（正式版）DB32∕T 4056-2021 《优良食味半糯粳稻品质》

DB32Qualityofsemi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste江苏省市场监督管理局发布I宋锦花、魏海燕、赵春芳、魏晓东、陈涛、赵庆勇、赵凌、姚姝、周丽慧、路凯、梁文12规范性引用文件GB/T5491粮食、油料检验扦样GB/T21719稻谷整精米GB/T22294粮油检验大米胶稠度NY/T593食用稻品种品质NY/T2639稻米直链淀粉的测定分光光度法半糯粳稻semi-glutinousjaponicarice优良食味半糯粳稻semi-glutinousjaponicaricewithgoodtaste2鉴别标记identificationmolecular4质量要求4.1基本质量要求4.2定等质量指标一二三整精米率/%123胶稠度/mm5.4整精米率检验：按照GB/T2175.5透明度检验：按照NY/T831(规范性)生G-A突变和第5外显子第52位碱基发生T-C突变的为Wx"基因，仅在第6外显子第62位碱基发生A/C突变的为Wx”基因。利用四引物扩增受阻突变体系PCR技术可针对第4和第6外显子的变异位点进行分子标记检测；利用成对引物可针对第5外显子的变异位点进行PCR扩增和序列分析，根据突变TTATACTC成像系统、微量可调移液器(2uL、10uL、100uL、1000uL)。A.3试剂与溶液2A.3.4DNA回收试剂A.5分子标记序列正向外引物（Wxmq/Wxmp-O-F）序列为5A.5.2用于鉴定Wxmw的分子标记序列3A.8.1琼脂糖凝胶制备A.8.2上样样品制备20V/cm的电压进行电泳，电泳20min。A.8.4凝胶成像将电泳后的琼脂糖凝胶放于凝胶成像系统的紫外光源下进行PCR扩增产物观察，拍照备用。对引物Wxmq-F/R扩增得到的PCR条A.9结果分析A.9.1分子标记检测结果分析利用四引物Wxmq/Wxmp-O-F/O-R/I-F/I-R分4显子第52位为C碱基，证明含此突变位点，如为T碱基，证明不含此突变位点，如为T/C碱基叠加，证明此突变位点为杂合位点。利用四引物Wx'-0-F/O-R/I-F/I-R可扩增得到三种类型的DNA特征条带(图A.4):扩增得到459bp和301bpDNA条带的样品，证明含Wx'突变位点；扩增得到459bp和209bpDNA条带的样品，证明不含此突变位点，同时扩增得到459bp、301bp和209bpDNA条带的样品，证明此突变位点为杂合位点。(M:分子量标准；1,7-10为含第4外显子突变位点的特征条带，2-6为不含第4外显子突变位点的特征条带，11-12为杂合位点的特征条带)图A.2Wx”或Wx第4外显子突变位点的分子标记检测电泳图谱1:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACG2:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACAC3:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGAT4:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGAT5:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGAT'6:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACT7:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGAC8:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTG9:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTG10:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACG11:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGCACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGCACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGTACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAGT/CACAAAGACAACCAGATGCGT2:GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGATT/CACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCC