CN119432728A 三维肌肉组织及其制造方法 （日清食品控股株式会社）

202080018038.52020.01.22模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有多个在垂直方向上的与所述第一细胞模块不同所述第一细胞模块与所述第二细胞模块交替地及将增殖后的骨骼肌成肌细胞向肌管分化诱导2制作大致长方形的第一细胞模块以及大致长方细胞模块的孔的至少一部分在垂直方向上位于与所述第一细胞模块的孔将所制作的所述第一细胞模块与所述第二细胞模块交替地层在所述方法中，在相互平行的孔与孔之间形成大致长方形且所述第一细胞模块和所述第二细胞模块的相邻的孔的间隔在短边方向上为200μm~所述第一细胞模块和所述第二细胞模块的大小在短边方向上为3mm以上并且在长边方将合计6个以上的所述第一细胞模块和所述第二细胞将层叠体中所述第一细胞模块和所述第二细胞模块的长边方向34在短边方向上为3mm以上并且在长边方向[0015]项7.在项1至6中任一项所[0018]项10.在项1至9中任一项所述的制维肌肉组织在供食用时能够期待接近畜产品5肌动蛋白的纤维(肌动蛋白丝)以及作为构成肌肉的蛋白质的肌球蛋白的纤维(肌球蛋白[0028]本发明的制造方法的第一工序是制作第一细胞模块和第二细胞模块的工序。下6[0030]另外，骨骼肌成肌细胞也可以使用从ES细胞、iPS细胞这样的具有多能性的干细[0032]骨骼肌成肌细胞可以使用通过同源重组法、CRISPR/Cas9法等基因组编辑的方法[0036]对于水凝胶中的骨骼肌成肌细胞理想的是，例如细胞密度为约1.0×106个/mL以71中示出了第一细胞模块1以及第二细胞模[0041]细胞模块为大致长方形的片状。各细胞模块的厚度可以优选为300μm～2000μm程[0045]本发明的制造方法的第二工序是将在上述第一工序中得到的所述第一细胞模块方以及正下方的第二细胞模块的孔以它们的至少一部分(可以是全部)不互相重叠的方式正下方的第二细胞模块的窄宽度的带状部分以它们的至少一部分(也可以是全部)不互相重叠的方式层叠。通过这样地进行层叠，能够制作具有定向且截面积大的肌管/肌纤维的够厚度的三维肌肉组织的观点出发，优选将合计6个以上的所述第一细胞模块和所述第二8胞模块)。基材的材质优选为诸如二甲基聚硅氧烷(PDMS)这种相对于细胞为非粘着性的材行上述培养。作为进行适当培养的方法，可以例示在约37℃左右以及二氧化碳浓度约5~[0055]作为增殖培养用的培养基，可以使用在DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)、EMEM(Eagle'sminimalessentialmedium)、αMEM(alphaModifiedMinimumEssentialMedium)等通常的液体培养基中添加血清成分(例如马血清(HorseSerum)、胎[0060]例如可以在分化诱导用(多核化用)的培养基中通过本领域技术人员众所周知的9从牛咬肌采集成肌细胞，以1.0×105个细胞/孔(cells/well)播种到12孔胶原包被培养皿(12wellcollagen_coatdi换为添加了维生素C衍生物(抗坏血酸磷酸)的鉴别培养基(Differentialmedium，2%[0069][考察]在添加了抗坏血酸磷酸的情况与未添加抗坏血酸磷酸的情况下，都在过渡至DM后第四天观察到肌管形成。肌管形成数以依赖于抗坏血酸磷酸浓度的方式而增加1.0mm的圆柱状的固定部，通过用纤连蛋白覆盖固定部而促进细胞黏附，固定了组用1型胶原包埋成肌细胞并进行了培养。此时，使用包埋细胞数为1.0×106个细6个细胞在5.0×107个细胞/mL胶原凝胶(collagengel)以上的条件下确认到肌节样结了包含成肌细胞的胶原凝胶。将该包含成肌细胞的胶原凝胶播种到橡胶模块上，放置用及所述第一细胞模块和所述第二细胞模块的孔在短边方向上的宽度为200μm～2000所述第一细胞模块和所述第二细胞模块的相邻的孔的间隔在短边方向上为200μm所述第一细胞模块和所述第二细胞模块的大小在短边方向上为3mm以上并且在长将合计6个以上的所述第一细胞模块和所述第二细胞将层叠体中所述第一细胞模块和所述第二细胞模块的长边方向