泽泻联用治疗糖尿病肾病作用机制的网络药理学研究

摘要运用网络药理学方式，科学研究茯苓、泽泻医治糖尿病肾病的重要蛋白质靶点和作用机理。利用中药材系统软件药理学分析平台在线数据库、DigSee、GeneCards、UniProt等查找挑选茯苓、泽泻糖尿病肾病有关活性成分、蛋白质靶点和遗传基因，利用Cytoscape3.8.2软件信息STRING资源网站各自打造了化学物质－靶点网络结构图蛋白质相互影响关键网络结构图，最终利用DAVID和Kobobid从茯苓和泽泻两种中草药材中，挑选糖尿病肾病有关活性化学物质25个，牵涉26个靶点，关键成分为常青藤人参皂苷和谷甾醇，重要意义靶点为NR3C1和NCOA2，关键参加转录因子为花生四烯酸代谢和脂肪组织脂解调整。本研究选用网络药理学方式，发觉茯苓协同泽泻医治糖尿病肾病具备“多成分、多靶点、多形式”的特征，两药共用，利湿功效翻倍，对糖尿病肾病功效提高。关键词：网络药理学；茯苓；泽泻；糖尿病肾病目录TOC\o"1-3"\h\u9586第一章引言 页引言在中国，因为人们的生活方式的改变，糖尿病患病率逐年递增，糖尿病人肾脏功能并发症的发生率也在增加。糖尿病肾病（DN）是糖尿病患者所引起的慢性肾脏病，是最常见的糖尿病患者毛细血管并发症，都是糖尿病人终末期肾病的重要原因之一。其实质是肾小管病损，糖尿病人血糖偏高，身体内糖代谢紊乱，造成毛细血管损害，心血管系统更改，最终产生肾小球硬化。该病临床表现一般为尿白蛋白代谢提升、冠心病、肾小球滤过率下降和心血管疾病，无任何慢性肾脏病。近些年，糖尿病肾病的发病机制科学研究十分广泛，但其具体发病机制尚不清楚。现阶段认为发病机制很有可能与糖脂代谢紊乱、炎症因子和肾脏功能血液微循环阻碍等相关。因而，西医方面治疗中控制病情发展趋势的主要途径是控制高血压、调节血糖，建立良好的生活习惯。与此同时，糖尿病肾病病人欠缺临床症状，没法依据临床表现精确确诊。因而，仍以患者体内炎症指标和肾功能指标为标准进行确诊有没有糖尿病肾病。传统中医理论觉得，糖尿病肾病可归于“肾劳”“浮肿”“肾消”等范围。为了能长期性止渴，肾精损害、水液停滞不前、肌肤四肢溢液、气虚血瘀、瘀血阻滞是止渴病症的顽症。近些年，中医药学治疗糖尿病肾病愈来愈获得重视。DN的病理机制与五脏有关，以肾脏功能为主导。其基本病因为表虚。本虚就是指气阴虚阳虚，通常是肾亏。实证研究为内火、病邪、寒湿、气滞血瘀、毒浊，但气滞血瘀与寒湿最为关键。在病情的不同阶段，有着不同的病因关键。中医学治疗中，依据糖尿病肾病气虚血瘀、肾虚血瘀的特征，大多采用益气活血补肾方治疗。本试验根据梳理总结已知治疗糖尿病肾病的中医药方和文章，发觉茯苓和泽泻是DN治疗药方里的高频率中草药材，张仲景《伤寒论》中记录的该药主要作用是利尿、祛湿、健脾胃，合乎DN的最基本病因特性。茯苓（Schw))为多孔结构菌科伞菌属细菌茯苓的干燥菌核。性温、味辛、淡、深入人心、肺、脾、脾经。《神农本草经》记述：“主胸充盈、忧、惊、心慌气短、心口疼、虚寒满、干咳、口角干燥、小便不畅。”主治：浮肿、痰浊、心慌气短、失眠症。其核心作用为利尿、祛湿、健脾胃与立。泽泻是泽泻菊科植物泽泻的干燥地下茎。寒凉、甘、淡、归肾、膀胱经。《药性论》有“制肾虚自释，治五淋，益膀胱热发电、凉水道”。实际功效为利尿、退肿、清热祛湿、清热去火。与茯苓比照，泽泻利尿能力强，也是有润肺止咳补阴的作用。张仲景《金匮要略》一书中记叙泽泻能够治疗“止渴”。泽泻可双向调节，利尿清热祛湿生津止渴。茯苓和泽泻是古医籍记述利尿、润肺止咳药对。茯苓性温、味辛、滋养健硕、透明，能增强抵抗力、辟邪。腹泻性寒冷，能使水变湿，驱赶热值。善于熄胃经火，有益于膀胱湿热。两药共用，茯苓利尿祛湿预期效果翻番，泽泻利尿还可以将脾下半身从膀胱运输。茯苓与泽泻组合具有利水功效，对水湿证作用翻番，可治疗浮肿、小便不畅等症状顽固性水湿证。网络药理学是系统软件理论依据的一门学科。建立与数据分析平台互联网技术，选择独特节点设计多靶点药物。依据构建化合物与病症靶点关联的网络结构图，可以走势分析药物的有效相关成分和各靶点，科研药物对病症具体作用机理。伴随网络药理学的蓬勃发展，中草药材复杂体制的网络药理学分析渐渐地导致大伙儿的高度重视。中医养生学是一个多组分、多靶点、多形式相互作用的复杂系统。辩证和整体观这两个特点扎根于中医治疗等各个环节。网络药理学与传统实验方案的区别是，以基础学习和药理学基本知识为依托，运用电子信息技术等多学科，结合现代科学技术研究成果，解决“一靶、一药”传统看法，构建多靶点多组分互联网技术，从宏观视角其基本思路的一致性和专业化与中医学基础有关。由于茯苓和泽泻成分复杂，治疗糖尿病肾病牵涉到身体中各种各样流程及转录因子。传统式组分相符合单靶点的基本思路不适合阐述茯苓和泽泻治疗糖尿病肾病的作用机理。本实验结合茯苓、泽泻的主要有关成分中草药材“药对”的“多成分、多靶点、多形式”功能特点，用于药物靶点疾病的治疗，对药物靶点病症糖尿病肾病的大数据可视化网络结构图和不可逆性蛋白靶点进行全面、全方位的讲解，说明其作用机理为综合评价茯苓和泽泻治疗糖尿病肾病的临床应用给予一定的基础理论由来，并进一步科研泽泻和茯苓治疗糖尿病肾病的作用。方法茯苓、泽泻化学成分收集以“茯苓”“泽泻”为关键字利用中药材系统软件药学分析平台，查找茯苓、泽泻二味中药材中所含有的所有成分，创建茯苓－泽泻成分数据库系统。活性化学成分及靶标蛋白的筛选在成分数据库取的成功创建中，以内服微生物利用度与药物相似性指数值2个指标值作为挑选药物活性成分标准，设置内服微生物利用度（OB）≥30%，药物相似性指数值(DL)≥0.18以保持药物的有效成分。内服微生物利用度表明内服药物里的活性官能团或活性成分抵达全身上下循环系统并被人体吸收的度与速度，OB值通常与药物的动物活性分子的药物类似指数值正相关。接着利用TCMSP页面的化学物质靶点鉴别作用，挑选“RelatedTargets”功能键，根据搜索功能对挑选所得到的茯苓和泽泻里的合理活性成分对应的蛋白质靶点开展逐一查找，从而梳理获得中药材合理活性成分及靶点蛋白质。疾病靶点的筛选利用OMIM、DigSee、GeneCards等数据库系统，将关键字设成“DiabeticNephropathy”开展查找，将在各数据库中搜集获得的病症靶点开展合并和去除重复项解决，通过整理后获得与高血压肾病有关基因。靶标蛋白基因名的确定为了能更有助于中后期数据库的解决与分析，试验依靠UniProt、HGNC、PubMed等数据库中所得到的蛋白质靶点，且限制种群为“homosapiens”，让所有蛋白质靶点转化为比较规范化的简单symbol，清除一部分在数据库中找不着相匹配名称的靶点蛋白质后，最后获得药物的高效靶点。韦恩图的构建为了能明确药物功效靶点和高血压肾病表述靶点相互关系，本试验利用Venny2.1.0网址将会得到的茯苓和泽泻中活性将成分相对应的靶点蛋白质与疾病靶点之间的关系投射在一起，最后获得线上venn图。通过对比图的交叉式一部分，获得药物和病症的同样靶点。其实就是泽泻医治高血压肾病的潜在靶点。药物活性成分－交集靶点网络的构建为了能确立茯苓和泽泻中各活性成分、靶点与疾病相互关系，将挑选出的茯苓和泽泻中的活性化学物质与1.5中所得到的茯苓和泽泻医治DN的靶点进行匹配，将会得到的相互关系键入报表，然后将报表导到Cytoscape3.8.2手机中搭建药物活性成分－联系靶点互联网，剖析各化学物质和靶点节点度（degree）值，预测分析茯苓和泽泻中医治高血压肾病的主要化学物质成分主导作用靶点。蛋白质相互作用核心网络（PPICN）图的构建为了能从蛋白水准进一步了解药物靶点和DN靶点相互关系，本试验将1.5中所得到的11个茯苓和泽泻医治DN地把靶点导进蛋白相互影响网址STRING10.5()，并把种群界定为“homosapiens”，建立蛋白相互影响核心网络图谱。再将PPICN网络结构图信息存储为“TSV”文件类型，再将文件导入Cytoscape3.8.2软件进行大数据可视化。核心靶点的基因本体功能富集分析和KEGG通路分析为了能表明茯苓和泽泻中医治高血压肾病的关键所在靶点的生物学功能及其他与身体内各转录因子相互关系，在DAVID在线数据库（/）中输入1.5中所得到的11个茯苓和泽泻医治DN的功效靶点，键入总体目标基因的名字目录并限制种群为“homosapiens”，在相关数据库中开展查找等一系列实际操作，获得GO聚集数据信息，把它导出来，选择具代表性内容开展GO（geneontology）分子生物学全过程富集分析，获得茯苓和泽泻潜在性靶点参加的分子生物学化学反应过程，具有的分子结构功能以及所属的细胞位置，此外利用在线绘图网址－维生信网址（/）绘制出GO作用富集分析气泡图。同时我们利用DAVID网址对遗传基因名先通过变换获得GeneID，再将变换后所得到的GeneID输入到网址KOBAS3.0(/anno_iden.php)，挑选科学研究类型为“EntrezGeneID”，限制种群为“homosapiens”，便能获得KEGG（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes）转录因子聚集结论，后将结论导出来并设置阈值p<0.05，选择排名前列KEGG通道开展作图深入分析，研究茯苓－泽泻医治高血压肾病的潜在靶点参加的分子生物学流程和涉及的身体内转录因子。结果茯苓－泽泻活性化合物和靶标蛋白的筛选根据TCMSP网址查找到泽泻和茯苓二味中药材一共有80个化合物，在其中46个来源于泽泻，34个来源于茯苓。随后以内服溶出度（OB）≥30%和药物类似指数值（DL）≥0.18为筛选条件，得到药品的有效成分。最后共得到25种活性成分，当中10种来源于泽泻。15来源于茯苓。25种挑选活性化合物的相关信息如表2-1所显示。运用TCMSP页面的化合物靶标鉴别作用，挑选“RelatedTargets”功能键分别从25个合理活性成分对应的靶标蛋白名字开展逐一查找，将会得到的靶蛋白根据UniProt、HGNC、PubMed等数据库系统开展规范性和简单化，限制种群为“homosapiens”，清除一部分不能在数据库中寻找相匹配名称的靶标蛋白后，经梳理最后一共获得了39个药品合理靶标。表2-1药物活性成分表药材编号化学成分名称OB(%)DL泽泻MOL000359sitosterol36.910.75MOL000830AlisolB34.470.82MOL000831AlisolBmonoacetate35.580.81MOL000832alisol,b,23-acetate32.520.82MOL00084916β-methoxyalisolBmonoacetate32.430.77MOL000853alisolB36.760.82MOL000854alisolC32.70.82MOL000856alisolCmonoacetate33.060.83MOL0024641-Monolinolein37.180.3MOL000862[(1S,3R)-1-[(2R)-3,3-dimethyloxiran-2-yl]-3-[(5R,8S,9S,10S,11S,14R)-11-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-3-oxo-1,2,5,6,7,9,11,12,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl]butyl]acetate35.580.81茯苓MOL000273(2R)-2-[(3S,5R,10S,13R,14R,16R,17R)-3,16-dihydroxy-4,4,10,13,14-pentamethyl-MOL0002732,3,5,6,12,15,16,17-octahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-6-methylhept-5-enoicacid30.930.81MOL000275trametenolicacid38.710.8MOL0002767,9(11)-dehydropachymicacid35.110.81MOL000279Cerevisterol37.960.77MOL000280(2R)-2-[(3S,5R,10S,13R,14R,16R,17R)-3,16-dihydroxy-4,4,10,13,14-pentamethyl-2,3,5,6,12,15,16,17-octahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-5-isopropyl-hex-5-enoicacid31.070.82MOL000282ergosta-7,22E-dien-3beta-ol43.510.72MOL000283Ergosterolperoxide40.360.81MOL000285(2R)-2-[(5R,10S,13R,14R,16R,17R)-16-hydroxy-3-keto-4,4,10,13,14-pentamethyl-1,2,5,6,12,15,16,17-octahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-5-isopropyl-hex-5-enoicacid38.260.82MOL0002873beta-Hydroxy-24-methylene-8-lanostene-21-oicacid38.70.81MOL000289pachymicacid33.630.81MOL000290PoricoicacidA30.610.76MOL000291PoricoicacidB30.520.75MOL000292poricoicacidC38.150.75MOL000296hederagenin36.910.75MOL000300dehydroeburicoicacid44.170.83糖尿病肾病相关靶点的筛选和在线韦恩图的构建从OMIM、DigSee、GeneCards等数据库中，以“DiabeticNephropathy”为关键字开展查找，将各个数据库系统中检索获得基因通过并入和去除重复项后，一共获得了3312个与糖尿病肾病有关的靶点。并将2-1中所得到的茯苓和泽泻合理有效成分对应的靶点通过去除重复项加工后，从而获得26个药物潜在性功效靶点。把这3312个病症靶点与26个药物潜在性功效靶点一同输入到Venny2.1.0网站上获得线上韦恩图（如下图2-1），通过在线韦恩图得知，中药材泽泻里的药物靶点为NR3C2、NCOA2、PGR、NR3C1、PTGS1。与此同时，这种靶点全包含于茯苓的药物靶点中，都是糖尿病肾病的靶点，这验证了泽泻在临床糖尿病肾病中起着重要作用。除此之外，在中药材茯苓中去掉这5个靶点，还带有6个医治糖尿病肾病的靶点，各是CHRM2、ADH1B、LYZ、PTGS2、RXRA、SLC6A2。这11个茯苓－泽泻医治糖尿病肾病的靶点信息内容见表2-2。图2-1茯苓－泽泻作用靶点与DN相关靶点的交集基因韦恩图表2-2化合物与疾病交集靶点名称靶点名称NR3C2Mineralocorticoidreceptor（盐皮质激素受体）NCOA2Nuclearreceptorcoactivator2（细胞核受体共激活因子2)PGRprogesteronereceptor（孕激素受体）NR3C1Glucocorticoidreceptor（糖皮质激素受体）PTGS1Prostaglandin-endoperoxidesynthase1（前列腺素内过氧化物合酶1)CHRM2MuscarinicacetylcholinereceptorM2（毒蕈碱乙酰胆碱受体M2）ADH1BAll-trans-retinoldehydrogenase[NAD(+)]（全反式视黄醇脱氢酶[NAD(+)])LYZLysozymeC（溶菌酶C)PTGS2Prostaglandin-endoperoxidesynthase2（前列腺素内过氧化物合酶2)RXRARetinoicacidreceptorRXR-alpha（视黄酸受体RXR-alpha)SoluteCarrierFamily6(NeurotransmitterTransporter),Member2溶质载体家族6（神经递质转运SLC6A2药物活性成分－交集靶点网络分析将药物有关成分中草药材与症状共通的靶标网上Wayne图谱引入Cytoscape3.8.2手机里，打造出了包括13个活性化合物节点和11个交叉式靶标节点、24条边的24个节点的有关成分－交叉式靶标网络结构图在这儿网络结构图中，左边红色的节点说明茯苓和地骨皮中的活性化合物，左边的浅黄色、绿色和蓝色节点说明茯苓和地骨皮治疗高血压肾病的不可逆性靶标。一个节点的密度值说明网络里输送到该节点的许多节点数量，2个节点之间相互作用边缘说明。在药物活性成分交叉式靶标的网络结构图中，节点规格随度值变化。摄氏度值越大，节点就越大。此外，右侧相交点目标色彩随度系数的增加偏暗。该图还描绘了中草药材多组分与小分子抑制剂的相互作用体系。各化合物平均值与0.8个靶相互作用，各靶平均值与1.2个化合物相互作用。依据网络结构图可以获知，地骨皮茯苓存在一种化合物用于好多个靶标相互作用的现象和不同化合物用于同一个靶标的现象。选择具有更皮内瘤系数节点展开剖析。节点度值越多，代表了节点连接的化合物或靶标越多，在网络里起到重要作用，很可能是不可缺少的化合物或靶标。在成分等级划分上，中药茯苓中MOL000296－青藤碱的水准较大，与9个靶标相互作用，次之地骨皮中MOL000359－谷甾醇与3个靶标相互作用。其他11个交叉式靶标按水平排列，较大的为NR3C2、NR3C1和PGR，先后与5、4、4个化合物相互作用。图2-2药物活性成分－交集靶点网络图茯苓－泽泻与糖尿病肾病蛋白质相互作用的构建与分析将2.3中所得到的11个茯苓和泽泻治疗糖尿病肾病的功效靶点带到蛋白质配对t检验网址STRING10.5绘制图表以获得PPICN（图2-3）。该图一共包括11个结点和12条边。连接点代表有关蛋白，每一条边代表蛋白间的相互影响，线越来越粗，连接点之间的关联值越大，均值连接点度数值2.18，部分聚类算法指数为0.652。与此同时储存PPICN网络结构图TSV格式，导进Cytoscape3.8.2软件进行大数据可视化，剖析数据显示NR3C1、NCOA2、PGR这三个靶点度值排名前列，则有可能为茯苓－泽泻治疗糖尿病肾病的关键所在靶点。图2-3茯苓－泽泻与糖尿病肾病蛋白质相关作用核心网络图（PPICN）核心靶点的基因本体功能富集分析和KEGG通路分析糖尿病肾病医治中药材11个关键靶点进到DAVID网站GO作用富集分析与最后GO条目一共有28个，主要包含与生物全过程（BiologicalProcess，BP）有关条目有13个，5个细胞构成（CellularComponent，CC）及其10个与功能分子结构（MolecularFunction，MF）有关条目。生物全过程（BP）富集数据显示，联系靶点主要包括男性前列腺生物生成、RNA聚合酶Ⅱ启动子基因表达的反管控、体细胞脂质代谢等生物全过程。与此同时，依据细胞构成（CC）的富集结论得知，联系遗传基因主要分布在于细胞质、细胞器膜、核原生质等体细胞位置。作用分子结构（MF）富集数据显示，联系遗传基因主要是对激素类药物蛋白激酶、编码序列非特异DNA融合、过氧化酶活力、血红蛋白融合等过程造成影响，进而充分发挥疗效。运用在线绘图网址－维生信网址（/）将这三种条目分开开展作图，取得图2-4、图2-5和图2-6，在其中纵轴为GO条目名字，横坐标轴表明富集结论，图片中的气泡色调代表是指富集结论pvalue值，而气泡尺寸表明遗传基因Count值，在气泡图中，气泡越多，色调越重也说明了富集更为明显。图24GO功能富集分析-BP分析气泡图图2-5GO功能富集分析-CC分析气泡图图2-6GO功能富集分析-MF分析气泡图与此同时依次各自运用DAVID网站或KOBAS网址一同开展KEGG通路富集剖析，一共获得了52条KEGG通路，以p<0.05作为条件进行分类，最后获得了44条满足条件的数据信号通路，另选择p值比较小并且与糖尿病肾病有关的排名前十的数据信号通路开展作图，如图2.7。KEGG富集数据显示茯苓-泽泻医治糖尿病肾病的11个潜在性靶点关键富集在脂肪组织脂分解的调整、花生四烯酸新陈代谢、甲状腺素数据信号通路、有机化学致癌物质高信号通路，这就说明茯苓-泽泻能通过多靶点多通路协同效应，进而发挥其医治糖尿病肾病的功效。图2-7泽泻-茯苓治疗DN核心靶点KEGG富集分析的10条通路图讨论由于中国经济发展迅猛发展和百姓生活质量的提高，人们的生活方式正在发生很大的变化，热量摄入的增加和精力活动的减少造成肥胖症数量和“三高”群体不断增长，此外，我国社会老龄化水平也不断加深，糖尿病患者生病总数还在迅速上升，而糖尿病人治疗期间最常见的一个并发症是糖尿病肾病（DN），该不良反应的发病率也不断攀升。糖尿病肾病主要是因为血糖偏高造成肾脏功能心血管系统及身体内的葡萄糖代谢出现异常，从而造成肾功能障碍，从而形成肾小球硬化。临床医学具体表现为尿蛋白、浮肿、高血压和肾功能异常,因而现阶段临床医学检验常用生物标志物都是白尿蛋白高和肾小球滤过率（GFR）。此外现阶段西医方面治疗过程中并没有对该病的发病机理及发病原因有清晰论述，一般称之为多种因素功效得到的结果，主要与肾脏功能内心血管系统出现异常和其他细胞生长因子和免疫细胞的功效相关。因而，在现在的西医方面治疗方式中并没有动画特效对策。古医籍中并没有出现糖尿病肾病这一病类，但此病与《圣济总录》《证治要诀》等古书中常记录的消渴症长期难愈所引起的浮肿、肾消等不适相对高度类似。比如“消病久，肾精负伤，肾主水，肾气不足衰，汽化紊乱，开阖不好，水湿凝结身体内而现水肿”，源自《圣济总录》。此外，《证治要诀》里也有那样相近史料记载：“三消久而小解不臭，工作甜气，在溺中滚涌，又浮于溺面似猪脂，此精禁不住”。以上医书古籍都确切地强调，消渴症如果长期无法得到痊愈，会有浮肿、肾消等症状及体征，然而这与糖尿病肾病的现代科学了解是一致的。根据汇总各中医针对DN病因的探索，目前，对于糖尿病肾病关键发病机理广泛赞同的观点是“本虚标实”。本虚以气虚血瘀、脾肾亏虚为主导，标其实以气滞血瘀、湿浊、痰瘀为主导，本虚与标实彼此掺杂，一同发病。茯苓关键产于云南，湖北，安徽等地区，具体作用为芳香化湿、健脾胃调变。茯苓归属于药食两用中药材，是临床医学应用比较多的传统式中药材之一，可以治疗高血压性心脏病、慢性肾衰竭、肾病综合征等病症。泽泻关键产于福建、四川和江西等地区，其核心作用为利水消肿、清热利湿泄热。查看当代药理学研究参考文献之后发现，茯苓中主要所含的成分为三萜类化合物、油酸类化合物和核苷酸化合物，研究发现中药材茯苓因其带有构造类似醛固酮抗剂的化成分学，能够抑制机体内的血胺-血管紧张素2系统软件，抑制水与钠通道，调整水净化设备，推动人体保钠排钾，进而充分发挥有利排尿的药用价值，除此之外茯苓还具备抑止发炎、提高免疫、抗癌等其他药用价值。中药材泽泻中主要所含的成分是三萜及倍半萜类化合物、甾醇和有效成分等。当代研究发现，泽泻经水获取后获得物质可以促进胰岛细胞代谢并释放出来甘精胰岛素，溶解血液中葡萄糖水，减少血糖含量，还会对胰腺机构造成缓冲作用，使之免遭损害。除此之外，泽泻还具有抗慢性肾炎活性、抗癌、护肝等其他药用价值。从二种中药材现代化的药理学研究中，我们可以获知二种中药材对糖尿病肾病都有一定的疗效，如茯苓的利尿的作用可调人体水净化设备，消水肿；泽泻的降糖作用可以调整人体的糖酵解。但在中医基础理论中，泽泻有泻无补，而茯苓亦有泻有补，两药并且用，利湿功效提高，水路畅行无阻，则肿消。本实验依照网络药理学探索的实验流程，在中药材系统软件药学分析平台中对茯苓、泽泻这二味中药材开展查找，并挑选中药材里的合理活性成分，最后获得25个活性成分。随后根据中药材系统软件药学分析平台各自查找茯苓和泽泻里的合理活性成分对应的靶点蛋白质，同时利用在线数据库，如UniProt、HGNC和PubMed等，将所获得的靶点蛋白质开展规范性处理简单解决，获得茯苓化合物蛋白质靶点30个，9个泽泻化合物蛋白质靶点，删掉一部分重复项后，如cytochromep450-cam，最后获得26个靶点，展现出了茯苓－泽泻搭配应用具备多靶点功效且联合作用于好几个靶点的特征。除此之外，通过构建茯苓－泽泻搭配的化合物靶点和疾病靶点的在线venn图（如图2.1），发觉化合物靶点和疾病靶点聚在11个遗传基因上（见表2-2）。随后用Cytoscape3.8.2手机软件制作药品相关成分与联系基因的关系网，制作药品相关成分与联系靶点相互影响的网络结构图（如图2.2），根据对网络结构图导出来的数据进行分析得知：NR3C2、NR3C1、PGR、NCOA2和PTGS1这五个靶点均是茯苓－泽泻医治糖尿病肾病的主要靶点。在其中NR3C2表示是盐皮质激素蛋白激酶，是一种配位依赖感转录因子。盐皮质激素是一种由肾上腺球形带自身分泌激素类药物，其核心的生理特点是保存人体肾小管损伤里的水和推动锌的分解代谢，积极与下丘脑垂体代谢、脑垂体释放出来的肾上腺激素协同效应，保持机体内水净化设备和电解质平衡。NR3C2与盐皮质激素融合，通常是醛固酮，可以调整正离子和船运蛋白质的表述，根据推动水与盐在肾脏功能里的潴留从而直接关系血压值。NCOA2意味着细胞质蛋白激酶共激活因素2，该因素以配位依靠的方式与核蛋白激酶进行结合，对核蛋白激酶转录过程的活性开展管控。过氧化物酶体繁殖物激活蛋白激酶γ是人体脂肪分裂过程的关键因子，该因素基因表达活性遭受NCOA2的管控，因而NCOA2保持白色和棕色脂肪体细胞间的稳定均衡，对脂质沉积有着重要的管控功效。PTGS1是前列腺素合成的关键酶，关键表述于胃、肾和血小板计数，其核心的功能是根据生成前列环素来调整细胞正常的生理学活动，保持内环境稳态，与人体所发生的炎症现象全过程密切相关。与此同时，在这个网络结构图轻中度值最大的一个化合物为中药材茯苓里的MOL000296－常青藤人参皂苷元（hederagenin）成分。常青藤人参皂苷元是一种五环三萜类的化合物，各种各样药植中都带有，以其具备水溶较弱和溶出度相对较低的缺陷，故临床上没被大规模运用。研究表明常青藤人参皂苷元可以通过推动胰岛素分泌和释放，减少人体血液中糖含量和胰高血糖素水准，提高肝部和肌肉里的糖原合成，进而发挥其抗糖尿病的功效，从而抗糖尿病肾病。除此之外常青藤人参皂苷元还具备抗焦虑、抗癌、抗感染、抗菌、护肝等一系列药用价值。此外度值排名前列化合物也包括中药材泽泻里的MOL000359－谷甾醇（sitosterol）成分，谷甾醇是一种具有纯天然活性的甾醇，具备抗感染、防癌、抗氧化性等药用价值。科学研究发现该化合物与碳水化合物都是属于甾类化合物，二者分子式类似，因此该化合物能与碳水化合物市场竞争身体内结合位点，控制碳水化合物消化吸收，以达到降血脂功效。与此同时当代研究证明，泽泻的水提物和醇提物可以降低胆固醇含量，具备降血脂的功效。而糖尿病肾病患者体内的脂质代谢紊乱一般则是发病机理之一，且伴随着患者的病情发展趋势，新陈代谢也会更加混乱，肾脏功能时会发生脂类出现异常堆积状况。因而，大家没有理由推论，常青藤人参皂苷块和谷甾醇这俩成分有可能是茯苓和泽泻医治糖尿病肾病的关键所在关键化合物。与此同时本试验运用蛋白质配对t检验网址STRING10.5搭建获得PPICN网络结构图，在Cytoscape3.8.2手机软件中输入PPICN网络结构图数据信息，对于该网络结构图展开分析获得，度值排名前三的靶点分别为NR3C1，NCOA2和PGR，在其中NR3C1是度值最大的一个靶点，为糖皮质激素蛋白激酶。糖皮质激素（glucocorticoid，GC）是肾上腺代谢获得的一类甾体激素，又被称为肾上腺皮质激素。糖皮质激素对机体内的大多数生理活动都是有缓冲作用，如碳水和脂肪合成与新陈代谢，与此同时它还具有抗感染和自身免疫病的药用价值。糖皮质激素蛋白激酶是一种核蛋白激酶，在细胞的增殖、分裂和细胞凋亡全过程起着缓冲作用。糖皮质激素一定要与糖皮质激素蛋白激酶融合，才可以被激活充分发挥，而糖皮质激素蛋白激酶是以细胞中的热休克蛋白中提取的，与此同时两者结合所形成的物质迅速进入细胞质内，融合反应正本，调整中下游基因表达，进而发挥出抗感染和自身免疫病的药用价值。我们将要PPICN网络结构图的分析数据与药品活性成分－联系靶点网络结构图的分析数据进行比对科学研究，从这当中得知，NR3C1和NCOA2这俩靶点为茯苓和泽泻医治糖尿病肾病的关键所在关键靶点。除此之外，GO作用聚集数据显示，茯苓－泽泻合用医治糖尿病肾病的潜在靶点可能和RNA聚合酶Ⅱ启动子基因表达的反管控、细胞氧化祛毒、DNA模板基因表达、体细胞脂质代谢、血压值的调节等生物过程拥有密切的关系，主要分布于细胞质、细胞器膜、核原生质等体细胞位置，与此同时潜在性功效靶点在体内充分发挥疗效，可能就是因为对激素类药物蛋白激酶、编码序列非特异DNA融合、过氧化酶活性、血红蛋白融合等过程形成了危害。与此同时KEGG通道剖析表明，茯苓－泽泻合用医治DN主要包括脂肪组织脂分解的调整、花生四烯酸新陈代谢、有机化学致癌物质等转录因子的调节。花生四烯酸是一种人体必需的碳水化合物。这是生成前列环素最直接的前体物质，同时还是一种关键的构造脂类物质，该有机物具备降低血脂、抗感染、抗脂质氧化等一系列药用价值。花生四烯酸在环氧树脂合酶功效下能形成前列环素F2α，最后转换成丙二醛。而8－表氧－前列环素F2α要在并没有环氧树脂合酶影响下，脂类通过自由基的催化剂产生过氧化反映时代的产物，其前体物质都是花生四烯酸。研究发现糖尿病人身体内存在脂质氧化反应，且病情越久，反应更为明显，因而8－表氧－前列环素F2α可以作为反应糖尿病肾病患者的病情发展趋势的重要因素。脂肪组织脂类分解的过程与人体脂肪在身体里的分布和人体脂质代谢全过程拥有密切的联系，与此同时脂肪组织产生脂肪燃烧能够带来分散的油酸。这种分散的油酸可作为燃料，为周围组织提供动力，与此同时，也可作为信号分子来调整机体内葡萄糖水和胰岛素的含量和活性。因而，脂肪组织脂溶解不但控制了能量的平衡和脂肪分散，并且对人体糖脂代