2026年病毒检验考试题及答案

2026年病毒检验考试题及答案1.单项选择题（每题1分，共30分）1.1下列哪项不是病毒结构蛋白的功能A.介导病毒与宿主细胞受体结合B.维持病毒颗粒稳定性C.直接催化宿主DNA复制D.参与病毒基因组包装答案：C1.2在实时荧光RT-PCR中，TaqMan探针5′端标记的荧光基团最常用的是A.FAMB.ROXC.Cy5D.HEX答案：A1.3关于病毒培养细胞系的选择，错误的是A.C6/36细胞常用于登革病毒分离B.VeroE6对SARS-CoV-2高度敏感C.MDCK细胞适合培养流感病毒D.BHK-21是培养诺如病毒的首选答案：D1.4病毒血凝抑制试验中，4个血凝单位是指A.完全凝集红细胞的最小病毒量B.完全凝集红细胞的最大稀释度C.50%红细胞凝集的病毒量D.100%红细胞凝集的病毒量答案：A1.5下列哪项操作最能降低qPCR假阳性A.使用UNG酶B.提高退火温度C.增加循环数D.降低引物浓度答案：A1.6病毒核酸提取中，用于裂解病毒包膜的主要成分是A.异硫氰酸胍B.β-巯基乙醇C.聚乙二醇D.吐温-20答案：A1.7关于病毒中和试验，正确的是A.需使用活病毒B.可用甲醛固定细胞后读结果C.结果判定只观察CPED.不能定量抗体滴度答案：A1.8下列哪种病毒属于逆转录病毒科A.乙型肝炎病毒B.人免疫缺陷病毒C.丙型肝炎病毒D.埃博拉病毒答案：B1.9病毒滴度TCID50计算中，Reed-Muench法用于A.计算病毒RNA拷贝数B.确定50%终点稀释度C.校正荧光阈值D.换算PFU答案：B1.10关于病毒宏基因组测序，错误的是A.需去除宿主核酸B.可使用RNA探针捕获C.可直接获得全基因组D.无需生物信息学分析答案：D1.11病毒蛋白Westernblot鉴定时，封闭液常用A.5%脱脂奶粉B.10%SDSC.3%H2O2D.0.1%结晶紫答案：A1.12下列哪项不是病毒电镜负染常用试剂A.磷钨酸B.醋酸铀C.戊二醛D.钼酸铵答案：C1.13病毒保存中，−80℃优于−20℃的主要原因是A.减少核酸断裂B.抑制蛋白酶活性C.降低冰晶损伤D.避免反复冻融答案：C1.14关于CRISPR-Cas13a病毒检测，正确的是A.靶向DNAB.collateralcleavage产生信号C.需逆转录步骤D.只能检测DNA病毒答案：B1.15病毒基因分型最可靠的方法是A.血清中和试验B.全基因组测序C.电镜形态观察D.血凝抑制试验答案：B1.16病毒交叉反应抗体最易干扰A.补体结合试验B.间接ELISAC.病毒中和试验D.免疫荧光答案：B1.17病毒RNA提取后，测得A260/A280=1.45，提示A.蛋白污染B.酚残留C.盐污染D.乙醇残留答案：A1.18病毒滴度单位PFU与TCID50换算经验公式A.1PFU≈0.7TCID50B.1PFU≈1TCID50C.1PFU≈0.5log10TCID50D.1PFU≈0.1TCID50答案：A1.19病毒恒温扩增RPA技术，最适温度A.37℃B.42℃C.56℃D.65℃答案：B1.20病毒样本采集后，若72h内不检测，应A.室温保存B.4℃保存C.−20℃保存D.−80℃保存答案：D1.21病毒蛋白印迹中，Marker单位常用A.bpB.kDaC.ODD.Ct答案：B1.22病毒核酸提取磁珠法，洗涤液中乙醇浓度通常为A.30%B.50%C.70%D.95%答案：C1.23病毒细胞培养出现CPE，最早观察时间通常为A.1hB.6hC.24–48hD.7d答案：C1.24病毒基因点突变检测，灵敏度最高的是A.Sanger测序B.qPCR-高分辨率熔解曲线C.限制性片段长度多态性D.常规PCR答案：B1.25病毒样本运输，UN3373标签对应A.A类感染性物质B.B类感染性物质C.化学危险品D.放射性物质答案：B1.26病毒滴度测定中，每孔接种100μL，10倍系列稀释，则稀释度10−3的病毒量为原液的A.1/10B.1/100C.1/1000D.1/10000答案：C1.27病毒RNA逆转录时，随机引物浓度常用A.10nMB.50nMC.100μMD.500μM答案：B1.28病毒蛋白免疫沉淀，抗体与珠子孵育温度A.4℃过夜B.37℃1hC.95℃5minD.室温振荡5min答案：A1.29病毒基因重组检测，最适算法A.BLASTB.RDP4C.ClustalWD.MEGA答案：B1.30病毒样颗粒（VLP）疫苗优点不包括A.无感染性B.可自我复制C.保留免疫原性D.安全性高答案：B2.多项选择题（每题2分，共20分；每题至少2个正确答案，多选少选均不得分）2.1可导致qPCR假阴性的因素有A.样本运输温度过高B.引物二聚体C.抑制剂如肝素D.探针淬灭基团脱落答案：A、C2.2病毒中和抗体检测常用细胞系A.VeroB.BHK-21C.MDCKD.CEF答案：A、B、C2.3病毒宏基因组分析步骤包括A.去除低质量读长B.宿主序列过滤C.组装contigD.物种注释答案：A、B、C、D2.4病毒电镜免疫金标记优点A.定位病毒蛋白B.定量病毒滴度C.观察超微结构D.区分血清型答案：A、C2.5病毒RNA保存保护剂A.RNasinB.DEPC水C.TRIzolD.甘油答案：A、B、C2.6病毒基因重组证据A.相似性plot峰B.Bootscan支持C.四重简并位点一致性D.亲本毒株共感染史答案：A、B、D2.7病毒蛋白相互作用检测技术A.酵母双杂交B.Co-IPC.BiFCD.SPR答案：A、B、C、D2.8病毒恒温扩增LAMP引物组成A.FIPB.BIPC.LFD.LB答案：A、B、C、D2.9病毒样本采集拭子材质A.涤纶B.尼龙C.棉D.海藻酸钙答案：A、B2.10病毒全基因组测序建库平台A.IlluminaNovaSeqB.OxfordNanoporeC.PacBioSequelD.IonTorrent答案：A、B、C、D3.填空题（每空1分，共20分）3.1病毒RNA提取中，异硫氰酸胍终浓度一般为________M，以有效抑制RNase。答案：43.2病毒TCID50计算，Reed-Muench公式中，距离比例=（高于50%阳性率−50%）/（高于50%阳性率−________%阳性率）。答案：低于503.3病毒实时荧光RT-PCR，阈值设定原则为高于基线噪音且________荧光信号增长期。答案：指数3.4病毒蛋白SDS，浓缩胶浓度通常为________%，分离胶浓度根据目标蛋白分子量调整。答案：53.5病毒血凝试验，红细胞浓度一般为________%（v/v）。答案：0.53.6病毒中和试验，抗体滴度定义为能抑制________%CPE的最高稀释度倒数。答案：503.7病毒宏基因组，Kraken2数据库用于________分类。答案：物种3.8病毒基因重组，RDP4软件默认P值<________认为显著。答案：0.053.9病毒电镜负染，磷钨酸pH需调至________左右，避免蛋白变性。答案：6.83.10病毒RNA逆转录，M-MLV逆转录酶最适温度为________℃。答案：423.11病毒滴度PFU测定，每孔加入________mL琼脂糖覆盖层以限制扩散。答案：13.12病毒样颗粒纯化，超速离心常用________梯度。答案：蔗糖3.13病毒qPCR，标准曲线斜率−3.32，扩增效率为________%。答案：1003.14病毒蛋白Westernblot，ECL显色信号检测使用________成像系统。答案：化学发光3.15病毒恒温扩增RPA，TwistAmp®反应时间一般为________min。答案：203.16病毒样本运输，干冰包装量按________kg/24h挥发计算。答案：2.53.17病毒基因点突变，ARMS-PCR引物3′端第________位引入错配以提高特异性。答案：二3.18病毒全基因组测序，Nanopore平台常用建库试剂盒为________。答案：SQK-LSK1093.19病毒蛋白结构预测，AlphaFold2输出文件格式为________。答案：PDB3.20病毒中和抗体，WHO标准单位表示为________IU/mL。答案：国际4.简答题（封闭型，每题5分，共20分）4.1简述病毒RNA提取磁珠法原理。答案：裂解液破坏病毒包膜释放RNA；磁珠表面修饰硅羟基在高盐条件下可逆吸附RNA；磁场分离后，经70%乙醇洗涤去除蛋白与抑制剂；低盐TE或水洗脱获得高纯度RNA。4.2写出Reed-Muench法计算TCID50的完整公式并说明各符号含义。答案：lL：高于50%阳性率的最高稀释度对数；d：稀释系数的对数（10倍稀释为−1）；S：累积阳性率比值之和。4.3列举三种病毒蛋白相互作用验证实验并给出关键区别。答案：Co-IP（体内，保留修饰）、酵母双杂交（体内，无膜定位限制）、SPR（体外实时动力学）。4.4说明qPCR中内参基因作用及选择标准。答案：校正样本间RNA量与逆转录效率差异；标准：表达恒定、与目标基因扩增效率相近、无假基因、无交叉反应。5.简答题（开放型，每题10分，共20分）5.1某新型蝙蝠冠状病毒刺突蛋白受体结合域（RBD）发生N501Y突变，设计实验验证其对ACE2亲和力的影响。答案：1.合成野生型与突变型RBD基因，分别插入pCDNA3.1-Fc载体；2.Expi293F表达，ProteinA纯化获得二聚体RBD-Fc；3.BLI实验：固化ACE2于传感器，梯度浓度RBD-Fc结合解离，计算KD；4.SPR验证：CM5芯片固化ACE2，多循环动力学；5.结果：N501Y突变型KD降低3.2倍，提示亲和力增强；6.辅以细胞水平假病毒入侵试验，比较野生型与突变型在HEK293T-ACE2的感染效率，证实亲和力与感染正相关。5.2某地区出现不明原因肺炎，采集BALF样本20份，简述宏基因组测序流程及生物信息学分析关键步骤。答案：1.样本前处理：2000g去细胞碎片，0.22μm滤膜富集病毒；2.核酸提取：QIAampViralRNA/DNAKit，分别获得RNA与DNA；3.文库构建：RNA逆转录后双链cDNA，超声波200bp片段，末端修复加A，连接Illumina接头，PCR扩增8循环；4.测序：NovaSeq6000，2×150bp，≥20millionreads/样本；5.生信：FastQC质控，Trimmomatic去接头低质量，Bowtie2去人源，SPAdes组装，BLASTn比对NCBIViralRefSeq，Kraken2物种注释，MEGA-X构建系统发育树，RDP4检测重组；6.结果：检出3份SARS-likeCoV，完整基因组覆盖率99.1%，与BatCoVRaTG13相似性96.8%，受体结合域携带Q498H突变，提示潜在跨种风险。6.应用题（综合类，每题15分，共30分）6.1计算题某病毒悬液10倍系列稀释后接种96孔板，每孔100μL，共8稀释度，每稀释度10孔，观察CPE结果如下：稀释度10−1至10−8，阳性孔数分别为10,10,10,8,5,1,0,0。求TCID50/mL并换算为PFU/mL。答案：1.累积阳性率：10−4=(10+10+10+8)/40=0.95；10−5=(10+10+10+8+5)/50=0.86；10−6=(10+10+10+8+5+1)/60=0.73；2.高于50%最高稀释度10−5，L=−5；d=−1；3.距离比例=(0.86−0.5)/(0.86−0.73)=0.36/0.13=2.77；4.log10TCID50=−5−1×(2.77−0.5)=−5.27；5.TCID50/100μL=10−5.27；TCID50/mL=10−5.27×10=10−4.27；6.1PFU≈0.7TCID50，PFU/mL=10−4.27×0.7=10−4.42≈3.8×10−5。6.2分析题某实验室对2026年流感季分离的H3N2毒株进行抗原性分析，HI试验显示与疫苗株A/Darwin/6/2021相比，效价降低8倍。请：1.推测可能分子机制；2