临床核酸提取纯化技师考试试卷及答案

临床核酸提取纯化技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.核酸提取中常用的螯合剂是______2.酚-氯仿抽提法中，氯仿的主要作用是______3.硅胶膜法提取核酸基于核酸与硅胶膜在______条件下结合4.提取RNA时需避免______酶污染5.微量核酸浓度检测常用______仪6.乙醇沉淀核酸的作用是______7.磁珠法提取核酸利用核酸与磁珠表面的______作用结合8.提取DNA时，蛋白酶K的作用是______9.血清/血浆提取核酸时需避免______10.核酸提取后需检测的两个核心指标是______和______二、单项选择题（每题2分，共20分）1.可抑制RNase活性的试剂是？A.EDTAB.蛋白酶KC.DEPCD.氯仿2.硅胶膜法洗涤步骤常用的试剂是？A.70%乙醇B.无水乙醇C.异丙醇D.酚3.新鲜组织提取RNA的首选处理试剂是？A.生理盐水B.TRIzolC.70%乙醇D.蛋白酶K4.DNA纯度较好的A260/A280比值范围是？A.1.6-1.8B.1.8-2.0C.2.0-2.2D.1.4-1.65.磁珠法提取核酸不包括的步骤是？A.结合B.洗涤C.洗脱D.酚抽提6.需先裂解细胞才能提取核酸的样本是？A.全血B.血清C.血浆D.纯化核酸7.去除DNA中RNA的常用酶是？A.RNaseAB.DNaseIC.蛋白酶KD.逆转录酶8.临床自动化核酸提取仪主要基于哪种原理？A.磁珠法B.酚抽提法C.硅胶膜法D.盐析法9.乙醇沉淀核酸时，无水乙醇与样本的体积比通常是？A.1:1B.2:1C.3:1D.4:110.核酸提取中离心的目的不包括？A.分离相B.沉淀核酸C.去除杂质D.扩增核酸三、多项选择题（每题2分，共20分）1.核酸裂解液的常见成分包括？A.去污剂（SDS）B.蛋白酶KC.EDTAD.酚2.提取RNA的注意事项有？A.防RNase污染B.样本低温保存C.DEPC处理试剂D.加RNase抑制剂3.硅胶膜法的优点是？A.操作简便B.可自动化C.纯度高D.耗时短4.可用于核酸提取的样本包括？A.全血B.组织C.痰液D.尿液5.A260/A230比值异常提示的杂质是？A.酚B.胍盐C.蛋白质D.多糖6.磁珠法适用场景是？A.微量样本B.自动化提取C.高纯度需求D.快速提取7.酚-氯仿抽提的水相含有的成分是？A.DNAB.RNAC.蛋白质D.多糖8.蛋白酶K的作用是？A.降解核蛋白B.破坏细胞膜C.灭活核酸酶D.去除RNA9.核酸长期保存的条件是？A.-20℃B.-80℃C.4℃D.室温10.核酸沉淀常用试剂是？A.无水乙醇B.异丙醇C.醋酸钠D.氯化钠四、判断题（每题2分，共20分）1.DEPC处理的水可直接溶解RNA（）2.高盐条件下核酸结合硅胶膜（）3.氯仿可去除酚残留（）4.RNaseA会降解DNA（）5.磁珠法无需离心（）6.溶血对血清核酸提取无影响（）7.A260=1对应dsDNA浓度50μg/mL（）8.新鲜组织可室温放置数小时（）9.自动化提取仪仅适用于磁珠法（）10.醋酸钠可提高乙醇沉淀效率（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述临床样本采集后至提取前的保存注意事项2.简述硅胶膜法提取核酸的基本步骤3.简述A260/A280比值异常的常见原因及解决方法4.简述提取RNA防RNase污染的关键措施六、讨论题（每题5分，共10分）1.对比磁珠法与硅胶膜法的适用场景及优缺点2.讨论临床样本（全血、痰液）提取核酸的常见干扰因素及解决方法---答案部分一、填空题1.EDTA2.去除酚残留/促进相分离3.高盐4.RNase5.微量分光光度计（Nanodrop）6.浓缩核酸/去除杂质7.特异性结合（硅羟基）8.降解蛋白质/灭活核酸酶9.溶血10.浓度；纯度二、单项选择题1.C2.A3.B4.B5.D6.A7.A8.A9.B10.D三、多项选择题1.ABC2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABD6.ABCD7.ABD8.AC9.AB10.ABC四、判断题1.√2.√3.√4.×5.×6.×7.√8.×9.×10.√五、简答题答案1.①全血：EDTA抗凝，2-8℃≤24h，-80℃长期保存（防反复冻融）；②血清/血浆：分离后2-8℃≤72h，-80℃长期；③新鲜组织：液氮速冻后-80℃，避免室温；④痰液：液化后2-8℃≤24h；所有样本标注采集信息，RNA样本全程防RNase。2.①裂解：加裂解液破坏细胞；②结合：高盐下核酸吸附硅胶膜；③洗涤：70%乙醇洗去杂质；④干燥：去除残留乙醇；⑤洗脱：低盐液洗脱核酸。3.①<1.8：蛋白质污染→重抽提或加洗涤；②>2.0：RNA/胍盐污染→加RNaseA或换试剂；③<1.6：严重污染→重提取；检测需无气泡、仪器校准。4.①试剂：DEPC处理后灭菌；②耗材：RNase-free或DEPC处理；③操作：超净台、戴手套、换手套；④样本：新鲜样本液氮速冻；⑤加RNase抑制剂（如RNasin）。六、讨论题答案1.磁珠法：优点→自动化、微量样本适用、快速；缺点→成本高、易残留；适用→批量样本、ctDNA等微量样本。硅胶膜法：优点→成本低、纯度高；缺点→手动繁琐、难批量；适用→小批量高纯度样本（如测序）。选择