孢霉烯族化合物合成反应第一步4.2马铃薯-葡萄糖-琼脂（Potatodextroseag4.8酚：三氯甲烷：异戊醇（25：24：1三氯甲烷：异戊醇4.1110×PCR缓冲液：200mmol/LTris-HC23从培养平皿上刮取菌丝0.2g～0.5g于1.5mL离心管，加入少许石英砂用细玻璃棒丝，加入500μLCTAB、40μL蛋白酶K，震荡均匀，65℃水浴30min；加入500μL酚：三氯甲烷：异量视DNA沉淀的多少而定）；加入5μLRNA酶溶液，37℃水浴30min；加入200μL三氯甲烷：异戊醇采用紫外分光光度法测定DNA，所测得OD值为核酸总量。紫外分光光度法检测核酸浓度的最佳范围检验过程中分别设空白对照、阴性对照、阳性对照。空白对照设为以水代替DNA模板；阴性对照采4用电泳缓冲液（1×TAE）制备2%琼脂糖凝胶（55℃~60℃时加入溴化乙锭至终浓度为0.5μg/mL，也可在电泳后进行染色）。取8μL～15μLPCR扩增产物，分在阴性对照

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