科研方法导论：研究设计

研究设计一、一般原则1、科学性理论学习、技能掌握、文献调研、研究积累→提出假说，设计新的实验或试验研究过程不断发现新的现象→合理的推论→不断修正和调整研究计划或内容对自己提出的观点和方法，有充分的科学性论证。对各种技术和方法的原理和适用范围，有一个明确的认识，准确有效地应用。2．规范性严格按照质量管理规范→结果客观、真实、可靠、可信→与国际先进水平相适应基础研究参照国家《药品非临床研究质量管理规定》（GLP）临床研究参照国家《药品临床试验管理规范》（GCP）

（1）研究人员和条件由相应资质的人员进行，学习和掌握相应的专业知识、质量管理规范和标准操作规程（SOP）。具备物质条件，并建立质量管理体系。

（2）研究前准备制订研究方案和SOP。对仪器、药品、试剂、材料、动物要有充分的准备，并校正、检测、登记、保存、标记。必要时，预试验。（3）研究实施严格按照研究方案和SOP进行研究。中途改变研究计划，经慎重考虑。

（4）研究记录按规定格式完整地观察记录。保证原始记录的真实可信，有利于作进一步分析。

（5）研究资料处理和管理根据原始记录数据进行结果的总结和统计学处理，并根据需要写出研究报告或论文。3．伦理性对于人的研究，遵循国际通行的《赫尔辛基宣言》的原则，充分尊重权益和尊严。实验动物同样需要考虑伦理问题。（尽少使用、麻醉）4．统计学考虑研究设计时就应充分考虑统计学原则，即对照、随机、重复的原则。诸如分组、例数、采用指标等。二、研究设计的三项要素

（一）处理因素1．处理因素和处理水平

（1）单因素单水平临床研究，限于病人条件多变等。相同的手术方法；单一剂量和统一的疗程。

（2）单因素多水平一种药物的多种剂量，或不同处理时间（疗程），了解有效或安全的剂量范围，或产生疗效及不良反应需要的时间。

（3）多因素单水平比较多个处理因素在相同的水平上的差异，但是采用的水平证明有效。

（4）多因素多水平例如，比较不同药物在不同剂量或疗程时的效应特点。2．处理因素的标准化对处理的强度、时间、频率、持续时间、施加方法等，作出统一的规定。建立和实施标准操作规程（SOP)。在初次研究时，如何确定处理量和处理时间？①借鉴本实验室以往相同或类似研究的经验，以及从文献调研中寻找相同或类似的研究。②做相应的预试验来摸索。将处理量或处理时间的间隔取得大一些。（二）试验对象1．试验对象的选择（1）人临床研究的对象。正常人可参加生理状况的研究，或参加药物安全性试验或药物动力学试验。病人是研究各种病理变化或治疗效果的对象。

（2）动物主要依据是动物对处理因素的敏感性、反应的稳定性以及与人类疾病的相似性。其次，考虑动物饲养和繁殖的难易、价格、生长周期等因素，尽可能采用大鼠、小鼠等小动物。

（3）细胞细胞有原代细胞和传代细胞两大类，原代细胞的反应与人或动物反应特性相似；传代细胞的反应较稳定。不同细胞株的特点各有不同。2．试验对象的控制

（1）试验对象的一致性

试验动物的种系、性别、年龄、体重应当保持一致，保证反应稳定。对受试者的年龄、性别、病情严重程度、病程长短、有无合并症、有无其它治疗措施等条件尽可能保持一致，必要时病人分组实行分层随机。

（2）试验对象影响因素的控制如季节、气候、气温、湿度、摄食、饮水、生活环境、感染、意外伤害、试验的辅助措施（麻醉、插管、注射、手术等）、性周期、生活嗜好品（烟、酒、茶、咖啡）等，尽可能加以控制。（三）试验效应

1．指标的采用

（1）定量指标指可以用各种仪器测量的客观指标，如各种蛋白和核酸的测量等。较为客观、准确、精确，也容易进行统计学分析，应当尽可能多地用于基础和临床研究。（2）定性指标根据某种反应出现与否作为指标，如症状的有与无、生存与死亡、治愈／有效／无效等。用出现的百分率来表示。

（3）半定量指标对不同程度变化分成不同等级或分数。

（4）定量指标与定性指标的转换例如，将定量指标数据划定分界线，高于或低于该分界线确定为有效，反之为无效；也可以将定性指标的百分率或等级（分数）作为相对定量指标。（5）等效量处理因素引起同一水平效应强度需要的量，称为等效量。举例：①药物引起50％动物死亡的剂量称为半数致死量（LD50）；引起50％动物有效的剂量称为半数有效量（ED50）。②引起一定程度（如达到最大反应50％或减少最大反应50％）所需的药物浓度（EC50或IC50）。

（6）等效时间先确定效应的标准，然后观察该效应出现时间、持续时间、衰减时间等。例子：①潜伏期。②效应持续期。③半衰期。2．指标的要求（1）指标的关联性能够确切反映处理因素的效应。

（2）指标的客观化采用客观评价的方法。例如，病人的营养状态、疼痛、红肿、动物活跃与否等，现在还主要靠主观评价。解决的途径，一是通过培训来掌握统一评价标准；二是采用盲法；三是采用计算机图像分析等先进技术。

（3）指标的灵敏度指能正确反映效应变化的最小数量或最小水平。灵敏度低的方法难以检出细微的变化，但过于灵敏的方法往往干扰较大。放射免疫分析法、PCR法、原位杂交等均有很高的灵敏度。

（4）指标的敏感性和特异性

敏感性指可检出发生变化的比率，即真阳性率，检出真阳性率低的指标敏感性低。特异性指检出目标变化的专一性，不应当有较多的无关变化的干扰，即假阳性率要低而真阴性率要高。例如，检测特异蛋白或核酸中采用的抗体或探针，如与其它无关分子有较高的交叉反应，出现的假阳性的可能性大。

（5）测定的精确性

精密度是各次测定值的集中程度，也就是多次测定的数据是否一致，离散程度多大；准确度是测定值与真实值接近的程度，也就是度量的正确性。三、研究设计原理（一）对照1．对照的类型（1）基础条件的对照

①未经任何处理的对照。有时设置“安慰剂”对照。②操作条件对照，动物试验中手术处理的试验，设置“假手术”对照组。③病理对照，对临床疾病或动物病理模型进行处理，有不经处理作为对照。

（2）经典处理的对照将新采用的处理方法与经典处理方法进行比较，也称为“阳性对照”。

（3）试验条件对照对有关方法或步骤设置对照。例如，免疫组化试验，用PBS对一抗或二抗作对照。（4）自身对照和组间对照

①自身对照，有些试验需要对试验对象在处理前后检测同样的指标，处理前的数据作为自身对照。

②组间对照，有些试验则在不同处理组之间进行组间比较，将未经处理的作为对照组。

③两种对照的同时采用，由于试验对象在处理前后的基础状况有不同程度的自然变化，为了排除这种因素的影响，单纯用自身对照还是不够的，同时还需要设置组间对照。例如，连续观察麻醉动物的血压变化，设置生理盐水对照组。2．齐同可比原则处理组在与对照组相同的条件下，其产生的与对照组不同的某种变化，可以认为是处理因素引起的效应。要使对照能够控制试验条件引起的变化，除了处理因素之外，处理组与对照组其它各种条件应当一致或基本一致，这就是齐同可比原则，或称可比性。3．处理因素与对照（1）单一因素单一水平

组别目的处理组施加处理因素，观察处理引起的变化对照组不加处理，其它条件一致，以排除条件因素引起的变化（2）单一因素五种水平

组别目的处理组0V5V10V观察迷走神经不同电刺激强度对气道阻力的影响

20V50V

对照组0V5V10V电刺激无关的神经或部位．排除电刺激本身对气道阻力的影响

20V50V

（3）两种因素单一水平

组别因素A（诱导脑缺血）因素B（低温）目的处理组十十观察低温对脑缺血的保护作用对照组A－（假手术）十排除低温造成的影响对照组B＋－（常温）排除脑缺血变化带来的影响对照组C一（假手术）－（常温）排除其它因素的影响对照组D不作手术常温正常对照，仅予麻醉、固定等处理

（4）三种因素和一种因素的三种水平例如，处理因素A：以卵白蛋白（OA）致敏动物，处理因素B：OA气雾吸入，处理因素C：药物，腹腔注射地塞米松0.1、0.5、1.0mg／kg（每天1次，共3天）。在多因素多水平研究中，需要的组数相当多，上例中包含16组，因此，实验耗费的时间、经费和动物相当多。解决办法：①预实验确定哪些因素影响很小，省略对照；②如药物效应，可在各对照组仅用大剂量；③相同条件实验的文献报告（包括自己实验室的工作）作为依据，省略对照。4．效应与对照有些研究需要对效应检测方法作对照。例如，将新方法与原有方法比较，原有方法检测的结果作为对照，比较新方法的特点、优点和缺点。（二）随机1．单纯随机法最常用随机数字表法，预先从随机数字表随意抽取一组数字，规定各组数码，将试验对象编号，并按相符的数码分配到各组。2．均衡随机（分层随机）先将一些主要的易控因素（如性别、病情、病程等）均衡地安排到各组中，再对那些难以控制的次要因素（如体质、营养状态等）随机分配。3．均衡顺序随机是临床研究中最合理的一种随机化方法。主要特点是可使主要因素得到均衡处理，次要因素随机分配。先将一些主要因素（如病情等）进行均衡处理，其他次要因素（如体质等）仅作记录，不作为分组依据；然后依照病人就诊（人院）顺序，依次按均衡的层次交替进行分组。（三）重复同一试验在同一时间和地点的多次重复（体现在重复次数或样本量），或在不同时间和地点的多次重复，如都能得到相同或相似的结果，结果就可靠。采用一批病人或动物，在同样条件下观察处理因素是否可以引起相似的效应。（四）各种设计方法的选择和组合简单的设计，在动物实验常可按不同处理来设置相应的组。在临床研究或部分动物实验中，如处理因素的效应可在一定时间完全恢复，还可采用交叉设计的方法。动物实验还有累加法，如从小到大逐步增加处理强度。针对流行病调查、临床试验、基础试验的设计，有完全随机化设计、随机区组随机、拉丁方设计、正交设计、序贯设计等方法，这些方法的原理、适用范围、具体实施办法，请参见统计学教科书或参考书。四、研究条件控制1．条件的前后一致如受试对象的基本特点、动物及其品系、采用的仪器设备、各种试剂和材料、试验环境（温度等）、试验方法、操作过程、采用的观察指标等，在设计时确定，研究全过程按照统一标准。人员的操作统一标准，或者由同一个人作试验的一个部分或观察一种指标。2．环境条件的控制保持环境有适宜的气温等。对动物试验作更加严格的条件控制。3．生理条件的控制受试对象的种族、性别、年龄、营养状况、遗传特征、各种生理功能状况等，加以充分考虑，尽可能选择生理条件相似的对象。4．试验条件的控制

（1）受试者或动物

（2）仪器设备精确性、稳定性、可靠性符合要求，校正，规范操作方法。

（3）试剂材料各种药物、试剂、细胞株、其他材料等，符合要求，贴标签注明名称、含量、来源、批号、日期等。

（4）试验条件

（5）操作规程5．操作人员因素的控制为了避免主观因素的干扰，采用盲法。临床研究双盲法，即受试者和研究者（包括数据分析人员）都不知道试验分组情况。基础研究中实行单盲法，即负责观察的人员不知道处理方法和试验分组。6．控制试验误差（1）随机误差在相同条件下多次测量同一量时，误差大小和正负变化没有确定的规律。引起原因：①个体差异造成抽样误差；②一些暂时无法控制的微小因素或未知因素引起的偶然误差。控制办法：①实行随机化。②在小样本试验中，先分层后随机。③尽量减少或消除干扰因素。④适当增加重复数（样本量）。

（2）系统误差在一定实验条件下，由于某种未被发现的固定偏因造成测定值具有倾向性的误差，也称为偏倚。表现为：①恒定系统误差，表现为测定值始终偏向真实值的一侧（偏大或偏小）。这类误差与测定仪器性能、测定人员掌握判断标准（主观性指标）等有关。②线性系统误差，表现为测定值随着测定时间或空间顺序而有明显趋向性。多数情况这种误差是由于测定条件或测定物本身随着时间延续发生了改变。定期检测标准品与对照品控制这类误差。③非线性系统误差，表现为测定值随时间延续而呈曲线变化或周期变化。可能由于自然界和局部环境某些因素波动或周期性变化有关。产生系统误差的原因：①仪器差异，未作校正，或读数在不敏感区域。②方法差异，如测量微量蛋白用不同方法。③试剂差异，试剂的纯度、生产厂家、批号、保存条件等。④条件差异，实验室温度、湿度、通风、照明、噪声等。⑤顺序差异，人或整体动物昼夜节律。⑥人为差异，技术水平、经验、操作习惯及掌握标准。

（3）过失误差这是因实验人员粗心、马虎、不遵守操作规程等主观性错误所造成，有时甚至是记录、抄写、计算上出现错误。五、试验记录1．规范化试验记录直接关系到数据收集的完整性、客观性、可靠性。要做到：（1）事先规定格式和内容（2）培养严谨的习惯（3）加强管理2．记录内容（1）试验日期、记录者签名。（2）逐日对每一试验对象进行观察和记录。（3）临床试验中受试者出现不良事件；动物试验中发现濒死或者已死动物。（4）实验标本的收集和编号。（5）异常现象应做详细记录。（6）记录的数据直接、及时、清晰和不易消除。（7）需要修改的，注明理由以及修改日期，并由修改者签名；修改数据不得损毁原记录。材料和方法（总）SKBR-3细胞培养↓

筛选药物处理浓度和时间组合→检测HER2表达（台盼蓝染色法和MTT法）（免疫组化）↓检测凋亡↙↓↘形态学改变方面DNA降解及含量改变方面细胞膜结构改变方面↓↓↓Gieamsa染色

FCM检测DNA含量变化Annexin/PI染色FCM检测

EB染色DNAladder

Annexin/PI染色LCM观察

Hochest染色

扫描电镜透射电镜六、基础研究设计原则1．试验方法的选择各种试验方法都有其优点也有缺点，较为完善的研究设计应当多角度采用不同方法，可以实现互补，比较准确证明或解决某个学术问题。例如，要证明某一分子的生理意义，可采用生理学方法证明其物理变化特征；采用形态学方法证明其在体内的空间分布特征；采用生物化学或分子生物学方法证明其存在数量及调节方式；采用药理学方法证明其对生理功能的影响或作用机制；采用基因敲除技术则可证明其对发生发育或出生后生理功能的影响。

2．实验动物的选择基础研究中如何选择动物，则要根据不同动物特性及研究要求，保证对处理因素的敏感性和反应的稳定性。在某种研究中应当选择何种动物及其品系，要考虑：①哪种动物的生理或病理特性与研究目标和要求最为吻合；②针对人类某种特性的研究，要根据哪种动物的特征与人类这种特性最为吻合，如研究人的生殖药理，常需要采用猴等灵长类动物；③制作病理模型，要根据哪种动物容易成功，如移植人类肿瘤的研究，常采用裸鼠；④改变遗传性状的研究，要根据动物生殖周期的长短，常采用果蝇、热带鱼等动物；⑤动物繁育和饲养的方便程度及价格因素，可较多采用小鼠和大鼠，这两类动物应用最广，近年来对这两类动物的基因了解得最多，而且基因操作（基因敲除、转基因等）研究多采用小鼠。3．样本量样本量过少，在统计学上会产生假阴性的结果；样本量过大，则会增加人力、时间、经费的负担。根据统计学原理，试验结果的重现性和可靠性与试验的重复次数（例数）有关；也与试验的质量有关。（1）处理组与对照组的反应差别较大，可使所需的样本量减少。（2）试验手段、仪器设备越精密，所需样本量可减少。（3）从统计学角度看：①两组样本量相等，试验效率提高；②定量指标数据的试验效率高于定性指标数据；③自身对照试验或配对试验可减少个体差异，提高试验效率。（4）拉丁方设计、正交设计和交叉设计等方法能提高试验效率。（5）应用样本量估算的公式。两均数组间比较、自身比较或配对比较、百分率比较的样本量可按相应的统计学公式计算（参见统计学参考书）。4．整体、离体和细胞试验（1）整体试验整体表现的现象是生命活动的完整表达形式，但是由于各种环境因素、处理因素、动物个体因素等，都会引起试验结果有很大个体差异，而且试验的工作量大，需要控制的因素很多，由此带来研究上的困难。（2）离体试验由于试验条件容易控制，操作比较简单，离体试验结果的差异相对较小，也能反映该器官或组织的特性。但是，离体试验是脱离了整体的神经一体液一免疫调节，其结果在解释整体表现时需要谨慎。例如，血管扩张药对离体心脏可能无直接作用，但是在整体动物用了血管扩张药，会因为血压降低而反射性增强心脏功能。（3）细胞试验细胞试验有原代细胞和细胞株两类，各有不同特点，根据研究目标加以选择。但是，单一种类的细胞的功能，脱离了与其他类型细胞的相互作用及整体性调控作用，与整体或离体器官组织中由各种不同组成的细胞群体功能会有很大差别。5．基础研究设计的推荐程序七、临床研究设计原则临床研究是指以人为研究对象的医学科学研究，其目的是提高诊断水平、治疗效果、改善预后和进行疾病病因的宏观研究。（一）基本原则及特点1．医德与伦理学原则临床科研是以人为研究对象，涉及人道主义与伦理学的要求。原则上讲，不允许用人来做试验研究，而只能用观察或分析的方案进行研究。新药临床试验必须对该种药物的药理、毒理作用有比较全面的了解后才能进行临床试验。新药临床试验必须遵守《中华人民共和国执业医师法》、《中华人民共和国药品管理法》、《新药审批办法》和《药品临床试验管理规范》。临床试验设计方案需得到伦理委员会（ethicscommittee）的同意，如放宽纳入标准涉及到伦理学上的问题，修订方案需重新得到伦理委员会的同意。2．对照原则人体之间的差异十分显著，试验条件难以标准化是其一大特点，因此临床科研不同于一般生物实验，更不同于理化实验。没有严格的对照，许多问题很难得到肯定的结论。只有选择合适的论证强度较高的对照组，才能保证结果准确、可靠。3．随机原则临床研究时病例的分组必须随机化，其目的是将病人均匀地分配到各组，而不受试验者主观意志或客观条件的影响，排除分配误差。随机并非随意。均衡顺序随机是临床研究中最合理的一种随机化方法，主要特点是可使主要因素得到均衡处理，次要因素随机处理，增加了可比性，减少了主观性。随机化分组与抽样可较好地达到“齐同对比”的目的，以消除非处理因素所造成的偏差。但这不是绝对的，因为齐同对比所能抵消的只是混杂、交互作用与一部分偏倚所造成误差，并不能消除机遇所造成的误差。4．重复原则任何研究必须是经多次重复，得到相同或相似的结果，即可以复制的结果是准确可信的，由此可见重复原则的重要性。一般地说，重复的次数越多，即样本数越大，越能反映机遇变异的客观真实情况。但这并不能说样本越大越好。样本越大，试验条件越难控制，并且对每一个具体受试对象的观察就不可能做得很细。另一方面，样本越大，参加研究工作的人数也必须增加，彼此之间在操作、观察、评什等方面都很难做到完全一致，又反而会带来许多误差。从经济上讲，样本越大，需要的经费也一定会越大。因此，盲目追求大样本是不值得提倡的。那么，要多大的样本才算合适？就需要事先做出估计，也就是样本大小的估计间题，样本大小的估计方法根据设计方案而定。（二）临床科研中的几种常见的设计类型临床科研设计的方案种类很多，但从研究的目的上可分为两大类；一类为描述性研究，包括病例报告、病例分析和横段面研究等。另一类为分析性研究，包括病例对照研究、队列研究、临床试验等。1．横段面研究通常分为普查和现况抽样调查。普查通常指为了了解某地区或某单位的某种疾病患病及有关情况，对该地区或单位的所有人员进行全面调查。因此，普查一般适用于小区域的患病情况的描述（例如某疾病在该地区的患病率特别高，需要调查原因），不能反映被研究人群的患病情况。现况抽样调查是从所研究的人群随机选取一部分具有代表该人群特征的病例作为样本，收集这部分病例的有关情况，进行描述性的分析。在实际情况中，大多数横段面研究都属于现况抽样调查。横段面研究的优点有：①可以同时得到多个结果；②研究所需的时间相对较短；③收集病例相对容易；④一般可以作为队列研究的预试验研究。缺点有：①一般只能得到一些观察现象的描述性结论，以及多个观察因素之间的相关性，而不能得到因果关系的结果；②由于收集资料均为一个时间横段面上的信息，所以容易产生测量性偏倚。2．病例对照研究（case-controlstudy）这是回顾性研究一种方法，其研究对象是由病例组和对照组构成，主要通过比较病例组暴露因素的某些指标，与对照组的暴露因素的这些指标的差别，研究这些暴露因素（可能是危险因素）与该疾病的发病率（或死亡率）之间的相关性。病例对照研究的优点有：①所需的样本量较小，因此适宜于少见疾病的研究，如恶性肿瘤的病因和危险因素研究；②由于调查暴露情况是采用回顾式，因此适用于长潜伏期疾病的研究，如化学因素致癌作用常需10—20年；③允许同时调查许多因素和研究疾病的联系，并可以使用病史记录作为数据的来源。缺点有：①选择合理对照十分困难，对照组的选择是由研究者自行选择，难免产生偏倚，从而影响研究结果的正确性；②论据强度较弱，因此当病例对照研究得出的结论有争议，应进一步设计队列加以证实；③病例对照研究不能计算发病率，只能计算近似的相对危险度，用优势比来估计。3．队列研究（cohortstudy）研究对象一定是未患所要研究疾病的人群。将该人群中暴露于某因素的人群作为暴露组，未暴露于某因素的人群作为未暴露组，随访观察二组人群某事件发生率的差别，判断某因素与事件关系。在队列研究中开始观察的时间，可选用现在始点，也可用过去始点，前者称前瞻性队列研究，后者称为回顾性队列研究。队列研究与病例对照研究的根本区别在于分组，病例对照研究是由结果进行分组，即按病例是否死亡或是否患病为结果进行分组。队列研究是根据暴露因素（即研究因素）进行分组。队列研究的优点有：①可设立前瞻性的同期对照，除了暴露因素接触与否外，各队列纳入的观察对象、诊断标准和纳入／排除指标与项目等都可做到标准化，因此论证强度高，可靠性强。②由于设计方案是暴露在前，患病（结局）在后，因此确定暴露没有偏倚，因此，获得的结论可靠性强；③可研究暴露因素和多个结局（疾病或临床事件）的关系；④可直接计算发病率和相对危险度，因果关系颇为明确。缺点有：①在发病率很低的疾病往往需要很大的样本数，并且有些暴露因素从接触到发病需要很长的潜伏期，因此，不适用于少见疾病的研究；②队列研究分组是自然形成的，暴露组和未暴露组在许多方面不尽相同，容易产生偏倚；③由于随访时间较长，在此过程中会发生许多事件或因素，有时很难判定最后出现的结果与所研究的暴露因素的关联性。4．临床试验（clinicaltrials）临床试验也可以看成是一种特殊类型的队列研究，所不同的是研究者可以选择治疗组。治疗组和对照组分组可采用随机化方法。对于干预措施和随访期间处理等，研究者可根据研究目的加以控制，从而形成无偏倚的对照组，使研究结果更可靠。由于研究者的操作类似于实验室研究，因此称为试验性研究或实验性研究（experimentalstudies），也可称为干预试验（interventionstudies）。临床试验依据设置对照组方法不同，可以分为以下数种设计方案：（1）随机对照试验（randomizedcontrolledtrials，RCT）试验组和对照组的分组是采用真正随机化分配方法，RCT设计还可依据是否实行盲法（blinding）分为单盲试验、双盲试验和开放试验（即非盲试验），后者不实行盲法。随机对照双盲试验（randomized，controlled，blindedtrials）被认为最佳标准的临床试验。随机对照试验的优点有：①属分析性、前瞻性研究，是一种验证假设最有力的方法；②随机化分组，特别是均衡顺序随机化分组，增加了对照组与试验组可比性，以排除很多非研究因素混杂偏倚；③有严格的诊断、纳入和排除标准，入选对象的均质性好，观察指标与判断标准统一，在很大程度上减少了偏倚的发生，双百法的应用可减少测量性偏倚。缺点是在具有高度选择病例中进行，试验内部真实性虽好，但研究结果的外推受到限制。（2）交叉（cross-overdesignCOD）试验这是一种自身对照的试验方法，可以控制个体间的差异，减少受试者人数。最简单的是2×2交叉设计，合格的研究对象先随机化分配成A组和B组，第一阶段A组为试验组，B组对照组，第二阶段两组交替，B组为试验组，A组为对照组，第一阶段与第二阶段之间应安排一个洗脱期（washout），避免延滞效应（carryovereffect），然后才进行第二阶段试验。（3）自身前后对照试验（before－afterstudy）自身前后对照试验实质上是自身对照试验，不分组，第一阶段视为试验阶段，第二阶段视为对照阶段，两个阶段之间也需设置洗脱期。那种不按上述设计，将药物治疗前后进行比较是不能算作自身对照，只能作为无对照处理。（4）非随机同期对照试验（non－randomizedconcurrentcontrolstudies）和历史性对照试验（historialcontrolstudies）对照组并非由随机化方法决定，而是依据不同地点不同时间选择，前者系不同中心之间对照，后者系不同时间的前后对照，这些对照的选择常存在偏倚，两组基础状况（baseline）往往不一致，从而影响研究结果的正确性，因此应用有一定局限性。（5）序贯试验（sequentialtrials）临床科研设计一般都是预先确定好样本含量，要待试验完全完成后才进行分析，而序贯试验则事先不规定样本含量，而是每试验一对受试者后即进行分析，能够作出结论时停止试验，因此，既可避免盲目加大样本而造成浪费，又不至于因样本过小而得不到应有的结论。（三）临床研究的质量控制质量控制也是临床研究设计的重要内容之一。临床研究的特点是在病人群体中进行研究，许多条件难以控制，要取得研究结果的真实性和可靠性，科研的质量