关于冯了性安宫牛黄丸有效成分体外稳定性的统计分析

关于冯了性安宫牛黄丸有效成分体外稳定性的统计分析 目录TOC\o"1-1"\h\u关于冯了性安宫牛黄丸有效成分稳定性的统计分析 7前言 71.确定安宫牛黄丸留样观察值与留样时间的关系 71.1胆红素（牛黄）的含量 71.2黄芪苷（黄芩）的含量 81.3盐酸小檗碱（黄连）的含量 82.系数a的方差分析 92.1胆红素（牛黄）的方差a分析结果 92.2黄芩苷（黄芩）方差a的分析结果 102.3盐酸小檗碱（黄连）的方差分析结果 103.回归系数a=0的检验(检验假设Ho：a=0) 103.1胆红素（牛黄）方程系数a(1)=0的检验 103.2黄芩苷（黄芩）方程系数a(2)的检验 113.3盐酸小檗碱（黄连）方程系数a(3)的检验 114.由药品留样观察值判断其总体期望值是否符合标准要求的检验。 114.1胆红素（牛黄） 114.2黄芩苷（黄芩苷） 114.3盐酸小檗碱（黄连） 125.结论 125.1关于样本量过小是否有代表性意义的思考 125.2关于冯了性安宫牛黄丸主要成分的稳定性问题讨论 12参考文献 15致谢 16中文摘要：目的：通过观察冯了性安宫牛黄丸内主要成分指标考察其在时间维度上的稳定性。方法：通过对同一生产工艺下不同批次的三批冯了性安宫牛黄丸主要成分牛黄（胆红素）、黄芩（黄芩苷）、黄连（盐酸小檗碱）含量与时间的回归方程建立，回归系数的显著性检验，由留样观察值判断其总体期望值是否符合标准要求的检验从而评估冯了性安宫牛黄丸在一定期限内稳定性的变化情况，以科学的手段明确安宫牛黄丸内主要有效成分含量随时间的变化趋势。结果：通过留样观察值计算得出回归方程，确定其有效成分含量不随时间的变化而变化，观察值的变化波动可能是分析误差，总体期望值符合标准要求。结论：在超出保质期一年以内，冯了性安宫牛黄丸内主要有效成分含量没有较明显的变化，稳定性较好。关键词：安宫牛黄丸；胆红素；黄芩苷；盐酸小檗碱；稳定性；回归方程ABSTRACTObjective:AmethodforthedeterminationofmajoractivesinFengLexingAngongNiuhuangpilltoevaluatethefixitywithtime.Methods:Therearesomewaystogettheattainment,suchasthebuildingofFormulabetweenthemajoractivesandtimelimit,thesignificancetestofRegressionCoefficient,throughreservingsampleforobservationtoevaluatedifferencefromthestandard.Results:Inevitably,thecalculationsareuptothedrugstandardsConclusion:TherearequitegoodfixityinFengLexingAngongNiuhuangpillin4yearsfromitsmakingtimeanditsqualityguaranteeperiodisthreeyears.Keywords:FengLexingAngongNiuhuangpill;Bilirubin;Baicalin;BerberineHydrochloride;Fixity;RegressionEquations关于冯了性安宫牛黄丸有效成分稳定性的统计分析前言安宫牛黄丸有清热解毒，豁痰开窍的功用，临床主治邪热心包证，亦治中风昏迷、小儿惊厥，属邪热内闭者，属于中医急救药物之一。近年来媒体大肆报道宣扬安宫牛黄丸的“神奇功效”，伴随药理机制的研究深入,安宫牛黄丸的临床应用已经从传统的内科危急重症扩展至外科、妇科、儿科等多科范围，尤其是对于脑部疾病的治愈效果，加之专业的医学研究表明对重症脑出血患者,在常规西医治疗的基础上给予安宫牛黄丸口服,能够有效的提高临床疗效,值得推广应用[1]。安宫牛黄丸成为药物里炽手可热的明星，还成为不少家庭私人珍藏的选择。在1993年国务院发布禁止安宫牛黄丸配方里的犀牛角贸易的通知后，1993年前的安宫牛黄丸更是被炒出了天价。其配方有牛黄、犀角、黄连、朱砂、黄芩、麝香、雄黄等，作为一名中药学生，作者试图用科学的手段解答安宫牛黄丸过了保质期后其主要有效成分是否发生变化。1.确定安宫牛黄丸留样观察值与留样时间的关系冯了性安宫牛黄丸保质期为三年，牛黄以胆红素计，每丸不得少于9.3mg；黄芩以黄芩苷计，每丸不得少于5.0mg；黄连以盐酸小檗碱计，每丸不得少于2.3mg。每一年同一时间用同样的方法进行各成分含量测定，共3批，观察各4年。根据观察值建立回归方程:1.1胆红素（牛黄）的含量表1时间（年）批次第1年第2年第3年第4年12000115.016.014.520.713000118.016.517.918.814000120.816.418.120.3平均值（mg/丸）17.916.316.819.9根据胆红素的观察值进行回归计算:以胆红素含量值为y,单位mg/丸，时间为x，单位年，建立回归方程（1）图1回归方程（1）y=0.65x+16.1反映了胆红素含量估计值随时间x的变化规律1.2黄芪苷（黄芩）的含量表2时间（年）批次第1年第2年第3年第4年1200018.29.29.09.013000110.010.09.810.014000110.49.59.89.3平均值（mg/丸）9.59.69.59.4黄芩苷的观察值进行回归计算,以黄芩苷含量值为y，单位mg/丸，时间为x，单位年，建立回归方程（2）图2回归方程（2）y=-0.04x+9.6反映了黄芩苷含量估计值随时间x的变化规律1.3盐酸小檗碱（黄连）的含量表3时间（年）批次第1年第2年第3年第4年1200013.43.84.14.0130001 4.13.94.44.01400013.94.73.83.7平均值（mg/丸）3.84.14.13.9以盐酸小檗碱含量值为y，单位mg/丸，时间为x，单位年，建立回归方程（3）图3回归方程（3）y=0.03x+3.9反映了盐酸小檗碱含量估计值随时间x的变化规律2.系数a的方差分析在给定的检验水平d(取0.1，0.05,0.01)如F≤,则说明y与x不成直线关系。其药品留样观察值的波动可以排除系统因素（药品不稳定）造成，故可认为药品在规定的有效期内是稳定的，而药品留样观察值得变化是由分析（偶然）误差所造成。2.1胆红素（牛黄）的方差a分析结果表4方差来源平方和自由度均方F回归（x）剩余总和117.331147.031264.35123117.33=573.510.20查表得，,故说明规格相同的冯了性安宫牛黄丸的胆红素不随留样时间变化2.2黄芩苷（黄芩）方差a的分析结果表5方差来源平方和自由度均方F回归（x）剩余总和-3.972364.99361.02123-3.973=180.52-0.02查表得，,故说明规格相同的冯了性安宫牛黄丸的黄芩苷不随留样时间变化2.3盐酸小檗碱（黄连）的方差分析结果表6方差来源平方和自由度均方F回归（x）剩余总和1.2062.0763.271231.20=31.0250.04查表得，,故说明规格相同的冯了性安宫牛黄丸的盐酸小檗碱不随留样时间变化。回归系数a=0的检验(检验假设Ho：a=0)3.1胆红素（牛黄）方程系数a(1)=0的检验H:a（1）=0t(1)=|a-0|/｛｝=0.19查表t0.05,3=3.182,t0.01,3=5.841t（1）<t0.05,3<t0.01,10,故H成立，y=常数,说明留样实测值数据波动由分析造成。3.2黄芩苷（黄芩）方程系数a(2)的检验H:a（2）=0t(1)=|a-0|/｛｝=0.0067查表t0.05,3=3.182,t0.01,3=5.841t（1）<t0.05,10<t0.01,10,故H成立，y=常数,说明留样实测值数据波动由分析造成。3.3盐酸小檗碱（黄连）方程系数a(3)的检验H:a（3）=0t(1)=|a-0|/｛｝=0.012查表t0.05,3=3.182,t0.01,3=5.841t（1）<t0.05,10<t0.01,10,故H成立，y=常数,说明留样实测值数据波动由分析造成。由药品留样观察值判断其总体期望值是否符合标准要求的检验。4.1胆红素（牛黄）H:=9.3mg/丸=22.16查2.776<t即在给定的水平a=0.05,有95%的把握认为成立4.2黄芩苷（黄芩苷）H:=5.0mg/丸=15查2.776<t即在给定的水平a=0.05,有95%的把握认为成立4.3盐酸小檗碱（黄连）H:=2.3mg/丸=22.33查2.776<t即在给定的水平a=0.05,有95%的把握认为成立结论5.1关于样本量过小是否有代表性意义的思考估计样本量大小时，应考虑所调查指标的变异度、参数估计的精度及可信度等因素的影响。冯了性安宫牛黄丸有稳定的原材料供应链以及稳定的生产工艺、严格的全过程监管措施和符合标准的储存仓库,药品在生产、储存、销售过程中产生变异的可能极小，一般实际应用过程中会选择忽略。检验过程严格按照《中国药典》的要求，以高精密的高效液相色谱仪进行含量测定，测定数据经过多次重复鉴定排除偶然性，因此观察值可靠，具有较高的可参考意义。在进行药品留样稳定性统计分析时，还常遇到同品种多个批号或不同工艺生产的产品差异性检验。他们同样可以用f检验和二方差的齐性检验来判断。[2]因此，作者认为，此次实验样本数量的问题在此并不具备太高的影响性，由此次计算结果得出的结论可信度较高。5.2关于冯了性安宫牛黄丸主要成分的稳定性问题讨论从建立三个主要成分含量的回归方程，通过计算得出胆红素、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量基本不随时间的变化而变化，观察值的差异极有可能是因为分析过程，总体期望值符合标准要求，安宫牛黄丸的主要成分具有一定的稳定性，且通过数据明确，在保质期过后一年内，其主要有效成分的含量基本不变。胆红素是安宫牛黄丸内牛黄药材的含量指标。牛黄为牛科动物牛的干燥胆结石，具有镇静、解热、抗炎和祛痰等多种功效。用于治疗热病神昏、中风痰迷、惊痫抽搐、癫痫发狂、咽喉肿痛、口舌生疮、痈肿疔疮等症。因其良好的疗效和极低的副作用而在临床及现代抗菌消炎类药品中得到了广泛使用。[3]肝之经脉循喉咙入颃颡，肝之经气上于咽喉，牛黄入肝经，有直达病位之功。现代药理研究发现[4]，牛黄能抑制中枢神经系统，具有镇静、镇痛、解热、抗惊厥的作用。牛黄通过抗炎、抗病原微生物、抗氧化及抑制肿瘤生长的作用来体现“清热解毒”的功效。现医学工业上广泛应用的是胆红素含量在35%以上的人工培植牛黄（简称高胆红素培植牛黄）和胆红素含量在18%~34%的培植牛黄（简称中胆红素培植牛黄）。胆红素主要发挥其解热作用。据报道，牛黄中含有胆酸、牛磺酸也具有解热作用,因此认为牛黄解热效果与胆红素的含量并无太大关系。因此，胆红素只是作为一个测量指标来衡定安宫牛黄丸内牛黄的含量，对于其治疗价值参考意义不大。黄芩苷是安宫牛黄丸内黄芩药材的含量指标。黄芩系唇形科植物黄芩的干燥根,具有清热解毒、燥湿泻火、凉血止血、安胎等功效,在临床应用中范围很广,能清肺胃胆及大肠经之湿热,用于肺热咳嗽、热病烦渴、咽喉肿痛。该中药提取物存在抗病毒、抗菌、镇痛解热、自由基清除、抗氧化及抗癌等多种效果。有研究表明,黄芩除了能发挥抗生素、抗病毒、抗癌及镇痛解热之效之外,还有助于对机体的肝脏、免疫系统及神经系统进行保护。[5]黄芩苷和小檗碱在单味药及复方中均有良好吸收，是发挥疗效的主要物质。因此黄芩苷和盐酸小檗碱不仅仅只是安宫牛黄丸的测量指标，还是丸剂起作用的主要有效成分。但黄芩苷较差的水溶性和脂溶性导致其生物利用度低。利用新技术制备新剂型以改变其物理特性是研究黄芩有效利用的一个可行方向。盐酸小檗碱是安宫牛黄丸内黄连的含量指标。黄连是常见的中药材,药用价值明显,在多种疾病治疗中发挥重要作用,如泻痢、黄疸、牙痛、湿疹、湿疮等。黄连主要提取物为黄连素，也被称为“小檗碱”，现代药理学证实，黄连提取物可发挥明显的抗炎作用，同时能够对机体免疫功能进行有效调节。有文献报道认为，黄连素可降低胆固醇含量，从而改善脂肪代谢功能。也就是说，盐酸小檗碱的应用价值明显。以上，笔者有理由认为当安宫牛黄丸内主要有效成分黄芩苷和盐酸小檗碱的含量发生变化将会影响安宫牛黄丸的药用效果。但是经过数据分析，黄芩苷和盐酸小檗碱具有较强的稳定性不易发生变化，一般情况下，安宫牛黄丸产生质量变差或者效果减弱的情况可以不考虑胆红素、黄芩苷、盐酸小檗碱的变化可能。本次数据分析只能从单一成分的对比确定安宫牛黄丸某些主要成分的变化，排除胆红素、黄芩苷和盐酸小檗碱随着时间变化而影响用药效果的可能性，不能表明保质期过了的安宫牛黄丸不会发生质量上的变化而改变其药用价值和产生有害物质。随着安宫牛黄丸的基础研究以及临床应用逐渐趋于活跃，其研究的方向仍然主要集中在安宫牛黄丸的药效学作用机理以及扩大其临床适应症方面,这些研究工作为该方的临床应用提供了科学依据。也为中药复方的深入研究提供了有意义的探索。然而随着科学技术的发展,人们用药安全意识的提高,解决中药名方中重金属和砷化物超标问题已迫在眉睫。因此,利用现代科学手段在药效学上系统研究中药复方中重金属存在的必要性就显得尤为重要。这将是中药实现现代化、国际化进程中急待解决的问题之一。安宫牛黄丸可以显著降低主动脉膜厚度,降低低密度脂蛋白胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇的比例,还可以明显改善异常主动脉和心脏的病理状况,有助于防止心肌细胞梗死[6]。在心脑血管疾病成为危害人类生命一大杀手的今天，安宫牛黄丸的这些药理作用让它的发展前景更为可观。而且在2020年的这一场肺炎中，中医的名声更上一层楼，安宫牛黄丸作为中药名方之一，其有口皆