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文档简介
选修3知识要点
专题1基因工程
1.1DNA重组技术的基本工具
1.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的,因此又叫做
DNA重组技术,这种技术是在生物体外,通过体外DNA重组和
转基因等技术,赋予生物新的遗传特性。
2.基因操作的工具包括基因的〃剪刀〃一一限制性核酸内切酶;
基因的〃针线〃一一DNA连接酶;基因的〃运输工具〃一一运载
体_O
3.限制酣主要来源于原核生物°限制酣的作用特点是能够识别
DNA中某种特定的核昔酸序列,切开两个核昔酸之间的磷
酸二酯键。限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏
性末端和平末端。
4.DNA连接酶的作用是将双链DNA片段连接起来,恢复被限制
酶切开的两个核昔酸之间的磷酸二脂键。根据酶的来源不同,可
以将这些酶分为两类:TQNA连接酶和£co〃DNA连接酶°
5.目前基因工程中经常使用的运载体有质粒、动植物病毒和
入噬菌体的衍生物°
6.质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体之
外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
7.作为基因进入细胞的载体,必须具备的条件是能在宿主细胞中
复制并稳定保存、具有一至多个限制酶切点、具有某些标记基
因、对宿主的生存没有决定性的作用。
1.2基因工程的基本操作程序
1.基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤:目的基因的获取、
基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因
的检测与鉴定。
2.目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具
有调控作用的因子°获取目的基因的途径有从基因文库中获取团、
利用PCR技术扩增获得、直接人工合成。
3.PCR是利用DNA双链复制的原理,将基因的核昔酸序列加以
复制,使其数目呈一指数方式增加。需要的前提是一要有一段已知
目的基因的核苜酸序列,扩增的过程是:目的基因DNA受热变性
后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA
聚合酶的作用下进行延伸,如此重复循环屡次。
4.基因工程的核心是一基因表达载体的构建,其目的是一使日的
基因在受体细胞中稳定存在,并可以遗传给下•代,同时,使目的基
因能够表达和发挥作用。
5.一个基因表达载体的组成有:目的基因、启动子、终
止子和标记基因。
6.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪
法和花粉管通道法。采用最多的方法是农杆菌转化法,通
过农杆菌的转化作用,就可以使目的基因进入植物细胞,并将其
插入到植物细胞中的染色体DNA上,使目的基因的遗传性状
得以稳定维持和表达。
7.基因工程选取原核生物作为受体细胞的原因是由于其具有其他生
物没有的一些特点,如繁殖快、多为单细胞、遗传物质相
对较少等
8.大肠杆菌常用的转化方法是:先用C/+处理细胞,再将载体
DNA分子溶于缓冲液中与此种细胞混合,在一定的温度下促进感受
态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。
9.检测目的基因是否成功插入到转基因生物的染色体上的方法是采
用DNA分子杂交技术,此方法使用的探针是同位素标记的含有
目的基因的DNA片段,与检测目的基因是否转录出mRNA所用的
探针一样。检测目的基因是否翻译成蛋白质,检测方法是从转基
因生物体内提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原一抗体杂交,
若有杂交带出现,说明目的基因已形成蛋白质产品。除了上述的分
子检测外,有时还需要进行个体生物学水平的鉴定,如对抗虫植
物做抗虫的接种实验。
1.3基因工程的应用
1.植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力,以及改
进农作物的品质和利用植物生产药物等方面。
2.抗病转基因植物所采用的基因,使用最多的是病毒外壳蛋白基
因和病毒的复制基因;抗真菌转基因植物中可使用的基因有
几丁质酶基因和抗毒素合成基因。
3.在培育抗逆转基因植物中,使用调节细胞渗透压的基因来提
高农作物的抗盐碱和抗干旱的能力;将鱼的抗冻蛋白基因导入烟
草和番茄,提高它们的耐寒能力;将抗除草剂基因导入作物,使
作物抗除草剂。
4.在利用转基因改进植物的品质方面,我国科学家将富含赖氨酸
的蛋白质编码基因导入玉米,获得的转基因玉米中赖氨酸的含量比
对照提高30%o
5.动物基因工程从诞生那天起,就在动物品种改进、建立生
物反响器、器官移植等很方面显示了广阔的前景。
6.乳腺生物反响器的操作过程为:将药用蛋白基因与乳腺蛋
白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,
导入哺乳动物的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使
其生长发育成转基因动物。
7.为解决器官移植中的免疫排斥反响,科学家正在想方法对猪的器
官进行改造,采用的方法是将器官供体基因组导入某种调节因子,
以抑制抗原决定基因的表达或设法除去抗原决定基因,结合克隆
技术,培育出没有免疫排斥反响的转基因克隆猪器官。
8.基因治疗是把「正常基因导入病人体内使该基因的表达产物
发挥作用,从而到达治疗疾病的目的。其方法可以分为体治基因治
疗和体内基因治疗。
1.4蛋白质工程的崛起
1.蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能
的关系作为基础,通过.基因修饰或基基合成,对现有蛋白质
进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人们生产和生活
的需求。与基因工程合成的蛋白质的主要区别是一基因工程只能合成
自然界已存在的蛋白质,而蛋白质工程可合成一些自然界中原本不存
在的蛋白质°
2.玉米中赖氨酸含量较低,原因是赖氨酸合成过程中两种酶一一天
冬氨酶激酶和二氢毗嚏二竣酶合成酶的活性受细胞内赖氨酸浓度
的影响,当赖氨酸到达一定量时会抑制这两种酶活性。
3.蛋白质工程的基本途径中预期蛋白质功能少设计蛋白质结
构玲推测氨基酸序列玲找出对应的脱氧核甘酸序列。
专题2细胞工程
2.1植物细胞工程
2.1.1植物细胞工程的基本技术
1.植物的花瓣属于高度分化的组织,利用它来培育出新的植株,
首选要经过激素的诱导,使其脱分化成为具有分生能力的薄壁
细胞,进而形成愈伤组织。再经过一定的条件培养,又可以再
分化出根和芽,形成完整的小植株。
2.每个植物都具有全能性的特点,原因是每个细胞中都具有某种
生物的全部遗传信息。
3.在植物的生长发育过程中,细胞并不会表现出全能性,而是分化
成各种组织和器官,原因是细胞中的基因会选择性表达出各种
蛋白质,从而构成植物的不同组织和器官。
4.植物的组织培养就是在」^和人工控制的条件下,将离体
的植物器官、组织、细胞,培养在人工配置的培养基上给予适宜的培
养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。
5.植物组织培养全过程,证明了分化的植物细胞仍具有形成完整
的植物所需要的全部基因。
6.番茄和马铃薯不能进行传统的杂交,原因是它们是两个不同的物
种,因此它们之间想想着天然的生殖隔离,但是,如果采用体
细胞杂交的方法,就能得到"番茄一马铃薯〃杂种植株,这各方法
成功的关键是:
①利用纤维素酶和果胶酶除去细胞壁获得具有活力的原生质体;
②原生质体融合。
成功的标志是一融合后的杂种细胞再生细胞壁。
7.进行原生质体间的融合,必须要借助一定的技术手段进行人工诱
导。人工诱导的方法基本可以分为两大类一一物理法和化学法,物理
法包括离心、振动、电激等:化学法一般使用聚乙二
醇(PEG)作为诱导剂来诱导细胞融合。
8.植物体细胞杂交就是将不同种的植物体细胞,在一定的条件下融
合成杂种细胞,并将其培育成新的植物体的技术。植物体细
胞融合引起的变异属于染色体变异。
9.植物细胞工程常采用的技术手段有植物组织培养技术和植
物体细胞杂交技术等。
2.1.2植物细胞工程的实际应用
1.植物的微型繁殖技术又称快速繁殖技术,其意义是①可以
保持优良品种的遗传性状;②高效快速地实现大量繁殖。
2.植物长期进行营养生殖,病毒会在作物体内逐年积累,结果
导致作物产量降低、品质变差。如果用分生区(茎尖)作为组织
培养的材料,就会培育出无病毒的脱毒苗,用脱毒苗进行快速繁殖,
种植的作物就不会或极少感染病毒。
3.所谓人工种子,就是以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、
顶芽和腋芽等为材料,经过人工薄膜包装得到种子,人工种子在
适宜的条件下同样能够萌发长成幼苗。人工种子由人工种皮、胶
质和胚状体三局部组成,其中的胶质相当于单子叶植物种子的
胚乳或双子叶植物种子的子叶。人工种皮的制备是一生物膜
结构和功能的研究深入到分子水平的表达。
4.通过花药培养获得单倍体,再经过人工诱导使染色体加
倍,即可得到稳定遗传的优良品种。这项技术称为单倍体育种,
其优点是一明显缩短育种年限。该技术所依据的遗传学原理是3
色体变异。
5.在植物的组织培养过程中,由于培养的细胞一直处于不断分生
状态,因此容易受到培养条件和外界压力的影响而产生当变从
这些生产突变的个体中可以筛选出对人们有用的突变体,进而培育成
新品种。
6.植物组织培养技术除了在农业上的应用外,还广泛应用于细胞产
物的工厂化生产等领域,可获得蛋白质、脂肪、糖类、
药物、香料、生物碱等细胞产物。
2.2动物细胞工程
2.2.1动物细胞培养和核移植技术
1.动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞
核移植、动物一胞融合、生产单克隆抗体等,其中动物
细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
2.将从健康的动物体内取出的组织块剪碎,参加胰蛋白酶或胶
原蛋白酶处理一段时间后,组织块就会分散成单个细胞。对动物细
胞进行培养时,要求培养皿或培养瓶内外表光滑、无毒、易于贴附;
当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,
这种现象称为细胞的接触抑制。人们通常将动物组织消化后的初
次培养称为原代培养。
3.贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶处理,然后分瓶继续培
养,让细胞继续增殖,这样的培养称为传代培养。细胞传代至
10代〜50代左右时,增殖会逐渐减慢,以至于完全停止,但少局部
细胞会克服寿命的极限,获得不死性,这些细胞已经发生了突变,正
在朝着等同于癌细胞的方向开展。
4.动物细胞培养的条件包括无菌、无毒的环境,营养,温
度和pH,气体环境。
5.动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉
细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,
这个胚胎最终发育成为动物个体。
6.用于核移植的供体细胞一般都选用传代以内的细胞,因
为这样的细胞能保持正常的二倍体核型。通过细胞核移植方法生产的
克隆动物,并不是对核供体动物100%的复制,因为生物的性状除受
细胞核基因控制以外,还受细胞质基因和外界环境的影响。
7.体细胞核移植技术的应用前景有:促进优良畜群繁育;保
护濒危动物;克隆人的细胞、组织、器官,进行器官移植等。
2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体
1.动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活病
毒、电激等。细胞融合技术的优点是一突破了有性杂交方法的
局限,使远缘杂交成为可能.
2.制备单克隆抗体的技术流程是:用羊的红细胞对小鼠进行注射,
使小鼠产生一免疫反响。然后,把一相应的B淋巴细胞和骨髓
蝮细胞融合,再用特定的选择性培养基进行筛选,在该培养基
上,未融合的亲本细胞和融合的具有同一种核的细胞都会死
亡,只有融合的杂种细胞才能生长。这种杂种细胞的特点是既能
迅速大量繁殖又能产生专一性的抗体。对上述经选择性培养的
杂交瘤细胞,还需进行克隆化培养和抗体检测,经过屡次筛
选,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后,将杂交瘤细
胞在体外条件下做大规模培养,或注射到小鼠的」内增殖,
这样,从细胞培养液或小鼠腹腔中,就可以提取大量的单克
隆抗体了。
3.单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高和可
大量制备。
4.如果把抗癌细胞的单克隆抗体跟放射性同位素、化学药物
或细胞毒素相结合,制成〃生物导弹〃注入体内,借助单克隆抗
体的导向作用,能将药物定向带到癌细胞所在位置,在原位杀死癌细
胞。这样既不损伤正常细胞,又减少了用药剂量。
专题3胚胎工程
3.1体内受精和早期胚胎发育
1.胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微
操作和处理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、
胚胎干细胞培养等技术。
2.哺乳动物精子的发生是在雄性动物的睾丸内完成的。
3.哺乳动物的成熟精子分为头、颈和尾三局部。其中
遍L主要由一个细胞核构成,高尔基体发育成顶体,中心体
演变成尾,线粒体聚集在尾的基部形成鞘膜,细胞内的其他物质
浓缩为球状,叫做原生质滴。
4.哺乳动物卵子的发生是在雌性动物的」^内完成的。卵母细
胞的减数第一次分裂是在雌性动物排卵前后完成的,其结果是产
生一个次级卵母细胞和第一极体,进入输卵管,准备与
精子受精。减数第二次分裂是在精子和卵子结合的过程中完戌的,
次级卵母细胞经分裂产生一个成熟的卵子和第二极体。在卵
黄膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时,说明卵子已经完成
了受精。
5.受精是指精子与卵子结合成合子(受精卵)的过程,
受精是在输卵管内完成的。
6.哺乳动物的受精过程主要包括:精子穿越一放射冠和透明带,
进入卵黄膜,原核形成和配子结合。
7.获能后的精子与卵子相遇时,首先发生顶体反响,使顶体
内的醐释放出来,溶解卵丘细胞之间的物质,形成精子穿越放射冠
的通道。随后精子与透明带接触,再将透明带溶出一条孔道,
精子借自身的运动穿越.透明带,并接触卵黄膜。在精子触及卵黄
膜的瞬间,会产生透明带反响,防止多个精子进入卵内,这种生
理反响称作卵黄膜封闭作用。
8.精子进入卵子后发生的变化,首先是一尾部脱离,并且原有的
核膜破裂:随后,精子形成一个新的核膜;最后形成一个比原
来精子核还要大的核,叫雄原核。与此同时,卵子完成减数笫
二次分裂,排出第二极体后,形成雌原核。
9.胚胎发育的早期有一段时间是在透明带内进行的,这一时期称为
卵裂期。其特点是:细胞分裂方式为有丝分裂,细胞的数量增
加,每个细胞的体积减小,胚胎的总体积不增加。
10.根据胚胎形态的变化,可将早期发育的胚胎为桑根胚、囊
胚、原肠胚三个时期。细胞开始出现分化的时期是囊胚。
11.在原肠胚时期,内细胞团表层的细胞形成外胚层,下方的细
胞形成内胚层C滋养层则发育为胎儿的胎膜和胎盘。由
内胚层包围的囊腔叫原肠腔。
3.2体外受精和早期胚胎培养
1.试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外
条件下成熟和受精,并通过培养发育为早期胚胎后,再经移植
产生后代的技术。
2.对于小型家畜,卵母细胞的采集采用的主要方法是:用促性腺
激素处理,使其排出更多的卵子,然后从输卵管中取出卵子,
直接与获能的精子在体外受精。
3.对于大型家畜,卵母细胞的采集采用的主要方法是:从屠宰场已
经屠宰的母畜的卵巢中采集卵母细胞,也可以借助超声波探测仪、
内窥镜或腹腔镜等工具,直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。
4.收集精子的方法有假阴道法、手握法和电刺激法。
5.通常采用的精子体外获能的方法有培养法和化学诱导法。
3.3胚胎工程的应用及前景
1.胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及
其他方式得到的胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌
性动物体内,使之继续发育成为新个体的技术。其中提供胚胎的个体
称为供体,接受胚胎的个体称为受参。
2.胚胎移植的生理学基础:
①供、受体生殖器官的生理变化是相同的,为供体的胚胎移入
受体提供了相同的生理环境。
②哺乳动物的早期胚胎形成后,在一定时间内不会与母体子宫建立
组织上的联系,而处于游离状态,这就为胚胎的收集提供了可
能。
⑶受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反响,这
为胚胎在受体子宫内的存活提供了可能。
⑷供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织上的联系,
且移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受任何影响。
3.胚胎移植主要包括对供、受体的选择和处理,配种或进行
人工授精,对胚胎的收集、检查、培养或保存,对胚胎进行移植
以及检查等步骤。
4.胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等
份、8等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
5.在进行胚胎分割时,应选择发育良好、形态正常的桑福胚或
囊胚。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将内细胞团均等
分割。
6.胚胎分割的局限性:同卵分割成功的比例很小,难以做到均等
分割。
7.哺乳动物的胚胎干细胞是从『期胚胎或原始性腺中别离
出来的一类细胞。在形杰上,表现为体积小、细胞核大、核
匚明显;在功能上,具有发育的全能性,即可分化为成年动物
体内的任何一种组织细胞。
8.胚胎干细胞可以用于治疗人类的某些顽症;培育出人造组织器
官;揭示细胞分化和细胞凋亡的机理。
专题5生态工程
5.1生态工程的基本原理
1.历史背景:1987年联合国环境与开展委员会在《我们共同的未来》
中提出了〃可持续开展〃的战略思想。其基本内容是经济开展
不仅要满足当代人的需要,还要不危害后代人的开展能力;生态
效益应和社会效益与经济增长协同考虑。在这种形势下,
生态工程得到了迅速的开展。
2.生态工程:就是遵循自然界物质循环的规律,充分发挥资源
的生产潜力,防止环境污染,到达.经济效益与生态效
二的同步开展。其特点是少消耗、多效益、可持续。
3.生态经济:主要是通过一循环经济的原则,使一个系统产生的
污染物,能够成为本系统或另一系统的生产资源,从而实现废
弃物的资源化°其基本手段之一是生态工程。
4.生态工程的基本原理:物质循环再生原理、物种多样性原
理、协调与平衡原理、整体性原理、系统学与工程学原
理等。
5.协调与平衡原理:生物体既能一适应一定的环境,也能影响环
境,所以在生态工程建设中需要处理好生物与环境的协调与平衡
需要考虑环境的承载力。
6.整体性原理:进行生态工程建设时,不但要考虑到自然生态系
业的规律,还要考虑到经济和社会对系统的影响力。
7.系统的结构决定功能原理:考虑系统内部不同组分之间的结构,
通过一改变和优化结构,到达改善系统功能的目的。
8.系统的整体性原理:系统各组分之间只有保持适当的比例关
系,才能顺利完成能量、物质、信息等的转换和流通,
并实现总体功能大于各局部功能之和的效果。
9.沼气工程:沼气工程可以有效地解决农村的燃料、饲料、
肥料〃三料〃问题,实现物质的循环利用和能量的分层分级利用。
5.2生态工程的实例和开展前景
1.农村综合开展型生态工程:
(1)问题:如何在人多地少、资
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