宠物临诊病料采集与微观检查

宠物临诊病料的采集处理与微观检查报告人：冯国峰，硕士，兽医师

东北农业大学动物临床教学医院文章来源：中国农业大学动物医学学院夏兆飞希尔思宠物营养中国部戴庶

德国博纳科临兽医诊断实验室DrMariaChrilin国内某名医微博2014年12月哈尔滨宠物临诊实验室检查项目1、血液检查（常规、凝血、生化：电解质、激素、血气）2、尿液检查（常规、尿量、PH、比重、）3、粪便检查（粪常规、寄生虫）4、组织细胞的检查（肿瘤、组织擦片、切片、活检）5、其他液体检查（腹腔液、脑脊液、心包液、关节液、囊肿穿刺物、分泌物、精液）6、病原检查（细菌、真菌、病毒、寄生虫、原虫）仅凭1次的检查结果不能说明问题动物个体因素的多样性成熟的化验人员误差值在20%左右三分类血球计数仪的局限性动物所处的状态

结果的参考比重血液化验不能代替医生

Testscannotreplacedoctors先有医生，后有化验没有医生的临床检查，没法开化验单没有医生解释，化验单没有意义简单诊断，医生临床检查+病史一定要把病史和临床症状与化验结果联系起来，不能只看化验结果最佳诊断医生+化验+X光/B超其它辅助诊断运用化验来检验治疗效果化验结果的可靠性

ResultReliability

把病史和临床症状与化验结果联系起来对化验结果要随时保持怀疑的态度特别是用人医的化验设备做的化验样品储存和运输的时间仪器的管理和保养仪器的每日校正情况血常规检查（类型、数量、性状）血液生化检查（50余项）生化电解质激素血气凝血检查

凝血酶原时间（PT）活化部分凝血活酶时间（APTT）

凝血酶时间（TT）

纤维蛋白原（FIB）

血液检查血常规检查内容：血液细胞部分设备:显微镜、血球分类计数仪注意事项：误差分析

机体的因素仪器因素试剂因素人为因素（采血部位）不同部位采血对血细胞分析仪结果的影响采集血常规检查的合格血标本应注意的事项标本抗凝剂的选择和正确使用血液常规使用工具血细胞的运行血细胞正常形态

显微镜人血细胞形态犬血涂片三分类血球计数仪电阻抗五分类血球模式图血涂片制备染色及白细胞形态观察瑞氏染色：吉姆萨染色：瑞氏-吉姆萨复合染色：生理盐水稀释荧光染色血涂片制备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾鲜明涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B123血涂片染色勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置10分钟直接流水冲洗3-5分钟（切勿先倒掉染液）涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞李四123涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟血涂片的观察低倍镜观察1.染色情况(满意、偏酸、偏碱）2.细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李四123

涂片质量不佳及可能原因涂片质量不佳可能原因不规则间断和尾部太长推片污染、推片速度不连续、载玻片太脏有空洞载玻片污染脂肪、油脂白细胞和血小板尾部分布不规则制片技术差涂片太长或太短推片角度不佳涂片没有尾部血滴太大涂片很短血滴太小涂片没有边缘空隙推片太宽有细胞退变现象固定延迟、固定时间太短、甲醇污染血涂片厚血滴大、血粘度高、推片角度大、推片速度快白细胞破损推片时用力过猛染色操作注意事项及操作不当的后果操作注意事项操作不当的后果加染液应适量过少则易蒸发沉淀，一旦染料沉积在血涂片上，则不易冲洗，使细胞深染不易检查。冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗染料沉着在血涂片上冲洗时间不能过久脱色冲洗完的血涂片应立放于支架上剩余水分浸泡脱色染色质量不佳及可能原因效果可能原因纠正措施太蓝涂片太厚、冲洗时间太短、中性水pH太高、染色时间太长、稀释染液重复使用、贮存染液暴露于阳光在含1％硼酸的95％乙醇溶液冲洗2次，用中性水冲洗，待干镜检太红冲洗时间太长、中性水pH太低、贮存染液质量不佳、涂片干燥前加封片规范操作。新鲜配置中性水。保证染液质量不佳太淡染色时间太短、冲洗时间太长复染。应先加缓冲液，后加染液，或加染液与缓冲液的混合液，不可先加染液染料沉积染料沉淀、染液未过滤、涂片太脏用甲醇冲洗2次，并立即用水冲掉甲醇，待干后复染蓝色背景固定不当、涂片未固定贮存过久、使用肝素抗凝剂注意涂片的固定。使用EDTA抗凝静脉血中性杆状核粒细胞

中性分叶核粒细胞

嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞

单核细胞附红细胞体检查外周血细胞形态分析软件5.红细胞容积分布宽度（RDW）3.红细胞比容测定（HCT）1.红细胞计数（RBC）2.血红蛋白测定（HB）红细胞4.红细胞平均值参数平均红细胞血红蛋白量（MCH）pg平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）g/L平均红细胞容积（MCV）fl一、红细胞的生成

造血干细胞

红系祖细胞

（BFU-E和CFU-E）

原红细胞

早幼红细胞

中幼红细胞

晚幼红细胞

网织红细胞

成熟红细胞

此外红细胞生成直接或间接受睾丸激素及其它神经体液因素的调节睾丸肿瘤与卵巢肿瘤睾丸肿瘤：白细胞减少—血小板减少—红细胞减少卵巢肿瘤：白细胞增多—血小板减少—红细胞（巨噬细胞）减少—中性粒细胞减少正常参考值RBC及Hb增多PCV>60％表明为红细胞增多症，PCV>70％则为原发性红细胞增多症一般多次检测红细胞>8.5×1012/L,血红蛋白>190g/L外周血中RBC浓度增加（脾脏的收缩）血液浓缩真性增加单位容积血液中RBC数及Hb量高于参考值高限相对性增多因血浆容量↓使RBC容量↑，见于严重呕吐、腹泻、出汗、烧伤、慢性肾上腺皮质功能减退、尿崩症、甲亢危象、糖尿病酮症酸中毒等。

绝对性增多(红细胞增多症)

1、继发性RBC增多

促红素代偿性增加，见于胎儿、新生动物、高原、严重的心肺疾患

促红素非代偿性增加，Epo（促红细胞生成素）↑与某些肿瘤或肾病有关如肾癌、肝细胞癌、卵巢癌、肾上腺皮质腺癌、子宫肌瘤、肾盂积水、多囊肾等。

2、真性红细胞增多症，原因未明（骨髓增生性紊乱），RBC持续增多，可达9-10×1012/L，HB可达180-240g/L，血容量、WBC、血小板亦增加。RBC及Hb减少单位容积循环血液中RBC数、Hb量及红细胞比积低于参考值低限称为贫血。临床上根据Hb↓程度将贫血分为轻度Hb低限—110g/L中度110-60g/L重度60-30g/L极重度<30g/L病理性减少按病因和发病机制进行分类，将贫血分成四大类

1.红细胞生成减少

2.红细胞破坏过多

3.失血

4.转移性贮存贫血根据病因和发病机制的贫血分类一、红细胞生成不足（一）骨髓造血障碍造血干细胞复制和分化异常再生障碍性贫血异常细胞或组织骨髓浸润骨髓病性贫血原因不明或多种机制慢性系统性疾病（慢性感染、炎症、恶性肿瘤、慢性肾病、肝病、风湿性疾病、内分泌病等）伴发的贫血（二）细胞分化和成熟障碍DNA合成障碍叶酸及（或）维生素B12缺乏所到的巨幼细胞贫血血红蛋白合成障碍缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血

(三)红细胞生成调节异常低氧亲和性血红蛋白病

二、红细胞破坏过多（一）红细胞内在缺陷（遗传性缺陷）（二）红细胞外来因素（获得性因素）三、失血急性失血急性失血后贫血慢性失血同缺铁性贫血四、品种遗传柯利犬、塞纳犬

四红细胞形态学改变通过血涂片Wright染色观察RBC大小、形态、胞浆的着色及结构方面有无异常改变，对诊断的病因有帮助。

正常红细胞正常红细胞呈双凹圆盘形，血涂片中见到圆形，大小较一致，直经6.6-7.7um，平均7.15um，边缘部厚度约2um，中央约为1um，染色后四周呈浅桔红色，中央呈淡染区（又称中央苍白区）约占RBC直径的1/3-2/5。RBC形态异常1.大小异常2.形态异常3.染色反应异常4.结构异常（一）大小异常①小红细胞（microcyte）见于缺铁性贫血②大红细胞（macrocyte）见于溶血性贫血,急性失血性贫血,巨幼红细胞性贫血

③巨红细胞（megalocyte）见于巨幼细胞性贫血④红细胞大小不均（anisocytosis）直径相差一倍以上，见于病理造血①球形细胞：②椭圆形细胞（二）形态异常③口形细胞（stomatocyte）见于遗传性口形细胞增多症，少量可见于DIC，酒精中毒④靶形细胞（targetcell）见于海洋性贫血，异常Hb病，占20%以上。⑤镰形细胞（sicklecell）形如镰刀状，见于镰形细胞性贫血（HbS病）

⑥泪滴形细胞（dacyocyte，teardropcell）细胞呈泪滴状或手镜状，见于骨髓纤维化⑦棘形细胞（acanthocyte，burrcell）：细胞外周呈钝锯齿状突起，见于棘形细胞增多症、需鉴别血液原虫病。⑧红细胞形态不整（红细胞异形症poikilocytosis）RBC可呈梨形、泪滴形、新月形、长圆形、哑呤形、逗点形、三角形、球形、盔、靶形等，见于RBC因物理或机械因素破坏所致如DIC、TTP（血栓性血小板减少性紫癜）等⑨RBC缗钱状形成（rouleauxformation）RBC呈串状叠连似缗钱状，见于多发性骨髓瘤、原发巨球蛋白血症（三）染色反应异常（四）结构异常

①嗜硷性点彩（basophilicstippling）RBC胞浆内见到散在的大小和数量不一的深兰色颗粒称为嗜硷点彩，为核糖体聚集变性形成,见于增生性贫血、巨幼贫、骨纤、铅中毒等。②Howell-Jolly小体（染色质小体）紫红色圆形小体，见于成熟红或晚幼红胞浆，一个或多个，核分裂过程中出现的异常染色质.见于溶贫、巨幼贫、红白血病等。③Cabot环在RBC中出现的一种紫红色呈圆形形或8字形细线状环，常与H-J小体同时出现。可能为纺锤体的残留物或脂蛋白变性所致.④有核红细胞（nucleatederythocyte）见于增生性贫血，红血病、红白血病、髓外造血及其它如骨髓转移癌，严重缺氧等。（四）结构异常4.红细胞平均值参数

红细胞平均值参数平均红细胞血红蛋白量（MCH）pg平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）g/L平均红细胞容积（MCV）fl贫血的红细胞形态学分类

贫血类型MCVMCHMCHC常见疾病正常细胞性NNN急性失血、溶血、再障、白血病大细胞性↑↑N巨幼细胞贫血及恶性贫血小细胞低色素性↓↓↓缺铁贫、珠蛋白肽链合成障碍性贫血、铁粒幼细胞性贫血单纯小细胞性↓↓N慢性炎症、尿毒症、肝病、恶性肿瘤、风湿性疾病等.网织红细胞（reticulocyte）

网织红细胞（reticulocyte）是晚幼红细胞到成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，胞质中尚残存多少不等的核糖核酸等嗜碱性物质。机器检查中红细胞指数关注

在红细胞的有关指标里，要重点关注以下三个：HbMCVRDW白细胞计数和白细胞分类计数白细胞计数和白细胞分类计数

参数犬猫红细胞比容(PCv)(％)血红蛋白(g／d1)红细胞(106／“I)平均红细胞容积(液体)[Mcv(n)]红细胞血红蛋白平均浓度(g／d1红细胞寿命(d)网织红细胞数(％)白细胞分叶中性粒细胞(/u1)杆状中性粒细胞(/u1)淋巴细胞(/u1)单核细胞(/u1)粒性曙红白细胞(/u1)嗜碱细胞(／U1)总固体量(g／d1)37～5512～185．5～8．560～7732～361200～1．56000～170003000～115000～3001000～4800150～l350100～750少见6～827～459～156～1037～5030～36700～0．45000～195002500～12500O～3001500～70000～8500～750少见6～8正常血液参数白细胞分类功能临床意义WBC↑or↓，主要受N的影响，WBC在生理或病理情况下均可有变异。

各种类型白细胞变异的临床意义一、中性粒细胞NeutrophilN是从骨髓中造血干细胞增殖分化而产生的，它的生成受多种因素调控G-CSF,CFU-G,GM-CSF,CFU-GM

干C分裂池（原早中晚幼粒→杆状→分叶成熟的粒C）

循环池（外周血功能池）成熟池贮存池边缘池，附于小静脉及CaP壁上(一)、中性粒细胞增多1）生理性N增多：2）病理性N增多：①急性感染或炎症②广泛的组织损伤或坏死③急性溶血④急性失血⑤急性中毒⑥恶性肿瘤（异常增生性增多）(二)、中性粒细胞减少N＜1.5×109/L称粒C↓；N＜0.5×109/L称粒缺乏①感染性疾病②血液系统疾病③理化因素：④单核-巨噬C系统功能亢进⑤其它SLE过敏性休克(三)、中性粒细胞核象变化

(四)、中性粒细胞常见的形态异常

①N的中毒性改变a.细胞大小不均，病程较长的化脓性炎症或慢性感染b.中毒性颗粒，N胞浆出现粗大、大小不等、分布不匀的深紫或兰黑色颗粒c.空泡形成，可能是细胞受损后，胞浆脂肪变性d.核变性，固缩、溶解、碎裂e.杜勒小体(Dohlebodies)，局部嗜碱性区域。圆形或梨形，直径１－２µm②巨多分叶核N③Auer小体：

二、嗜酸性粒细胞EosinophilE增殖和成熟程序与N相似，成熟的E在外周血中很少，占全身E总数1%左右，大部在于BM和组织中。生理功能主要为吞噬作用，趋化作用三、嗜碱性粒细胞basophil也是由骨髓干细胞产生，突出的生理功能为参与超敏反应四、淋巴细胞Lymphocyte

淋巴细胞来源于骨髓造血干C，是机体重要的免疫活性C，它具有与抗原起特异性反应能力。猫的犬细小病毒感染蒋宏对70例病毒性感染血象，猫瘟试纸检测阴性病例进行犬细小病毒检测试纸检测，结果如下：

阳性阴性检出数646百分比91.4％8.57％猫科动物多种细小病毒引发的基因多样性及多重感染国外一项研究中有两个最重要的发现是：在一只感染了细小病毒的猫身上发现了猫瘟病毒/犬细小病毒的混合感染，它其实是细小病毒的一个变种,它是介于猫瘟病毒和犬细小病毒之间的一个中间体；同时发现了犬细小病毒样本变种2c的准种群.

五、单核细胞Monocyte

单核细胞能吞噬异物产生抗体，在机体损伤治愈、抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面起着重要的作用。血小板的测定血小板计数血小板计数是辅助出血性疾病的诊断、了解骨髓增生情况、手术前准备等常用指标。血小板只存在于哺乳动物血液中。血液指标提示结果血液直方图血液生化结果的分析生化检查注意事项准备：采样前空腹8-10小时（视脂肪含量），各品牌生化仪的标准值不同，要按自己使用品牌给出的正常范围判读，不应按工具书中的正常参考值。注意干式生化的”批间差”不同生化仪器要求不同的采血试剂良好的操作-样品处理最常用的20项指标Atestresultofadog一只犬的化验结果Glucose血糖…………..117mcg/dl...(80-120)BUN(bloodureanitrogen尿素氮)………….…………24mg/dl...(8-29)Creatinine肌酐…………..0.8mg/dl…(0.4-1.2)Sodium(Na钠)……………………..…..140mEq/l...(139-164)Potassium(K钾).............................................................................5.2mEq/l...(4.4-6.1)Chloride氯.....................................................................................104mEq/l...(10-118)CO2(carbondioxide二氧化碳).......................................................22mEq/l...(22-285)Calcium钙…....................................................................................9.6mg/dl...(9.4-11.6)Phosphorus磷................................................................................5.6mg/dl...(2.5-6.2)TotalProtein(TP总蛋白)................................................................6.3gm/dl...(5.8-8.1)Albumin白蛋白...............................................................................2.9gm/dl...(2.6-4)Bilirubin胆红素...............................................................................0.6mg/dl...(0.2-0.7)Cholesterol胆固醇..........................................................................204mg/dl...(129-330)Triglyceride三油酐脂........................................................................82mg/dl...(36-135)ALKP(alkalinephosphatase碱性磷酸酶)...........................................65U/l...(20-70)AST(asparateaminotransferase天门冬氨酸转移酶)….30U/l...(14-42)ALT(alanineaminotransferase丙氨酸氨基转移酶)……45U/l...(15-52)GGT(gamma-glutamyltransferaseγ谷氨酰转移酶GGT)…………….5U/l...(1-12)Amylase淀粉酶....................................................................................850U/l...(280-950)CK(creatinekinase)肌酸激酶..............................................................47U/l...(0-130)血气（arterialbloodgasanalysis）动脉血气分析系指应用血气分析仪测定动脉血液的pH、PCO2和PO2值，并计算出HCO3－（AB）、SB、BB、BE、TCO2参数。判断呼吸功能

判断酸碱失衡静脉血取代动脉血行血气分析时，必须牢记静脉血气分析只能用于判断酸碱失衡，不能用于判断呼吸功能钾Potassium维持组织的功能活性和体液渗透压的主要电解质高尿路堵塞急性肾衰糖尿病严重肌肉损伤皮质机能不足某些毒素摄入低胃肠道疾病：呕吐、腹泻、胃肠道溃疡胰岛素注射过量皮质机能亢进利尿药使用过度饥饿低血钾症Hypokalemia

在猫比在犬常见肾脏排钾增加肾脏中尿液形成快而多，钾的损失也较多胃肠道分泌钾（特别是结肠）是一个重要的因素食物中钾的摄取量不足在有些长期没有食欲的病例其临床上的特征表现全身性的肌肉无力，出现步态不稳、僵硬、抬不起头特别严重时可以引起横纹肌溶解低血钾和酸中毒引起肾脏进一步恶化糖尿病与血钾变化

PotassiumlevelandDiabeticpatients发病期高钾血酸中毒细胞内向细胞外转移治疗后低钾血葡萄糖进入细胞时K也进入细胞细胞外向细胞内转移具体补充钾离子的剂量应该根据当时的化验结果而定2－4小时检查一次氯Chloride维持酸碱平衡和参与钠钾离子代谢高脱水代谢性酸中毒皮质机能亢进肾病低呕吐代谢性碱中毒二氧化碳CO2参与维持体内酸碱平衡高－表明血液是酸性腹泻、呕吐脱水肾衰（尿毒症）过度使用利尿剂低－表明血液是碱性饥饿肾衰（也可以引起碱中毒）呕吐、腹泻肝脏功能不好血液电解质的变化

Electrolytesinblood

引起变化的因素胃肠道丢失钠、钾、氯胃丢失钠、氯和水肠道丢失钾、钠、碳酸根和水体腔内积液丢失钠、钾、氯、水利尿剂钾尿糖丢失水磷出血丢失氯、钠、钾肾上腺皮质机能亢进高钾低钠粪便检查主要用于协助诊断消化道疾病：粪便检验粪便成分主要一、标本容器二、标本采集标本采集和处理

颜色生理性况病理性况黄褐色金黄色

灰白色绿色红色酱色黑色成年正常颜色幼龄正常颜色，食物中有较多奶类，服用山道年、大黄等药物服用钡剂后食用大量含叶绿素蔬菜食用大量红色食物后饮食大量咖啡、可可、巧克力等食物服用活性炭、铁剂、饿剂、中药或猪血等抗结核存在未经改变的胆红素胆汁减少或缺如，脂肪过量存在乳儿消化不良下消化道出血阿米巴痢疾、球虫上消化道出血常见颜色的改变粪便性状与气味正常粪便为成形软便，婴儿为糊状便。病理状态时，粪便性状可发生改变。（1）稀糊状或稀汁样便：（2）脓性及脓血便：（3）米苷样便：（4）柏油样便：（5）白陶土样便：（6）鲜血便：

（7）胨状便：（8）黏液便：

粪便中寄生虫虫体

显微镜检查及其临床意义粪便中各有形成分的形态和意义

1、细胞2）白细胞3）巨噬细胞4）肠黏膜上皮细胞：5）肿瘤细胞：2、结晶3、食物残渣粪寄生虫卵粪便中常见致病菌革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌球菌杆菌真菌葡萄球菌、肠球菌、厌氧链球菌难辨芽胞梭菌、结核分枝杆菌、类白喉棒状杆菌假丝酵母菌沙门氏、志贺氏菌、变杆菌、铜绿假单胞菌、小结肠耶尔森氏菌、霍乱弧菌念珠菌组织细胞的检查细针吸取细胞学检查脱落细胞学检查骨髓