人教版高中生物选择性必修3 第一章 发酵工程 第2节 第2课时 微生物的选择培养和计数【原卷+答案】

第1章第2节第2课时微生物的选择培养和计数

A级必备知识基础练

1.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（）

选项尿素琼脂葡萄糖硝酸盐

A十+++

B----

C+**-

D+■-+

注:表示加入表示不加。

2J2023山东常泽一中高二月考］生物兴趣小组的三名同学吃冰激凌后有两人严重腹泻，他们怀疑冰激

凌中大肠杆菌超标。卫生部门规定1000mL自来水37℃培养48h后大肠杆菌菌落数不能超过3

个,于是他们设计实验对此冰激凌进行检测。下列实验操作中正确的是（）

A.再去小店买一个同样品牌的同种冰激凌,然后配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基（该培养基可用来鉴别

大肠杆菌），灭菌、倒平板

B.取10mL刚融化的冰激凌作为原液进行梯度稀释，稀释倍数为lxl0-1xl05

C.取各个稀释浓度的冰激凌液各0.1mL.用稀释涂布平板法进行接种，每个浓度至少涂布3个平板，共

培养18个平板，在适宜温度下培养48h

D.统计菌落数目，以菌落数代表大肠杆菌数会导致统计结果比实际值偏小

3.土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烧。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某研

究小组进行了相关实验。下列有关叙述错误的是（）

A.选择被原油污染的土壤取样，使用稀释涂布平板法或平板划线法进行分离

B.配制以多环芳燃为唯一碳源的选择培养基进行培养,可提高目的菌的浓度

C.将土壤稀释液彻底灭菌后再接种到培养基上，可以有效防止杂菌的污染

D.在分离纯化菌种后，需借助生物化学的方法对分离的菌种作进一步的鉴定

4.下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是（）

A.该实验需要设置空白对照组，以检验培养基是否受到杂菌污染

B.分解尿素的细菌能产生胭酶，腺酶能分解尿素产生氮气

C.统计尿素分解菌的数目时，以菌落数为30~300的平板进行计数

D.该实验所用培养基应以尿素作唯一氮源

5.下列关于分离高产腺酶菌的实验叙述，正确的是（）

A.分离目的菌株时以能产生胭酶的刀豆种子研磨液作为样品

B.分离菌种所采用的选择培养基需添加尿素和牛肉膏蛋白陈

C.利用稀释涂布平板法纯化菌种时常用菌落数作为统计结果

D.实施本实验时所用平板和试管的数目不多而且耗时也不长

6.野生型伤寒沙门氏菌（his，）可合成组氨酸，某种突变体丧失了这种能力,必须在添加组氨酸的培养基

上才能生长，称为组氨酸营养缺陷型（his）,现用两种接种方法接种his菌株，甲为平板划线法，乙为稀释

涂布平板法。下列有关叙述错误的是（）

A.两种方法所用培养基均为固体培养基

B.甲接种方法可用于对微生物的分离和计数

C.乙接种方法可用于对微生物的分离和计数

D.his菌株接种在含有组氨酸的培养基上能长出菌落

7J2023辽宁实验中学联考］将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃

薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。M培养基可用于真菌a的筛

选,某同学将获得的真菌a利用下图的方式进行稀释，统计甲、乙、丙三个平板中的菌落数分别是

110、140和149。下列分析正确的是（）

-I号1出得@甲

。乙

10mL90mL9mL9mL・鼻、计效

■修乔温无儆米无色水

A.若真菌a为酵母菌，通常采用血细胞计数板对活菌进行计数

B.若在培养真菌a的培养基中添加一定量的青霉素，可抑制细菌的繁殖

C.选取甲、乙、丙三个培养基的目的是排除无关变量对实验的干扰

D.根据三个平板中的菌落数可推算培养液中真菌a的密度为L33X1O7个/mL

8.某种物质X（一种含有C、H、O、N的有机物）难以降解，会对■环境造成污染,只有某些细菌能降解

X。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、

乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X,乙的组分为无机盐、水、X和Y。下列相关叙述错误的

是（

•卡除建单鼻哀

命▼幄分别是仲次・建

G・x的

同前株

九南大甲

A.甲、乙培养基均属于选择培养基，配制前都需要灭菌

B.若要筛选高效降解X的细菌菌株，甲、乙培养基中X是唯一的碳源

C.步骤⑤的筛选过程中，各培养瓶中的X溶液要有一定的浓度梯度

D.步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，某菌株对X的降解量可能下降

9J2023河北保定高二月考］GA3是一种由C、H、。三种元素构成的与赤霉素作用类似的植物生长

调节剂，能促进茎伸长和种子萌发。GA3的广泛施用会导致其在土壤中残留，研究小组从长期施用

GA3农田的土壤中筛选出了能降解GA3的菌株。请据图回答下列问题。

GA碑

«菊株

⑴过程②是将稀释的含有降解GA3的菌株接种到甲瓶培养液中，这样做的目的

是_____________________________

(2)乙培养基中含有的唯一的微源应该是，所以从培养基的功能看，乙培养基属

于。

(3)过程③将菌种接种到乙培养基上通常采用的方法是o接种时需要将涂布

器，目的

是.

(4)图中获得纯培养物的过程⑤称为,

B级能力素养提升练

10.［2023江苏南通高二期末］MIC是指药敏试验中某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度。某研究小

组将含有相同浓度抗生素I的四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的琼脂平板上进行药敏

试验，以了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度，卜.图所示为实验结果。卜列相关叙述正确的是

)

含抗附用物的酰片

舞篇司中的聂带

A.培养基中的琼脂可以为测试菌提供碳源

B.抗生素I的MIC小于抗生素II的MIC

C.抑菌圈中离纸片越近的菌落对抗生素IV的抗性越强

D.抑菌圈中出现菌落的原因可能是抗生素使病原菌产生耐药性基因突变

11J2023广东深圳高二月考］金黄色葡萄球菌是一种耐高盐的食源性致病微生物。哥伦比亚血平板

是含无菌脱纤维羊血等成分的固体培养基，生长在该培养基上的金黄色葡萄球菌菌落能破坏其周围

的红细胞，产生透明的溶血圈。下图为检测某种饮料是否被金黄色葡萄球菌污染的操作流程，据此分

析不正确的是()

5mL午靖〃至

长出京电(^^

・伦比♦哥伦比♦

7.51N1CI

商场培养X

A.7.5%的NaCI肉汤培养基从功能角度划分属于选择培养基

B.振荡培养后培养基变浑浊足耐高盐的微生物数量增多所致

C.若最终长出的菌落周围出现透明的溶血圈，则说明该种饮料被金黄色饰萄球菌污染

D.若取菌种后的接种方法为稀释涂布平板法，则可对待测饮料中的金黄色葡萄球菌计数

12.下图为以苹果皮为材料分离纯化用于果醋制作的菌种的实验流程，已知所用培养基为“米曲汁乙醇

碳酸钙培养基”,组成成分为1000mL米曲汁、10gCaC03、30mL体积分数为95%的乙醉溶液。下

列说法正确的是()

①扩大培养10-510-6[0-7②分离、计数

A.图中器具可用干热灭菌法灭菌，培养基用湿热灭菌法灭菌

B.②中的纯培养物来自苹果皮上的野生型酵母菌

C.分离、计数的培养基需要用平板划线法至少制备3个

D.①扩大培养基中的菌种浓度约为8.1xl()8个/mL

13.黄曲霉毒素足由黄曲霉产生的代谢产物，具有极强的毒性和致癌性。科研人员用黄曲霉毒素

Bl(AFBl)的结构类似物——香豆素(C9H(Q2)筛选出能高效降解AFB1的菌株，实验过程如下图中的

①〜④。已知菌体对有机物的降解途径有胞外分泌物降解和菌体吸附降解两种。对降解菌的培养液

进行离心,发现上清液中AFB1的残留率明显低于菌悬液中的残留率。检测发现上清液中含有蛋白

质K,为验证蛋白质K是降解AFB1的有效成分，进行实验⑤:在A中加入水解蛋白质K的酶、B中

加入等量的蒸储水，充分反应后在两试管中均加入等量的香豆素。下列相关叙述不正确的是()

采①②③

ttf

样t

S

M

号

俳

基

A.1号培养基属于选择培养基，需要提前在121℃下进行湿热灭菌

B.步骤③使用稀释涂布平板法，目的是筛选出能降解黄曲霉毒素B1的单菌落

C.蛋白质K属于降解菌产生的胞外分泌物,可以分解培养液中的蛋白质

D.实验⑤的结果是A试管中杏豆素含量基本不变.B试管中香豆素含量减少

1442023云南曲靖高二月考]利用农作物秸秆通过纤维索分解菌发酵来获取生产酒精的原料，是获取

清洁再生能源的有效途径。研究者从牛的瘤胃中筛选出纤维素分解菌，其筛选过程如下图所示。刚

果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中会出现

以这些菌落为中心的透明圈。据图回答下列问题。

挑出■磨——

月周用不出现透

1M明•的篇篇

周立出现透明

奸0*图依曲缘

分第南样品

前■另塔界基

(1)从牛的瘤胃中筛选纤维素分解菌的原因

是O

(2)培养基的配方中一般都含有等，培养基通常采用灭菌。图中

所示培养基是以为唯一碳源的培养基，这种培养基称为。I号培养基中加入

刚果红的目的是o

(3)11号培养基划线过程中接和针至少灼烧次。

15.(2023河南焦作高二月考］氮素污染物是造成水体污染和富营养化的主要原因之一，水体中氮素的

去除而清洁水体有重要意义。异养硝化细菌能降解硝酸钱产生氨，科研工作者从污水中筛选出异养

硝化细菌ZW2和ZW5菌株,并研究其去氮能力。请I口I答下列问题。

(1)进行ZW2和ZW5菌株初步筛选时，通常采用法或法进行接种。

初步筛选时，样品中含有多种微生物,培养后，一般依据来区分不同

的微生物。

(2)从污水中分离ZW2和ZW5菌株时，培养基中需要加入硝酸钱等营养物质、琼脂和酚红指示剂。

培养后，这两种细菌都能生长并形成菌落，结果如图所示。(填“ZW2”或“ZW5”)菌株的去氮

能力更强，判断依据是o

(3)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为1。6的样品液0.1mL,培养一段时间后,平板上长出的

细菌菌落数分别为35、171、268、178和314。则每毫升样品中的细菌数量为个。

与此方法相比，用血细胞计数板计数法统计得到的细菌数量更o

(4)上图培养基在物理性质上应属于，接种用到的工具是。

第2课时微生物的选择培养和计数

i.c分离土壤中分解尿素的细菌，应在固体培养基中培养.培养基中要有碳源，且尿素作为唯一

的氟源，故不能添加硝酸盐,C项正确。

2.D若只对一个冰激凌进行检测，样品太少，不能确定是某个冰激凌的质量问题还是这个品牌冰

激凌的质量问题，正确的做法是再去小店随机买多个同样品牌的同种冰激凌进行检测,A项错误；

测定细菌的数量，一般选用104、10\106倍的稀释液进行平板培养，应取］OmL刚融化的冰激凌

作为原液进行梯度怖释，稀释倍数为1x1(blxl()6,B项错误;该实验应该设置对照组，取各个神释

浓度的冰激凌液各0.1mL,用稀释涂布平板法进行接种，每个浓度至少涂布3个平板，再取一个平

板接种等量无菌水(作为对照)，共培养19个平板，在适宜温度下培养48h,C项错误;因为当两个或

多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故统计菌落数目时，以菌落数代表大肠杆菌

教会导致统计结果比实际值偏小,D项正确。

3.C由题干信息可知，该实脸的目的是筛选出能高效降解原油的菌株，故应选择被原油污染的土

壤取样，使用稀释涂布平板法或平板划线法进行分离,A项正确;配制以多环芳泾为唯一碳源的选

择培养基进行培养，可提高目的菌的浓度,B项正确;将土壤稀释液彻底灭菌，目的菌也会衩一并杀

死,需要灭菌的是用于稀释的无菌水,C项错误;在分离纯化菌种后，需借助生物化学的方法对分离

的菌种做进一步的鉴定,D项正确。

4.B该实验需要设置空白对照组，以检验培养基是否受到杂菌污染,A项正确;分解尿素的细菌

能产生腺酶，腺酶可催化尿素分解为NH3.B项错误;统计尿素分解菌的数目时，以菌落数为

30〜300的平板进行计数，并至少对3个平板进行重复计数，求其平均值,C项正确;利用以尿素为

唯一戴源的培养基分离尿素分解菌,D项正确。

5.C寻找目的菌株时,要根据其对生存环境的要求，到相应的环境中寻找,分离高产腺酶菌应在

富含尿素的环境中筛选,不能选用能产生腺酶的刀豆种子研磨液,A项错误;分离高产腺酶菌的培

养基中应以尿素为唯一氮源，不能添加牛肉膏蛋白月东,B项错误;稀释涂布平板法是将菌液进行一

系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固仅培养基表面，进行培养,在稀程度足够

高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落，该培

养方法常用菌落数作为统计结果,C项正确;由于本实验需要进行稀释、接种等多个步骤,故需要

的平板和试管的数目多,而且耗时长,D项错误。

6.B甲是平板划线法,乙是稀释涂布平板法，两种方法都是在固体培养基上进行接种的操作,A

项正确;平板划线法可用于对微生物的分离纯化，但不能计虬B项错误;稀释涂布平板法可用于对

微生物的分离和计数,C项正确;野生型伤寒沙门氏菌(his+)可合成组氨酸，某种突变体丧失了这种

能力，必须在添加组氨酸的培养基上才能生长，故his菌株接种在含有组氨酸的培养基上才能长

出菌落,D项正确。

7.B酵母菌相对较大，可采用血细胞计数板进行计数,但该方法统计的是活菌数和死菌数的总

和,A项错误;青霉素可抑制细菌的繁殖，避免细菌对真菌a的干扰,B项正确;选取甲、乙、丙三个

培养基的目的是减小实脸误差,C项错误;根据三个平板中的菌落数可推算培养液中真菌a的密

度为(110+140+149)4-34-().lxlO5=1.33xl()8(个/mL),D项错误。

8.C甲、乙培养基均只含有机物X,属于选择培养基，微生物的培养应保持无菌操作，故配制前

都要灭菌,A项正确;若要筛选高效降解X的细菌菌株，需要甲、乙培养基中的X是唯一提供碳

源的有机物,不能利用物质X的微生物不能在该培养基上生长，从而筛选出能高效降解X的细菌

菌株,B项正确;步歌⑤中自变量是挑取的不同的单菌落，各培养瓶中的X溶液的浓度应该是一致

的，因为X溶液的浓度属于无关变量,需要保持相同,C项错误;步骤⑤的筛选过程中，若培养基中

的X浓度过高，可能会导致菌体失水影响菌体的正常生长,因此某菌株对X的降解量可能会下

降,D项正确。

9.答案（1）富集培养GA3降解菌（2）GA3选择培养基（3）稀释涂布平板法浸在酒精中，然

后放在酒精灯火焰上灼烧,冷却后再使用保证涂布器无菌（4）纯培养

解析（1）将稀释的含有降解GA3的菌株接种到甲瓶培养液中，甲培养瓶能富集培养GA3降解

菌。（2）GA3是一种由C、H、O三种元素构成的植物生长调节剂，选择培养基乙是为了获得

GA3的降解菌,故培养基应以GA3为唯一的碳源，所以乙培养基属于选择培养基。（3）分离微生

物时可采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，图乙培系基中的菌落分布均匀,故过程

③采用的接种方法是稀释涂布平板法。为保证涂布器无菌，在接种前需将涂布器浸在酒精中，然

后放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后再使用。（4）获得含有GA3降解菌的纯培养物的过程称为纯培

养。

10.B培养基中的琼脂是凝固剂，不能为测试菌提供碳源,A项错误;由题图信息可知,抗我素I的

抑菌圈比抗生素II的大,这说明抗生素I的MIC小于抗生素n的MIC,B项正确;在抑菌圉中出

现的菌落均是对该种抗生素具有抗性的菌株，但无法通过题图信息来判断它们之间抗性的强弱，

若要判断它们之间抗性的强弱还需进一步实脸才能确定,C项错误;抗生素对病原菌具有选择作

用,不能诱导病原菌产生耐药性基因突变,D项错误。

11.D金黄色葡萄球菌是一种耐高盐的食源性致病微生物，因此7.5%的NaCl肉汤培养基从功

能角度划分属于选择培养基,A项正确;7.5%的NaCl肉汤培养基振荡培养后，培养基变浑浊是由

耐高盐的微生物数量增多所致,B项正确;金黄色葡葡球菌会破坏菌落周围的红细胞,产生透明的

溶血图，若最终长出的菌落周围出现透明的溶血图,则说明该种饮料被金黄色葡萄球菌污染,C项

正确;因为接种的菌种是经7.5%的NaCl肉汤培养基培恭过的，因此用稀释涂布平板法不能对待

测饮料中的金黄色葡萄球菌计数,D项错误。

12.A干热灭菌法适合用于器具灭菌，培养基可用湿热灭菌法,如高压蒸汽灭菌法,A项正确;图

示过程是以苹果皮为材料分离纯化用于果醋制作的菌种，②中的纯培养物来自苹果皮上的野生

型醋酸菌.B项错误;分离、计数的培养基需要用稀释涂布平板法至少制备3个，平板划线法只能

分离微生物，不能计数,C项错误;根据最后二个培养皿的菌落数为75、80、88,可求出①犷大封

养基中的菌种浓度为（75+80+88）4-34-0.1x107=8.lx109（^/mL）,D项错误。

13.C1号培养基属于选择培养基,筛选出能降解香豆素的菌株，需要提前在121℃下进行湿热

灭菌,A项正确。步骤③使用稀释涂布平板法，目的是筛选出能降解黄曲霉毒素B1（AFB：）的单菌

落,B项正确。上清液中AFB1的残留率明显低于菌悬液中的残留率,上清液中含有蛋白质K,因

此蛋白质K属于降解菌产生的胞外分泌物，其分解的是AFBLC项错误。A试管中加入水解蛋

白质K的酶，因此A试管中蛋白质K被水解，不能分解香豆素，香豆素含量基本不变,B