ImageLab中文操作手册

ImageLab™

中文操作手册

Bio-RadLaboratodes.Inc.

2000AlfredNoMDrive

HecU8S.CA94547BIO-MD

C2009BiO>RadLaoorator«.m.

FastandReliable

ImageLab全自动图像获取和分析软件用

于MolecularImagerChemiDoc™XRS+、

MolecularImagerGelDocTV1XR+和

CriterionStainFree™成像系统，可应用于

凝胶电泳和转印膜的数字成像和分析，而自

动化的工作流程能加速图像获取步廉及参数优化，并针对调整好的凝胶或转印膜影像进行系

统性分析，进而得到所需的分析数据结果。

一、软件操作界面

U03a-,2al由iuij苴।0的

•l*«oc<4Op«<»labeureM4Mard3eMcv^b

>分析数据ResultsData

Crtwionr*MYewjM▼X：Yw_--

«AaalysisO♦M

[\AuWAnaMisj

设小度色诡

3.兖析工具列赞彩里

(1)囱像工具(Imageloots)像

(2)泳道及条带工具(LaneandBandTools)

(3)分子量工具(MWMolecularWeight)

(4)自动定量工具(QuantityTools)

(5)注释工具(Annotationfools)

(6)手动定量工具(VolumeTools)

3.MVZAnalyseTods

二、使用ImageLab软件进行化学发光图像获取流程

1.建立图像获取程序：

在凝胶成像(GelImaging)对话框中选择Chemi(化学发光)应用程

5.AnnctotwTods

ROO、物。8€。1】・CbemiDocXR-

⑴在成像区域(ImagingArea)对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小(非必需，可

之后通过PositionGel选择)

⑵选择成像曝光(ImageExposure)方法，可以人为评估曝光时间并以手动设定(Manual

Exposure),或是使用信号累积模式(SignalAccumulationMode,SAM)来进行操作。

在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像喙光的确定，因为您想获得一个充分

利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被

识别：过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和(也就是说，超出了相机准确报告信号的

能力)。如果这是您第一次用ChemiDocXRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信号

累积模式(SAM)之前决定一个合适的成像时间框架。获得这个信息的最好的方式是取得一

个相对短的手工曝光并利用ImageLab里的工具估计最适的曝光时间。

2.手动曝光

ImagtExposure

⑴选择手动设定曝光时间(Manuallysetexposure

0SignalAccumulationMode(Setup}

time)并在读秒框中输入10秒。

hd］尔

AManuallysetexposuretime:

(2)选择Highlightsaturatedpixels。

⑶把胶置于透射箱的中心位置。DHptayOp00m

MHighlightsaturatedpixels

，、人,PositionGel,..

⑷在程序衙口中点击____________)按钮。

⑸观察显示器中样品的实时图像，打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区域。

(6)可利用照相机的变焦滑板口"*"Zoom00O调节成像区域的大小。

RunProtocol

⑺选择按钮获得你的第一个图像。

若所需的图像出现在计算机的显示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。若有饱

和区域存在，请重新以较短的曝光时间来获取图像。若无饱和区域存在，则可移动鼠标置于

最暗的条带之上，在较低的右下角ImageLab窗口中观察信号的强度数值。如图中显示强度

为1994,照相机能记录的最大值的32分之一(最X290Y513Value1994Int

大值为65,535)o用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相机的最大动态范围附近成像

你的样品。若你只需针对单一图像的成像时间进行评估，可直接在手动曝光区域中输入300。

3.信号累积模式(SignalAccumulationMode,SAM)

如果预估方法不足以精确满足您的目的，请选择

SAM按钮，然后按Setup按钮。一个新的对话框会跳出

来，其包含有可输入细分的成像时间的领域。

在这个例子中，我们已经输入了小于和大于我们原始

的300秒曝光估计时间，因为我们有理由相信准确的成像

时间将会在这些时间之中。我们总共想要5个成像，推测AccumulationSetup

其中一个将会与最佳成像极为接近。一个您的SAM设定Thesoftwarewillacquire<hcimagesandsumup

thesigzl.

的图像显示出现在对话框里。Firsttime($«).250

lastImageTime(see)ISO

而SAM设定的影像显示对话窗口，在您选择按

Totalnumberofimages.|S

钮后再点选巴四校钮，窗口会显示相关进度图标来

说明整体图像获取的时间。在250秒获取第一个图像，同

时一个小的缩略图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持续到获取所有的图像。

HO."MXN15mo•(JUS•

就像前面做过的那样，通过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。您也可以通过使用位

于程序窗口左边的图像转换窗口(ImageTransform)中的调节划片改变图像的表观。在SAM

程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。若确定调整到符合您要求的图像时，点

•SelectImageI

击按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在SAM获取图像的过

程中或之后来保存需要的所有图像，直接点选右键单点缩图窗口内的图像即可进行存盘保留

下来。在决定获取图像的数量时，记住增加SAM图像会导致背景信号的平均。当较多的图

像被获得时，在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信号很重

要，我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。

三、建立全自动图像获取及分析程序(CreatingProtocols)

1.启动分析精灵窗口-STEP1.GELIMAGING

(1)按照应用(NucleicAcid/Protein/Blots)选择相关的程序(Chooseanapplication)

Appk«bcn

NucEAodSls♦

FVotenGek♦CoomassieHue

EloUCopperStan

CustomZincStan

Hamhgo

SikerSUin

CoomasiteRuorOanqs

SYPRORuby

(2)选择成像区域(ChoosetheImagingArea)

ImajbgArea

©Selectgdtype:Bk)-RadPROTEANl£xiGd

OErttcrimo^oorcat]K<6Q|cm(WxL)□

(3)选择成像曝光时间(ChooseImageExposureTime)

tnvjQeExposure

(•)ThesoftwarewJoptnizetheexposuretirefor

OsetexposureOw：|o.5OQsec

(4)选择显示设定(ChooseDisplayOptions,HighlightsaturatedpixelsandImageColor)

2.图像自动分析(AnalyzeImage)・・STEP2.DETECTLANESANDBANDS

+殳定DETECTLANESANDBANDS的参数(LowBandDetectionSensitivity(Low

sensitivity=25)>HighBandDetectionSensitivity(Highsensitivity=75)或自行设定灵敏

度。

3.分子量分析(AnalyzeMolecularWeight)-STEP3.ANALYZEMOLECULARWEIGHT

CMmlDocXRS.二但rx

设定AnalyzeMolecularWeightSettings的分子量标准品(MolecularWeight

Standard)类型，所有Bio-Rad的各类标准品(包括核酸、蛋勺)均已预存。当然，您也可以

根据您的实脸设置您自定义的分子量标准品。并同时设定分子量标准品的泳道及回归方式，

4.报告输出设定(ReportSettings)--STEP4.SPECIFYCONTENTOFREPORTS

E

5.结果(ResultsOverview)及报告(Report)Report

■BroadRangeDilution(ReadOnly)*Mfnfx

Annotation

LaneLabels

Molecular

WeiqM一

Labeb

LaneFrarrn

Stdndard_

Lane-

(1)数据显示信息(DisplayingData)

AnalysisTableLaneProfileStandardCurve七

(2)分析表格设定(Analysis侣bleOptions)居妇

3360573313f2a123O.7516697

SABBAT妣AWtumTaSe_2

回

(3)Lane信息(LaneProfile)n。/

StandardCurveIone1C3叵区）

ELabels□LOQY-AXJS

—Regression▲SCandbds

1

250-▲

四、建立图像分析程序(CreatingImagesAnalyzingProtocols)

1.图像分析(AnalyzingImages)

(1)分析〕其AnalysisToolBox

(A)自动分析(AutoAnalysis)

,」r\Auto-AnaiysislI,一

点选1----1'七人DetectionSettings'面口

设定Detectlanesandbands的参数(LowBandDetectionSensitivity(Low

sensitivity=25)、HighBandDetectionSensitivity(Highsensitivity=75)或自行设定灵敏

度)，接着再设定MolecularWeightAnalysisSettings的MolecularWeightStandard>

StandardLanes及RegressionMethod参数。

2.图像工具(ImageTools)

可进行水平或垂直翻转、左右旋转90℃或自由旋转

(Rotate)、裁剪(Crop)、反转(InvertData)及迭合(Merge)。

LaneandB5ds

IsesBands

LaneFinder

3.Lanes及Bands工具(LaneandBandTools)Automatk

(1)LanelabManual...

使用自动(Automatic)或手动(Manual)搜寻Lane功能Allanes

(A)针对所有的Lanes(AllLanes)进行大小调整(Resize)s(Adjust)及删\Resize

除(Delete)等参数调整。

(B)针对单一Lane(SingleLane)进行增加(Add)、弯曲(Bend)、移动

(Move)＞宽度(Width)及删除(Delete)等参数调整。srijleLene

(C)利用LaneBackgroundSubtraction进行背景值的扣抵，并可点选(Apply，UAdd

toselectedLane)针对单一Lane进行调整。DDelae

-可以藉由RollingDisk参数设定(1-99mm)来去除背景值。ffBend

OMove

(2)BandsTabLaneandBands

通过DetectBands进行自动搜寻Bands功能或手动进行增加

(Add)、删除(Delete)及(Adjust)等参数调整。

4.分子量分析工具(MolecularWeightAnalysisIdols)

此工具可由已知的标准品测算相对的分子量或碱基对(basepairs)o

5.定量工具(QuantityIdols)

(1)相对定量(RelativeQuantitylab)Quantitylook

从图像中选择已知的标准品(referenceband)及其标准品浓度RelabveAbsolute

(以绿色R表示)，其分析结果可从Analysistable观察。Quen«y

Sefectareferencebandon

the8

S-fect

SelectBandstoaddto

calbfattoncuve

I-ect|

StvxiafdRand$:

1«言

代

年*

*2

«*)£

仔

)»M

)

(2)绝对定量(AbsoluteQuantitylab)

通过选择已知标准品浓度的bands(至少两个以上，以R表示)，

并设定合适的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands的绝对浓

度(回归参数设定如Linear(较常用)、Point-to-Point或Cubicspline)。

RegressionMinimumnumberMinimumnumberv/ithRegression

MethodofstandardForceThroughOptionMethod：

LEV

Linear21□Forcethroughor0n

Point-to-Point21

/Ockonbandtoselecta

CubicSpline54/starridedbard

■StandardCurve-1ane1

(3Sho”Sbeblog.Axt；

A

I

H

=

U

=

O

3

三

一

o

s

q

4

05001,0001,5002,000

BandVolumex1000

RegressonMethod：linear

Formula:y=0.006.*x+1.54

R-SquaredVahe0.953908

LMoLWeghtStandardCure7\Ab$.QuanbtySUndardCurve八枕lumeSt*正

Algrmert

6.注释工具(AnnotationIdols)㈤画固也也画

可以通过AddAnnotations工具增加文字批注及箭头批注并TextPfoperbes

可调萃批注相对位雷(Alignment)x文字属性、颜色及旋转方向等参数]

Size：二二J

Cdor

Foreground:

Back^cxjnd: