2026年病理科医技人员病理诊断技术考核试题及答案解析

2026年病理科医技人员病理诊断技术考核试题及答案解析一、单项选择题（共20题，每题1.5分，共30分）1.在常规H&E染色中，苏木精染液常用的氧化剂是（）。A.硫酸铝钾B.氧化汞C.甘油D.乙醇2.组织固定最常用的固定液是（）。A.95%乙醇B.10%中性缓冲福尔马林（NBF）C.Zenker液D.Carnoy液3.下列关于冷冻切片的描述，错误的是（）。A.适用于术中快速病理诊断B.组织无需经过脱水透明处理C.切片厚度通常比石蜡切片厚D.细胞核与细胞质的染色清晰度优于石蜡切片4.在免疫组化染色中，最常用的抗原修复方法是（）。A.胰酶消化B.微波热修复C.胃蛋白酶消化D.室温放置过夜5.网状纤维染色（银染色）中，网状纤维呈现的颜色是（）。A.黑色B.棕色C.蓝色D.红色6.脱钙过程中，常用的脱钙液是（）。A.10%硝酸B.5%醋酸C.生理盐水D.4%甲醛7.组织切片中出现“空洞”或“裂隙”现象，最常见的原因是（）。A.固定时间过长B.组织脱水不彻底C.染色时间过短D.封片剂过稀8.下列哪种抗体是上皮源性肿瘤的广谱标记物？（）A.VimentinB.Cytokeratin(CK)C.S-100D.Desmin9.在病理技术质量控制中，HE染色细胞核着色不良呈蓝色，最可能的原因是（）。A.苏木精染色时间过长B.分化液（盐酸酒精）作用时间过长C.伊红浓度过高D.脱水时间不足10.Masson三色染色法中，肌纤维通常被染成（）。A.红色B.蓝色C.绿色D.黄色11.透射电子显微镜观察超微结构时，组织包埋常用的介质是（）。A.石蜡B.火棉胶C.环氧树脂D.明胶12.抗酸染色中，结核杆菌呈现的颜色是（）。A.蓝色B.红色C.黑色D.紫色13.下列关于革兰染色的步骤，正确的是（）。A.结晶紫→碘液→酒精脱色→番红B.番红→结晶紫→碘液→酒精脱色C.酒精脱色→结晶紫→碘液→番红D.结晶紫→酒精脱色→碘液→番红14.在免疫组化非生物素聚合物检测法（如EnVision法）中，第二抗体通常结合有（）。A.酶标生物素B.荧光素C.多个酶分子和抗抗体D.放射性同位素15.组织块在进行石蜡包埋前，必须经过的透明剂是（）。A.乙醇B.二甲苯C.丙酮D.甲醛16.检查淀粉样变最常用的特殊染色是（）。A.刚果红染色B.PAS染色C.油红O染色D.吉姆萨染色17.病理切片封片时，最常用的中性封片剂是（）。A.树胶B.甘油C.加拿大树胶D.香柏油18.下列哪种情况属于免疫组化染色中的“假阳性”？（）A.肿瘤细胞不表达该抗原，背景无着色B.内源性生物素干扰导致的非特异性着色C.抗原丢失导致的阴性结果D.显色时间不足导致的着色浅19.计算配制1000mL5%盐酸酒精分化液（需70%乙醇为溶剂），需要37%浓盐酸（密度1.19）和70%乙醇的体积最接近（）。（注：按体积比估算，浓盐酸浓度较高）A.5mL浓盐酸+995mL乙醇B.50mL浓盐酸+950mL乙醇C.135mL浓盐酸+865mL乙醇D.10mL浓盐酸+990mL乙醇20.在液基薄层细胞学制片（TCT）中，保存液的主要成分不包括（）。A.甲醇B.乙醇C.缓冲液D.二甲苯二、多项选择题（共10题，每题3分，共30分。多选、少选、错选均不得分）1.影响常规石蜡切片质量的主要因素包括（）。A.组织固定是否充分B.蜡块温度是否适宜C.切片刀是否锋利D.组织脱水是否彻底2.下列属于特殊染色范畴的有（）。A.AB-PAS染色B.普鲁士蓝染色C.免疫荧光染色D.镀银染色3.免疫组化染色中出现背景着色（非特异性染色）的常见原因有（）。A.一抗浓度过高B.孵育时间过长C.内源性过氧化物酶未阻断D.DAB显色时间过长4.病理技术室常用的危险化学品包括（）。A.二甲苯B.甲醛C.浓硫酸D.DAB（二氨基联苯胺）5.关于苏木精-伊红染色（HE）原理的描述，正确的有（）。A.苏木精是碱性染料，使细胞核着色B.伊红是酸性染料，使细胞质着色C.细胞核内酸性物质与苏木精阳离子结合D.细胞质内碱性物质与伊红阴离子结合6.脱钙效果的监测方法包括（）。A.物理检查法（针刺法）B.化学检查法（钙指示剂）C.称重法D.肉眼观察法7.下列哪些抗体常用于诊断淋巴瘤？（）A.CD20B.CD3C.LCA(CD45)D.Desmin8.组织处理过程中，若脱水时间过长或乙醇浓度过高，可能导致（）。A.组织收缩变硬B.切片困难C.染色不均D.细胞结构模糊9.在数字病理扫描中，影响图像分辨率的关键参数有（）。A.扫描倍率B.CCD/CMOS传感器性能C.聚焦精度D.光源强度10.分子病理技术中，原位杂交（ISH）技术的主要步骤包括（）。A.探针标记B.组织预处理与蛋白酶消化C.杂交与洗涤D.显色或荧光检测三、判断题（共10题，每题1分，共10分。正确的打“√”，错误的打“×”）1.10%中性缓冲福尔马林（NBF）的最佳固定时间一般为24-48小时。（）2.冷冻切片制作中，组织温度越低，切片越容易成型，质量越好。（）3.所有的单克隆抗体都比多克隆抗体特异性强，且无交叉反应。（）4.在进行PAS染色（糖原染色）时，需要先用唾液或淀粉酶消化做对照实验。（）5.病理切片的厚度一般在2-4μm之间，冷冻切片可稍厚，约5-8μm。（）6.乙醇是一种优良的固定剂，既能固定又能脱水，且对染色体固定效果最好。（）7.免疫组化染色中，PBS缓冲液的pH值一般维持在7.2-7.4之间。（）8.刚果红染色在偏振光显微镜下观察淀粉样物质时，可见苹果绿色的双折射。（）9.脱水机内的试剂如果长期不更换，只会影响脱水速度，不会影响组织质量。（）10.FISH（荧光原位杂交）技术可以用于检测基因扩增、易位和缺失。（）四、填空题（共10空，每空1分，共10分）1.常规H&E染色中，为了使细胞核着色清晰，切片经苏木精染色后，必须使用__________进行分化，然后返蓝。2.组织切片在染色前必须进行__________，以使石蜡熔化并使组织水化。3.免疫组化染色中，DAB显色后的沉淀物颜色通常为__________。4.病理技术中，为了消除内源性过氧化物酶的活性，通常使用__________处理切片。5.透射电镜样品制备中，常用的重金属盐染色剂是醋酸铀和__________。6.在病理诊断中，鉴别霍奇金淋巴瘤R-S细胞最常用的抗体组合是__________和CD30。7.甘油明胶常用于__________（冷冻/石蜡）切片的封片。8.组织固定液的总酸度是指固定液中__________的含量。9.为了防止石蜡切片在长期保存中褪色，封片前切片必须__________。10.PCR（聚合酶链式反应）技术中，变性步骤的温度通常设定为__________℃。五、名词解释（共5题，每题4分，共20分）1.抗原修复2.脱钙3.假阴性4.术中冷冻切片诊断5.液基细胞学技术(LBC)六、简答题（共4题，每题5分，共20分）1.简述常规石蜡切片制作的基本流程。2.简述免疫组化染色（EnVision法）的主要步骤。3.简述HE染色中细胞核着色过浅（发灰）的可能原因及解决方法。4.简述病理技术工作中生物安全防护的基本要求。七、综合分析与应用题（共3题，共30分）1.（10分）某病理技术员在进行一批乳腺浸润性导管癌的免疫组化染色（检测ER、PR、HER2）时，发现阳性对照组织（已知阳性）的细胞核未着色，而阴性对照组织背景干净。请分析可能的原因，并制定排查方案。2.（10分）现有一例骨肿瘤穿刺标本，组织块较小且含骨组织。请设计一套完整的病理技术处理方案，从固定到最终染色（包括特殊处理），以确保获得高质量的HE切片用于诊断。3.（10分）在常规HE染色质控中，发现切片整体呈现红色，细胞核着色极淡或不着色，细胞质与细胞核对比度差。请运用染色化学原理分析此现象产生的机制，并列举至少3个具体的操作因素导致此结果，给出相应的纠正措施。答案及解析一、单项选择题1.B。解析：苏木精本身不是染料，必须氧化成为苏木红（Haematein）才具有染色能力。常用的氧化剂有氧化汞、氧化钠或高锰酸钾等。氧化汞（B）效果较好但有毒，现在常用氧化钠等替代。硫酸铝钾是媒染剂，甘油是稳定剂。2.B。解析：10%中性缓冲福尔马林（NBF）是病理科最通用的固定液，渗透性强，固定均匀，能较好地保存抗原，且通过缓冲液中和甲醛酸，防止甲醛色素形成。3.D。解析：冷冻切片虽然速度快，但未经过石蜡包埋的精细脱水透明，细胞内水分形成冰晶，且切片厚度较厚，因此其细胞核和细胞质的微细结构清晰度通常不如石蜡切片。4.B。解析：甲醛固定会导致蛋白质交联，掩盖抗原决定簇。热修复（如微波、高压锅）通过加热断裂交联，是目前最常用、效果最广泛的抗原修复方法。酶消化主要用于特定抗原或冷冻切片。5.A。解析：网状纤维染色（如Gomori银染色）利用网状纤维嗜银的特性，使银离子还原并沉积在纤维上，经显色后呈黑色。6.A。解析：脱钙常用强酸，如硝酸、盐酸等。10%硝酸（A）是常规脱钙液，脱钙速度快，但作用过久会破坏细胞核形态。7.B。解析：组织脱水不彻底，组织中残留水分，进入二甲苯透明时，水分与二甲苯不互溶，且进入石蜡包埋时水分蒸发会留下空洞，导致切片出现裂隙。8.B。解析：Cytokeratin(CK)是上皮细胞的中间丝，是上皮源性肿瘤（癌）的广谱标记物。Vimentin是间叶源性标记，S-100多用于神经源性肿瘤，Desmin用于肌源性肿瘤。9.B。解析：苏木精染色后，需要用盐酸酒精（分化液）分化，去除过染的胞质背景。若分化液作用时间过长，会将细胞核内的颜色也分去，导致细胞核着色不良呈淡蓝色或无色。10.A。解析：Masson三色染色中，肌纤维被染色为红色，胶原纤维被染色为蓝色，纤维素等被染色为红色。11.C。解析：电镜观察需要极高的分辨率和切片硬度，石蜡和火棉胶均无法满足超微结构保存和超薄切片的要求。环氧树脂（C）包埋块硬度适中，支持超薄切片，且能良好保存超微结构。12.B。解析：抗酸染色（Ziehl-Neelsen法）中，分枝杆菌（如结核杆菌）细胞壁含脂质高，不易着色，一旦被石炭酸复红（红色）着色后，能抵抗盐酸酒精的脱色，故呈红色。背景被亚甲蓝复染为蓝色。13.A。解析：革兰染色步骤为：初染（结晶紫）→媒染（碘液）→脱色（酒精）→复染（番红）。14.C。解析：EnVision法（二步法）利用一种携带多个酶分子（如HRP）和抗抗体（二抗）的聚合物复合物，直接与一抗结合，无需生物素-亲和素系统，减少了背景染色。15.B。解析：透明步骤是为了让石蜡顺利进入组织。二甲苯（B）是最常用的透明剂，既能溶解石蜡，又能与乙醇互溶。16.A。解析：刚果红染色（A）是诊断淀粉样变性的金标准，淀粉样物质结合刚果红后，在普通光镜下呈橙红色，偏振光下呈苹果绿双折射。17.C。解析：中性树胶（如加拿大树胶，C）折光率与玻璃和组织相近，透明度好，是永久性封片的标准封片剂。甘油多用于湿封或荧光封片，香柏油多用于油镜。18.B。解析：假阳性指不该着色的部位着色。内源性生物素（如肝、肾细胞）与检测系统中的亲和素结合，会导致非特异性着色（B）。A是真阴性，C是假阴性，D是显色不足。19.C。解析：需配制1000mL5%的盐酸溶液（溶质为HCl）。设需37%浓盐酸体积为V。0.37×V=20.D。解析：液基细胞学保存液主要成分是甲醇或乙醇（固定细胞）和缓冲液。二甲苯（D）是脱水透明剂，不用于保存液。二、多项选择题1.ABCD。解析：病理切片制作是一个连续过程，固定（A）、脱水（D）、包埋（B）、切片（C）任何一个环节出现问题都会影响最终质量。2.ABD。解析：特殊染色通常指显示特定组织成分（如糖原、纤维、细菌）的化学染色方法。AB-PAS（A）、普鲁士蓝（B）、镀银（D）均属此类。免疫荧光（C）属于免疫组织化学范畴。3.ABCD。解析：背景着色原因众多：抗体浓度过高（A）或孵育过长（B）增加非特异性吸附；内源性酶未阻断（C）会催化显色底物；DAB显色时间过长（D）会导致整个切片沉淀增加。4.ABCD。解析：二甲苯（A）和甲醛（B）有毒且致癌；浓硫酸（C）具有强腐蚀性；DAB（D）是致癌物，处理和显色时需特别注意防护。5.ABC。解析：苏木精是碱性染料（带正电），与细胞核内酸性物质（带负电，如DNA）结合，此为正染；伊红是酸性染料（带负电），与细胞质内碱性物质（带正电，如蛋白质）结合。故A、B、C正确。D项描述错误，伊红结合的是碱性成分。6.AB。解析：脱钙监测最常用物理法（A，针刺法，感觉无阻力）和化学法（B，钙指示剂，如氢氧化铵，不产生沉淀即为脱钙完成）。称重法（C）不常用，肉眼观察（D）不准确。7.ABC。解析：CD20（B细胞标记）、CD3（T细胞标记）、LCA（白细胞共同抗原）均为淋巴瘤常用抗体。Desmin（D）是肌源性标记，用于横纹肌肉瘤等。8.ABCD。解析：过度脱水会导致组织严重收缩硬化（A），切片时易碎或卷曲（B），导致细胞收缩变形，染色时着色不均（C）或结构模糊（D）。9.ABC。解析：数字扫描的分辨率取决于光学放大倍率（A）、传感器像素密度（B）以及聚焦算法的精度（C）。光源强度（D）主要影响亮度，不影响分辨率。10.ABCD。解析：原位杂交全过程包括：探针标记（A）；组织固定、通透化（预处理，B）；预杂交、杂交、后洗涤（C）；最后通过显色（ISH）或荧光（FISH）检测（D）。三、判断题1.√。解析：NBF固定时间一般建议为组织体积的10-20倍，时间24-48小时。固定过短会导致固定不良，过长会导致抗原丢失。2.×。解析：冷冻切片温度并非越低越好。温度过低（如低于-30℃），组织过硬易碎裂，且切片容易皱缩；温度过高则组织软烂成泥状。一般恒温冷冻切片机温度在-18℃至-25℃左右。3.×。解析：单克隆抗体特异性高、均一性好，但并非绝对无交叉反应。多克隆抗体灵敏度高但特异性稍差。两者各有优劣。4.√。解析：PAS染色特异性显示糖原和粘多糖。为了证实染色物质确为糖原，必须设立对照，用淀粉酶或唾液消化处理切片，若染色消失则为糖原。5.√。解析：石蜡切片通常为3-5μm，精细结构可切2μm；冷冻切片因难以切薄，通常为5-8μm。6.×。解析：乙醇虽有固定作用，但主要引起蛋白沉淀，对染色体（核蛋白）固定效果很差，会导致核染色质结构不清，不是首选固定剂。7.√。解析：免疫组化染色所需的生理环境pH值接近中性，通常使用0.01MPBS，pH7.2-7.4。pH过高或过低会影响抗体活性和非特异性结合。8.√。解析：这是刚果红染色诊断淀粉样变性的特征性表现，在偏振光显微镜下可见典型的苹果绿色双折射。9.×。解析：脱水机试剂若长期不更换，浓度会降低（水分增多），导致组织脱水不彻底，严重影响组织处理质量，引起切片困难和染色不良。10.√。解析：FISH技术利用荧光标记的核酸探针与细胞内特定的靶核酸序列杂交，通过荧光信号检测基因的扩增、易位（如HER2扩增、ALK易位）和缺失等。四、填空题1.盐酸酒精分化液（或1%盐酸酒精）。解析：苏木精染色后，利用盐酸酒精分化，去除吸附在细胞质和背景上的多余染料。2.烤片脱蜡（或烤片）。解析：石蜡切片必须先烤化石蜡并脱去蜡，经梯度酒精水化后，才能进行水溶性染料的染色。3.棕色。解析：DAB（二氨基联苯胺）是HRP（辣根过氧化物酶）最常用的显色底物，反应产物呈棕色沉淀。4.3%过氧化氢（）（或甲醇双氧水）。解析：用于阻断组织内源性过氧化物酶活性，防止其催化DAB显色产生假阳性。5.柠檬酸铅。解析：电镜双重染色中，醋酸铀主要染核酸和蛋白质，柠檬酸铅主要染细胞基质和糖原，增加图像反差。6.CD15。解析：典型R-S细胞通常表达CD30和CD15，且背景淋巴细胞CD3、CD20阳性。CD15是经典型霍奇金淋巴瘤的重要标记。7.冷冻。解析：甘油明胶是一种水溶性封片剂，干燥慢，常用于冷冻切片等不需长期保存或需后续处理的切片。8.游离酸。解析：固定液的总酸度指未结合（游离）的酸的含量，过高会破坏组织。9.充分干燥。解析：切片封片前若未充分干燥，封片剂中的水分或残留溶剂会导致封片浑浊、气泡，长期保存易褪色。10.94-95。解析：PCR变性步骤通常设定为94-95℃，持续30秒左右，使双链DNA解旋为单链。五、名词解释1.抗原修复：指由于甲醛固定等过程导致组织蛋白交联，掩盖了抗原决定簇，通过加热（热修复）或酶消化（酶修复）等手段，重新暴露抗原，以便抗体结合的过程。2.脱钙：指去除骨组织或钙化病灶中钙盐的过程。由于含有钙盐的组织坚硬，无法进行切片（易切片刀），需使用酸性脱钙液或螯合剂（如EDTA）处理，使组织变软。3.假阴性：指在免疫组化或特殊染色中，本应出现阳性结果的样本（如肿瘤细胞表达该抗原），却显示为阴性。通常由固定不当、抗原丢失、修复不足或抗体失效等原因引起。4.术中冷冻切片诊断：指在手术过程中，为了确定病变的性质（如良性或恶性）、切缘是否干净等，将新鲜组织制成冷冻切片，在30分钟内进行快速病理诊断的技术。5.液基细胞学技术(LBC)：一种宫颈癌细胞学检查技术。将采集的细胞放入保存液中，通过系统化处理（如离心、过滤），去除血液、粘液等杂质，制成均匀的薄层细胞涂片，提高检出率和诊断准确性。六、简答题1.简述常规石蜡切片制作的基本流程。答：(1)取材与固定：切除病变组织，立即投入10%中性福尔马林固定，固定时间一般为24-48小时。(2)脱水：利用梯度酒精（如75%→85%→95%→100%）逐级脱去组织内部水分。(3)透明：使用二甲苯等透明剂置换组织中的酒精，使组织透明，利于石蜡浸入。(4)浸蜡：将组织放入熔化的石蜡中，在温箱内进行，使石蜡渗入组织内部，取代透明剂。(5)包埋：将浸蜡后的组织放入包埋框，倒入石蜡，迅速冷却，形成坚实的蜡块。(6)切片：使用切片机将蜡块切成3-5μm厚的薄片，展片后贴附在载玻片上，烘干。(7)染色：常规进行苏木精-伊红（HE）染色。(8)封片：经脱水透明后，滴加中性树胶，加盖玻片封固。2.简述免疫组化染色（EnVision法）的主要步骤。答：(1)石蜡切片脱蜡至水：烤片、二甲苯脱蜡、梯度酒精水化。(2)抗原修复：采用高压热修复或微波修复等方法，暴露抗原决定簇。(3)阻断内源性过氧化物酶：滴加3%，孵育，消除内源性酶干扰。(4)滴加一抗：滴加特异性第一抗体，孵育（通常37℃或室温），PBS冲洗。(5)滴加EnVision二抗：滴加含有HRP酶标记的多聚物抗抗体，孵育，PBS冲洗。(6)显色：滴加DAB显色液，显微镜下控制显色时间。(7)复染：苏木精复染细胞核，盐酸酒精分化，返蓝。(8)脱水透明封片：梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片。3.简述HE染色中细胞核着色过浅（发灰）的可能原因及解决方法。答：原因：(1)苏木精染液陈旧，氧化过度或失效。(2)分化液（盐酸酒精）作用时间过长，将细胞核颜色过度分化。(3)胞浆蓝化（返蓝）不足，细胞核仍处于酸性红色状态。(4)固定时间过长或固定液酸度过高，导致核质结合力下降。解决方法：(1)更换新鲜苏木精染液，或加入适量氧化剂。(2)严格控制分化时间，或在流水冲洗后立即检查分化程度。(3)延长在弱碱性水（如氨水或Scott自来水）中的返蓝时间。(4)改进固定条件，使用中性缓冲福尔马林。4.简述病理技术工作中生物安全防护的基本要求。答：(1)个人防护：必须穿戴工作服、手套、口罩、帽子，必要时佩戴护目镜和防护面罩。(2)环境通风：取材室、技术室应保持良好通风，配备排毒柜，特别是处理福尔马林、二甲苯等挥发性毒物时。(3)化学品管理：危险化学品（如浓酸、DAB、二甲苯）需专人管理，分类存放，标签清晰。(4)废弃物处理：感染性废弃物（如组织块、取材台废液）按医疗废物分类处理，严禁随意丢弃；化学废液需专门回收。(5)锐器处理：刀片、针头等锐器使用后立即放入利器盒，防止刺伤。(6)暴露应急处理：发生标本喷溅或锐器伤时，立即启动应急处理流程（冲洗、消毒、报告）。七、综合分析与应用题1.某病理技术员在进行一批乳腺浸润性导管癌的免疫组化染色（检测ER、PR、HER2）时，发现阳性对照组织（已知阳性）的细胞核未着色，而阴性对照组织背景干净。请分析可能的原因，并制定排查方案。分析与排查：现象分析：阳性对照（已知阳性）未着色，说明实验系统未能检测到抗原，属于系统性假阴性。阴性对照背景干净，排除了非特异性吸附和显色底物自发显色的问题。可能原因及排查方案：1.一抗漏加或失效：排查：检查加样记录是否漏加；检查一抗是否过期、反复冻融或未按比例稀释。排查：检查加样记录是否漏加；检查一抗是否过期、反复冻融或未按比例稀释。措施：重新滴加有效的一抗进行染色。措施：重新滴加有效的一抗进行染色。2.抗原修复不足：排查：检查修复液pH值是否正确，修复温度和时间是否达标（如高压锅是否达到压力）。排查：检查修复液pH值是否正确，修复温度和时间是否达标（如高压锅是否达到压力）。措施：重新进行抗原修复，适当延长修复时间。措施：重新进行抗原修复，适当延长修复时间。3.二抗/检测系统失效：排查：检查EnVision聚合物试剂是否过期，是否漏加。排查：检查EnVision聚合物试剂是否过期，是否漏加。措施：更换新的检测系统试剂。措施：更换新的检测系统试剂。4.显色系统失效：排查：检查DAB底物是否配制时间过长失效，或未加DAB。排查：检查DAB底物是否配制时间过长失效，或未加DAB。措施：现配现用新鲜DAB显色液。措施：现配现用新鲜DAB显色液。5.切片过度分化或脱片：排查：显微镜下观察组织结构是否完整，是否存在组织丢失。排查：显微镜下观察组织结构是否完整，是否存在组织丢失。措施：改进粘片剂（如使用多聚赖氨酸），避免冲洗过于剧烈。措施：改进粘片剂（如使用多聚赖氨酸），避免冲洗过于剧烈。2.现有一例骨肿瘤穿刺标本，组织块较小且含骨组织。请设计一套完整的病理技术处理方案，从固定到最终染色（包括特殊处理），以确保获得高质量的HE切片用于诊断。处理方案：1.固定：将穿刺标本立即投入10%中性缓冲福尔马林中，固定12-24小时。因含骨，固定时间可稍长以确保充分。2.脱钙：这是关键步骤。因标本较小且珍贵，推荐使用EDTA脱钙液（pH7.4），置于脱钙机或温箱中，每日更换脱钙液。EDTA脱钙温和，对细胞核和抗原破坏小。监测：每日进行针刺法或化学法监测，直至骨质变软无阻力。监测：每日进行针刺法或化学法监测，直至骨质变软无阻力。3.水洗：脱钙结束后，流水充分冲洗，去除EDTA或酸性残留。4.脱水、透明、浸蜡：因标本小，脱水时间应比常规大标本缩短，避免硬化。如：80%乙醇30分钟→95%乙醇30分钟→100%乙醇（I、II）各30分钟→二甲苯（I、II）各15-20分钟→浸蜡（I、II）各30-40分钟。因标本小，脱水时间应比常规大标本缩短，避免硬化。如：80%乙醇30分钟→95%乙醇30分钟→100%乙醇（I、II）各30分钟→二甲苯（I、II）各15-20分钟→浸蜡（I、II）各30-40分钟。5.包埋：使用伊红等染料对组织进行标记，包埋时注意组织的包埋面，确保切片面能切到肿瘤核心。6.切片：切片厚度设为3-4μm。因骨基质可能残留，需选用锋利的新刀片，慢切。7.展片与烤片：温水