1.2基因工程的基本操作程序市

1.2基因工程的基本操作程序

基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因体现载体的构建将目的基因导入受体细胞练习目的基因的检测与鉴定目的基因重要是指______________________编码蛋白质的构造基因目的基因的获取供体生物细胞取出DNA用限制酶剪去多余部分目的基因即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来现在被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。

1）从基因文库中获取目的基因1.什么是基因文库？（p9）2.如何从基因文库中得到我们所需的目的基因？种类：基因组文库：部分基因文库(cDNA文库)：获得目的基因的办法2）2）人工合成3）运用PCR技术扩增目的基因含有一种生物的全部基因含有一种生物的部分基因根据基因的有关信息：如基因体现的产物等。（p9）1.用一定的_________切割质粒，使其出现一种切口，露出____________。2.用_____________切断目的基因，使其产生_________________。——

核心3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一种重组DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶的黏性末端切口DNA连接酶相似(二)基因体现载体的构建基因体现载体的构建——核心质粒DNA分子一种切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种限制酶目的基因与运载体的结合过程，事实上是不同来源的基因重组的过程。科学家在哺育抗虫棉时，通过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，成果抗虫基因在棉花体内没有体现。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，成果成长的植株，有了抗虫能力。资料:基因体现载体的构成：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且能够遗传给下一代，同时使目的基因能够体现和发挥作用。a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因(三)将目的基因导入受体细胞惯用的受体细胞：动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。将目的基因导入受体细胞的原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。转化——目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定体现办法导入植物细胞导入动物细胞导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——感受态细胞吸取DNA分子(三)将目的基因导入受体细胞(四)目的基因的检测与鉴定——检查与否成功分子检测个体鉴定：①检测转基因生物染色体的DNA上与否插入了目的基因②检测目的基因与否转录出了mRNA③检测目的基因与否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等办法——办法——办法——DNA分子杂交分子杂交抗原-抗体杂交PCR技术—聚合酶链式反映

原理：前提：条件：PCR扩增仪DNA双链复制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物热稳定DNA聚合酶(Taq酶）DNA的两条链为模板温度控制和缓冲液前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物。引物：一小段单链DNA或RNA，普通20～30个碱基，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。PCR扩增时为什么需要引物呢？类别项目

复制

转录场所特点模板原料酶能量碱基配对产物细胞核只有DNA的一条链四种核糖核苷酸RNA聚合酶ATPA-UC-GT-AG-C细胞核DNA的两条链四种脱氧核苷酸解旋酶、DNA聚合酶ATPA-TC-GT-AG-C两个双链DNA分子一条单链mRNA边解旋边复制，半保存复制边解旋边转录5/3/G—GT—C3/5/G—AC—C5/3/引物ⅡG—G变性复性延伸1.目的基因DNA受热变性，解链；2.引物与单链互补结合；3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。5/3/A—G引物Ⅰ运用PCR技术扩增目的基因PCR技术扩增过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，

断裂，形成_______

b、复性（55℃-60℃）：系统温度减少，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链目的基因的mRNA单链DNA双链DNA(即目的基因)反转录合成1）反转录法：

以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列构造基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：2.微生物作受体细胞因素：将目的基因导入微生物细胞3.转化办法：大肠杆菌繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 解决细胞→ 细胞→体现载体与感受态细胞混合→_________细胞吸取DNA分子。Ca2+感受态感受态1.惯用菌：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞的染色体上目的基因的遗传特性得以维持稳定和体现1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上2.转化如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。不能，受体细胞必须体现出特定的性状，才干阐明目的基因完毕了体现。受体细胞摄入DNA分子后就阐明目的基因完毕了体现吗？若不能体现，要对抗虫基因再进行修饰。例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，阐明未摄入目的基因或摄入目的基因未体现。如虫吃后中毒死亡，则阐明摄入了抗虫基因并得到体现。无表达产物无表达产物有表达产物无表达产物细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中与否有目的基因的体现产物。裁减无体现产物的菌落，保存有体现产物的进一步培养、研究。基因文库的构建（1）构建基因组文库将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适宜的限制酶，将DNA切成一定范畴大小的DNA片段，然后将这些片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，每个受体菌都含有了一段不同的DNA片段。这个群体包含了这种生物的全部基因。供体细胞中的DNA许多DNA片段载体限制酶分别与载体连接，载入受体菌导入鸟枪法（散弹射击法）让供体细胞提供的全部DNA片段分别在各个受体菌中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再运用一定办法将目的基因的DNA片段分离出来。外源DNA扩增产生特定性状目的基因分离通过对受体菌的培养而储存基因（2）构建cDNA文库用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多个互补DNA（也叫cDNA）片段，与载体连接后储存在一种受体菌群中，这个受体菌群体叫做这种生物cDNA文库。1.下表有关基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，对的的组合是 2、下列属于获取目的基因的办法的是()①运用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④运用PCR技术⑤运用DNA转录 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥3.细菌的质粒分子带有一种抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的重要作用是A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性B．有助于对目的基因与否导入进行检测C．增加质粒分子的分子量D．便于与外源基因连接4.有关基因工程的叙述对的的是A．限制酶只在获得目的基因时才用B．重组质粒的形成是在细胞内完毕的C．质粒都可作为运载体D．蛋白质的构造可为合成目的基因提供资料5.哪项不是基因体现载体的构成部分()A.启动子B.终止密码C.标记基因D.目的基因6.下列哪项不是将目的基因导入