长春医学高等专科学校《临床分子生物学检验技术》2025-2026学年期末试卷

长春医学高等专科学校《临床分子生物学检验技术》2025-2026学年期末试卷一、单项选择题（本大题共12小题，每小题3分，共36分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）

1.临床分子生物学检验技术中，PCR技术的核心原理是利用DNA聚合酶在模板DNA存在下合成新的DNA链，以下哪项对其扩增效率影响最大？

A.引物设计不合理导致非特异性结合

B.DNA模板浓度过低

C.循环次数过少

D.离子浓度不足

2.在基因芯片技术中，探针的固定方式通常采用化学方法，以下哪种方法能够最有效地提高探针与芯片表面的结合稳定性？

A.使用低浓度固定液

B.高温处理增强结合

C.选择疏水性材料作为基板

D.探针序列设计时避免重复序列

3.数字PCR技术中，用于检测核酸拷贝数的关键技术是利用微反应单元进行绝对定量，以下哪项错误描述了其工作原理？

A.通过荧光信号的阈值设置判断阳性检出

B.每个微反应单元独立扩增，无需参考标准曲线

C.可直接检测混合样品中的稀有突变

D.对样本量要求较高，不适用于微量检测

4.基因编辑技术CRISPR-Cas9系统中，gRNA的设计需要考虑哪些关键因素？（单选最重要因素）

A.与目标序列的完全互补性

B.gRNA的GC含量应控制在40%-60%

C.避免PAM序列附近存在发夹结构

D.gRNA长度必须严格为20bp

5.在高通量测序中，Illumina测序平台采用的检测方法是？

A.基于焦磷酸盐的信号检测

B.毛细管电泳分离法

C.原位杂交荧光检测

D.离子半导体检测

6.逆转录PCR（RT-PCR）技术中，反转录酶的最适工作条件是什么？

A.pH值5.0-5.5的酸性环境

B.37℃恒温反应

C.需要镁离子和二价锌离子共同参与

D.反应体系需含有RNA酶抑制剂

7.以下哪种分子标记技术最适合进行亲子鉴定？

A.RFLP分析

B.STR（短串联重复序列）检测

C.SNP（单核苷酸多态性）分析

D.RAPD（随机扩增片段多态性）技术

8.在荧光定量PCR中，探针法与扩增抑制剂法相比，主要优势在于？

A.可同时检测多个靶标

B.探针降解产生的荧光信号更稳定

C.对RNA模板的扩增效率更高

D.操作步骤更简便

9.质谱分析在蛋白质组学研究中主要用于？

A.核酸序列测定

B.蛋白质相对分子量测定

C.基因表达水平定量

D.突变基因检测

10.以下哪种技术最适合检测基因表达的可变剪接异构体？

A.Sanger测序

B.数字PCR

C.RNA-Seq

D.基因芯片

11.在基因芯片杂交过程中，影响杂交效率的关键因素包括？

A.探针密度

B.杂交温度梯度设置

C.样本浓度

D.以上都是

12.适用于检测微量病原体的分子诊断技术是？

A.ELISA

B.微流控数字PCR

C.基因芯片

D.荧光定量PCR

二、多项选择题（本大题共8小题，每小题4分，共32分）

1.以下哪些属于PCR反应体系中必须包含的成分？

A.DNA模板

B.dNTP混合物

C.DNA聚合酶

D.引物对

E.混合镁离子溶液

2.数字PCR技术相比传统qPCR的优势包括？

A.可直接绝对定量

B.对扩增效率要求更高

C.可检测稀有突变

D.需要标准曲线校准

E.适用于微量样本分析

3.基因编辑技术CRISPR-Cas9系统中，影响编辑效率的因素有？

A.PAM序列的选择

B.gRNA的脱靶效应

C.细胞系的背景

D.Cas9蛋白浓度

E.编辑位点的甲基化状态

4.高通量测序平台Illumina测序的主要特点包括？

A.二代测序技术

B.通过光化学合成测序

C.读长可达数万bp

D.通量高，成本较低

E.适用于全基因组测序

5.逆转录PCR（RT-PCR）技术中，需要特别注意的问题有？

A.RNA降解风险

B.反转录效率

C.病毒载量定量

D.PCR抑制物影响

E.基因表达水平分析

6.基因芯片技术的主要应用领域包括？

A.肿瘤标志物检测

B.药物靶点筛选

C.基因表达谱分析

D.病原体鉴定

E.指纹图谱构建

7.蛋白质组学研究中，质谱分析的主要应用方式有？

A.蛋白质鉴定

B.糖基化修饰检测

C.蛋白质定量

D.亚细胞定位分析

E.翻译后修饰研究

8.影响分子诊断技术临床应用的因素包括？

A.检测灵敏度

B.操作复杂性

C.成本效益

D.标准化程度

E.检测窗口期

三、简答题（本大题共4小题，每小题7分，共28分）

1.简述PCR技术中引物设计的要点，并说明如何避免非特异性扩增。

2.比较数字PCR和荧光定量PCR在临床检测中的适用场景差异。

3.简述CRISPR-Cas9基因编辑系统的基本工作原理及其在疾病治疗中的潜在应用。

4.说明RNA-Seq技术在肿瘤研究中的优势，并列举至少三种肿瘤相关的分子标志物。

四、论述题（本大题共2小题，每小题10分，共20分）

材料一：

某医院检验科接收到一份疑似乙型肝炎病毒感染患者的血清样本，初步检测发现ALT水平显著升高。临床医生需要快速确诊，检验科决定采用PCR技术检测HBV-DNA。技术员设计了针对HBV核心蛋白基因的特异性引物，在50μL反应体系中加入5μL模板、10pmol/L上下游引物各2μL、2.5mmol/LdNTPs、1.25U/μLTaq酶、20mmol/LMgCl2和pH8.3的缓冲液，总体积补足至50μL。反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸10min。结果显示阳性信号，但临床医生怀疑存在假阳性可能。

材料二：

某研究团队在开展肺癌耐药机制研究时，收集了10例肺腺癌患者的新鲜肿瘤组织样本，通过RNA-Seq技术分析其差异表达基因谱。研究发现其中7例患者存在EGFR基因扩增，且与化疗耐药性显著相关。团队进一步验证了EGFR扩增与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）治疗失败的关联性，证实其可作为预测治疗反应的分子标志物。

1.分析PCR检测HBV-DNA可能产生假阳性的原因，并提出改进措施。

2.结合材料二，论述RNA-Seq技术在肿瘤耐药性研究中的价值，并说明如何利用基因表达谱数据进行临床应用。

五、分析题（本大题共2小题，每小题12分，共24分）

材料一：

某三甲医院感染科接到一起聚集性肺炎病例报告，患者均为近期入住同一病房的老年患者。临床怀疑为新冠病毒感染，实验室立即开展核酸检测。采用反转录PCR技术检测样本中的N基因片段，发现部分样本存在扩增效率差异。技术员发现：①相同反应条件下，痰液样本的Ct值显著低于鼻拭子样本；②加入外标对照后，部分样本扩增曲线呈现"S"型，而另一些样本则呈现平台期后缓慢上升的趋势；③重做实验时，同一份痰液样本的Ct值波动范围达3个单位。

材料二：

某基因测序公司在承接一项肿瘤精准用药项目时，需要对患者肿瘤组织进行全外显子组测序。技术团队采用Illumina测序平台，将样本DNA进行文库构建后进行测序。分析数据显示，某患者