DB43-T 1950-2020 十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测技术规程

ICS65.020DB43DB43/T1950—2020十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测Technicalregulationofinsecticideresistancemonitoringoflepidopterousinsectpestsoncruciferousvegetables2020-12-29发布2021-03-29实施湖南省市场监督管理局发布IDB43/T1950—2020前言 Ⅲ 2规范性引用文件 3术语和定义 4试剂与材料 25仪器设备 26试验步骤 7数据统计与分析 48抗性水平评估 49监测档案 附录A（资料性）斜纹夜蛾对部分杀虫剂敏感毒力基线（点滴法） 6附录B（资料性）甜菜夜蛾对部分杀虫剂敏感毒力基线（夹毒叶片法） 7附录C（资料性）小菜蛾对部分杀虫剂敏感毒力基线（浸叶法） 8附录D（资料性）十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测档案 9DB43/T1950—2020本文件按照GB/T1.1—2020给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省植物保护研究所、长沙县农业农村局、湖南农业大学、郴州市农业科学研究所、邵阳市植保植检站、桃江县植保植检站。本文件主要起草人：符伟、刘箐、彭可为、唐涛、王培、周玲红、彭智伟、马明勇、丁朝辉、魏林、DB43/T1950—20201十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测技术规程本文件规定了小菜蛾（PlutellaxylostellaLinnaeus）、甜菜夜蛾（SpodopteraexiguaHiibner）、斜纹夜蛾（SpodopteralituraFabricius）抗药性监测的术语和定义、试剂与材料、仪器设备、试验步骤、数据统计与分析、抗性水平评估及监测档案。本文件适用于小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾对常用杀虫剂的抗药性监测。其它十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测参照本标准执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1154.1农药室内生物测定试验准则第1部分：点滴法NY/T1154.2农药室内生物测定试验准则第2部分：夹毒叶片法NY/T1154.14农药室内生物测定试验准则第14部分：浸叶法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1抗药性insecticideresistance原来易感某种杀虫剂的昆虫种群，不再能被该剂常用量杀死的特性。3.2敏感基线susceptibilitybaseline通过生物测定方法得到的害虫敏感品系（或种群）对杀虫剂的剂量反应曲线。3.3致死中浓度（LC50）medianlethalconcentration药剂杀死生物群体中一半个体所需要的浓度。3.4点滴法topicalapplicationmethod将定量的药剂滴在昆虫体壁的一定部位，使药剂透过表皮进入体内，以测定药剂触杀效果的生物测定方法。3.5夹毒叶片法leaf-sandwichmethod将定量的药剂夹入叶面，使药剂通过昆虫取食进入体内，以测定药剂喂毒效果的生物测定方法。2DB43/T1950—20203.6浸叶法leaf-dippingmethod将浸过药液的叶碟置于含有琼脂或保湿滤纸上，接入靶标昆虫，以测定药剂触杀和喂毒效果的生物测定方法。4试剂与材料4.1试剂试验试剂主要为：——丙酮——乙醇——TritonX-100——蒸馏水4.2生物试材4.2.1供试昆虫供试昆虫为：——小菜蛾，田间采集，经室内饲养的F1代大小一致的3龄幼虫；——甜菜夜蛾，田间采集，经室内饲养的F1代大小一致的3龄幼虫；——斜纹夜蛾，田间采集，经室内饲养的F1代大小一致的3龄幼虫。4.2.2供试植物未被药剂污染的甘蓝。4.2.3试验药剂原药或母药。5仪器设备试验仪器设备主要为：——电子天平（感量0.1mg——烧杯；——培养皿；——容量瓶；——养虫笼；——毛细管点滴器（1µL）；——电子微量点滴器；——浸虫器；——打孔器；——移液管或移液器；——恒温培养箱或人工气候箱。DB43/T1950—202036试验步骤6.1试材准备6.1.1试虫采集与饲养6.1.1.1试虫采集选择具有代表性的十字花科菜地2块～3块采集小菜蛾、甜菜夜蛾或斜纹夜蛾幼虫或蛹200头以上，置于事先放置寄主植物叶片的养虫盒中，供室内饲养。6.1.1.2试虫饲养在室内用寄主植物将田间采集的幼虫或蛹饲养到成虫分批产卵，取F1代3龄幼虫供试。6.1.2叶碟制作使用新鲜、洁净、无农药污染的甘蓝叶片，并制成直径5cm的圆片供试。6.2药剂配制6.2.1原药用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）溶解配成母液。6.2.2用含0.05％TritonX-100的蒸馏水稀释杀虫药剂母液成系列梯度浓度（通过预实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于20最大浓度时死亡率大于80。其他参照NY/T1154.1、NY/T1154.2和NY/T1154.14执行。6.3处理方法6.3.1点滴法将微量点滴器的注射器用溶解清洗数次，调节点滴器至备用状态。视试虫大小的种类及大小具体选用点滴量。用毛笔选取整齐一致的3龄幼虫，放入培养皿中。将培养皿中试虫逐头进行点滴处理，点滴部位在幼虫前胸背板。先处理对照（不含药剂的相应的有机溶剂的处理），然后按试验剂量从低到高的顺序重复上述操作，每个培养皿中10头，重复4次。6.3.2夹毒叶片法6.3.2.1夹毒叶碟制作用玻璃毛细管点滴器从低浓度开始，每片叶碟点滴1µL～2µL药液，待溶剂挥发后与另一片涂有面粉糨糊的叶碟对贴，放于6cm培养皿中。每处理4次重复，每重复不少于12个夹毒叶片，并设不含药剂的相应的有机溶剂的处理为对照。6.3.2.2接虫处理每个培养皿接1头试虫，置于正常条件下饲养。接虫2h～4h，待试虫取食完含药叶碟后，在培养皿中加入清洁甘蓝叶片继续饲养至调查，淘汰未食完一张完整叶碟的试虫。6.3.3浸叶法将清洗干净的甘蓝叶片浸于不同浓度的溶液10s，取出后在室内晾干至表面无游离水。用0.05%DB43/T1950—20204TritonX-100水溶液浸渍的叶片作为对照。将晾干的叶片放入培养皿中，用滤纸或琼脂保湿，接入3龄幼虫，每个培养皿中10头，重复4次。6.4结果检查处理后48h检查试虫死亡情况，分别记录总虫数和死虫数。根据药剂特点，可以缩短或延长检查时7数据统计与分析7.1计算方法根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按公式（1）和（2）计算，计算结果均保留到小数点后两位：P1——死亡率，单位为百分率(%);K——表示死亡虫数，单位为头；N——表示处理总虫数，单位为头。P2——校正死亡率，单位为百分率(%);P1——处理死亡率，单位为百分率(%);Po——空白对照死亡率，单位为百分率。若对照死亡率＜5无需校正；对照死亡率在520％之间，应按公式（2）进行校正；对照死亡率＞20试验需重做。7.2统计分析采用PROBIT或DPS软件进行机率值分析，求出每种药剂的毒力回归方程式、LC50值及其95％置信限、b值及其标准误。8抗性水平评估8.1敏感毒力基线斜纹夜蛾、甜菜夜蛾和小菜蛾对部分药剂敏感毒力基线参见附录A、附录B和附录C。8.2抗性倍数的计算根据敏感品系的LC50值和测试种群的LC50值，按公式（3）计算测试种群的抗性倍数。DB43/T1950—20205T………（3）RR——测试种群的抗性倍数；T——测试种群的LC50值；S——敏感种群的LC50值。8.3抗性水平分级与评估根据抗药性倍数的计算结果，按照表1中抗药性水平的分级标准，对测试种群的抗药性做出评估。表1抗性水平的分级标准9监测档案记载试虫采集地点、时间、作物生育期、当地用药水平、生测方法、生测结果、抗药性倍数等数据，建立抗药性监测档案，档案需保持2年以上，具体内容参见附录D。DB43/T1950—20206斜纹夜蛾对部分杀虫剂敏感毒力基线（点滴法）LC123456DB43/T1950—2020甜菜