合成生物学菌种培育技师考试试卷及答案

合成生物学菌种培育技师考试试卷及答案合成生物学菌种培育技师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.甘油管保藏菌种时，甘油终浓度一般为______%。2.PCR反应中耐高温的DNA聚合酶是______酶。3.培养基湿热灭菌的温度是______℃，时间30min。4.制备大肠杆菌感受态细胞常用试剂是______溶液。5.合成生物学中启动基因转录的元件是______。6.菌种活化通常接种到______培养基中。7.质粒提取中裂解细胞的试剂是______（含SDS和NaOH）。8.氨苄青霉素抗性基因编码的酶是______。9.厌氧培养常用装置是______（或厌氧培养箱）。10.CRISPR/Cas9中引导Cas切割DNA的是______。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.大肠杆菌感受态细胞制备常用方法是？A.电穿孔法B.氯化钙法C.脂质体转染法D.病毒转染法2.培养基湿热灭菌条件是？A.100℃/1hB.121℃/30minC.160℃/2hD.180℃/1h3.质粒酶切后连接用的酶是？A.Taq酶B.限制酶C.T4DNA连接酶D.逆转录酶4.甘油管保藏中菌种与甘油体积比是？A.1:1B.2:1C.3:1D.4:15.组成型启动子的特点是？A.仅诱导物存在时转录B.持续转录C.温度调控D.光照调控6.厌氧培养氧化还原指示剂是？A.酚红B.亚甲基蓝C.溴甲酚紫D.刚果红7.PCR退火温度依据是？A.引物长度B.模板浓度C.dNTP浓度D.Mg²⁺浓度8.菌种纯化常用方法是？A.涂布分离法B.液体培养法C.离心法D.过滤法9.抗生素筛选原理是？A.抗性基因产物分解抗生素B.阻止抗生素进入细胞C.与抗生素结合D.修复抗生素损伤10.Cas9蛋白的功能是？A.识别靶DNAB.切割靶DNAC.合成sgRNAD.修复DNA三、多项选择题（共10题，每题2分）1.菌种保藏方法包括？A.甘油管法B.冷冻干燥法C.斜面保藏法D.液体石蜡法E.PCR扩增法2.培养基灭菌方式有？A.湿热灭菌B.干热灭菌C.过滤灭菌D.紫外线灭菌E.化学灭菌3.影响感受态转化效率的因素有？A.细胞生长状态B.CaCl₂浓度C.转化温度D.质粒浓度E.培养时间4.合成生物学常用载体有？A.质粒载体B.噬菌体载体C.病毒载体D.人工染色体E.核糖体5.菌种纯化方法包括？A.涂布平板法B.划线分离法C.稀释涂布法D.液体培养法E.离心法6.PCR基本组分有？A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.Mg²⁺7.常用基因编辑工具是？A.CRISPR/Cas9B.TALENC.ZFND.限制酶E.连接酶8.培养基按用途分？A.基础培养基B.富集培养基C.选择培养基D.鉴别培养基E.合成培养基9.厌氧培养条件有？A.排除氧气B.低氧化还原电位C.添加还原剂D.高温E.高压10.质粒提取步骤包括？A.细胞裂解B.去除蛋白C.沉淀DNAD.洗涤质粒E.扩增质粒四、判断题（共10题，每题2分）1.湿热灭菌穿透力比干热强，效果更好。（）2.甘油管保藏菌种需立即放入-80℃冰箱。（）3.PCR延伸温度为72℃。（）4.感受态细胞可反复冻融。（）5.合成生物学标准化元件便于组装。（）6.培养基灭菌后需冷却至50℃以下加抗生素。（）7.厌氧培养需完全密封。（）8.菌种活化直接接种固体培养基。（）9.酚氯仿用于沉淀蛋白质、分离相。（）10.CRISPR/Cas9仅能编辑真核基因。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述菌种活化步骤。2.简述质粒提取基本原理。3.简述PCR反应过程。4.简述厌氧菌种培养注意事项。六、讨论题（共2题，每题5分）1.如何解决菌种保藏中活力下降问题？2.如何提高合成生物学菌种基因编辑效率？---答案部分一、填空题答案1.302.Taq（DNA聚合酶）3.1214.氯化钙（CaCl₂）5.启动子6.液体（LB液体）7.碱裂解液8.β-内酰胺酶9.厌氧袋10.sgRNA（单导向RNA）二、单项选择题答案1.B2.B3.C4.A5.B6.B7.A8.A9.A10.B三、多项选择题答案1.ABCD2.ABC3.ABCDE4.ABCD5.ABC6.ABCDE7.ABC8.ABCD9.ABC10.ABCD四、判断题答案1.√2.√3.√4.×5.√6.√7.√8.×9.√10.×五、简答题答案1.菌种活化步骤：①准备灭菌冷却的液体培养基（如LB）；②快速融化冻存菌液（避免反复冻融）；③取100μL菌液接种到培养基；④37℃摇床（180-220rpm）培养8-12h；⑤观察OD600（0.6-0.8为成功）；⑥需固体活化则涂布平板挑单菌落。2.质粒提取原理：①碱裂解（SDS破膜、NaOH使DNA变性）；②中和沉淀（醋酸钾使基因组DNA/蛋白沉淀，质粒复性）；③离心取上清；④酚氯仿抽提除蛋白；⑤乙醇沉淀质粒；⑥70%乙醇洗涤后用TE溶解。3.PCR过程：①变性（94-95℃，30s，双链解旋）；②退火（50-65℃，30s，引物结合模板）；③延伸（72℃，1min/kb，合成新链）；④循环25-35次；⑤终延伸（72℃，5-10min）。4.厌氧培养注意事项：①用厌氧袋/箱排除氧气，加氧气吸收剂；②添加还原剂（半胱氨酸），亚甲基蓝作指示剂（无氧无色）；③培养基煮沸除氧后灭菌；④厌氧操作台接种；⑤密封培养，避免开盖；⑥定期检测厌氧状态。六、讨论题答案1.解决活力下降方法：①选冷冻干燥/甘油管保藏，避免反复冻融；②控制-80℃低温，冷冻干燥品真空密封；③加保护剂（甘油、海藻糖），程序降温；④严格无菌，定期检测纯度；⑤每6-12个月活化后重新保藏；⑥活化用富集培养基。2.提高编辑效率