干细胞培养扩增技师考试试卷及答案

干细胞培养扩增技师考试试卷及答案填空题（每题1分，共10分）1.干细胞培养常用基础培养基是______2.胚胎干细胞标志性转录因子是______3.干细胞培养需在______%CO₂恒温箱中进行4.干细胞传代常用消化酶是______5.间充质干细胞（MSC）可来源于脂肪组织、______等6.干细胞培养湿度通常维持在______%7.造血干细胞常用表面标志物是______（CD34+CD38-）8.干细胞冻存液保护剂包括胎牛血清和______9.诱导多能干细胞（iPS）由______因子重编程获得10.干细胞培养需定期检测______避免污染单项选择题（每题2分，共20分）1.提示干细胞污染的是？A.贴壁率高B.培养基澄清C.培养基浑浊D.细胞形态正常2.MSC传代最佳汇合度是？A.30%-50%B.50%-70%C.70%-90%D.90%-100%3.胚胎干细胞饲养层常用？A.MEF细胞B.HeLa细胞C.肝细胞D.神经细胞4.干细胞冻存降温速率是？A.1℃/minB.5℃/minC.10℃/minD.20℃/min5.属于成体干细胞的是？A.胚胎干细胞B.iPS细胞C.造血干细胞D.诱导神经干细胞6.血清替代物（SR）不包括的作用是？A.提供营养B.维持干性C.促进分化D.减少污染7.干细胞复苏正确操作是？A.37℃快速解冻B.室温缓慢解冻C.直接投液氮D.解冻后立即离心8.需立即弃去细胞的情况是？A.支原体阳性B.贴壁慢C.培养基变黄D.少量凋亡9.MSC分化潜能不包括？A.成骨B.成脂C.成神经D.成胚层10.干细胞无菌操作需在？A.超净工作台B.普通操作台C.通风橱D.实验台多项选择题（每题2分，共20分）1.干细胞培养关键条件包括？A.无菌环境B.适宜温度C.恒定CO₂D.合适培养基2.成体干细胞包括？A.造血干细胞B.MSCC.神经干细胞D.胚胎干细胞3.干细胞污染类型有？A.细菌B.真菌C.支原体D.病毒4.MSC阳性表面标志物是？A.CD29B.CD44C.CD45D.CD735.干细胞冻存液组成包括？A.基础培养基B.胎牛血清C.DMSOD.抗生素6.胚胎干细胞干性维持需要？A.饲养层B.LIFC.血清替代物D.分化抑制剂7.培养基变黄原因可能是？A.细胞代谢旺盛B.细菌污染C.CO₂过高D.培养时间长8.干细胞应用方向包括？A.组织修复B.药物筛选C.疾病模型D.基因载体9.干细胞传代步骤包括？A.弃旧培养基B.漂洗细胞C.消化细胞D.终止离心10.影响扩增效率的因素有？A.接种密度B.培养基成分C.温度D.传代次数判断题（每题2分，共20分）1.干细胞培养CO₂浓度越高越好（×）2.MSC可直接从外周血分离（×）3.胚胎干细胞具发育全能性（√）4.冻存DMSO浓度通常为10%（√）5.支原体污染可肉眼判断（×）6.iPS与胚胎干细胞干性完全相同（×）7.干细胞培养需无菌耗材试剂（√）8.造血干细胞主要存在于骨髓（√）9.干细胞传代消化时间越长越好（×）10.血清替代物可完全替代胎牛血清（×）简答题（每题5分，共20分）1.简述干细胞培养无菌操作基本要求答案：操作前洗手换无菌服/帽/口罩；超净台提前紫外30min，开启风机；耗材试剂需灭菌/过滤；避免交叉污染，不同细胞分开操作；减少试剂暴露时间；瓶口用酒精灯灭菌；操作后清理工作台，关闭紫外风机。2.MSC主要生物学特性答案：①多向分化：成骨、成脂、软骨等；②贴壁生长：成纤维样，汇合呈漩涡状；③标志物：CD29/44/73阳性，CD34/45阴性；④免疫调节：抑制T/B细胞增殖；⑤自我更新：体外稳定扩增多代。3.干细胞冻存复苏操作要点答案：冻存：细胞70%-80%汇合，浓度1×10⁶-10⁷/mL，冻存液（基础+20%FBS+10%DMSO），1℃/min降温（程序盒），液氮保存；复苏：37℃快速解冻，加预热培养基，1000rpm离心5min，重悬接种。4.干细胞常见污染及判断方法答案：①细菌：培养基浑浊、絮状物、pH下降；②真菌：白色/黑色菌落、菌丝；③支原体：无肉眼变化，细胞生长慢，PCR检测；④病毒：细胞病变（融合、空泡），试剂盒检测。讨论题（每题5分，共10分）1.如何有效维持干细胞干性？答案：培养条件：①合适培养基（胚胎干加LIF，MSC加血清替代物）；②微环境（饲养层/Matrigel包被）；③控制环境（5%CO₂、37℃，<10代）。分子机制：①激活Wnt/Notch通路，抑制BMP；②维持Oct4/Sox2/Nanog表达（小分子如CHIR99021）；③表观遗传修饰（沉默分化基因）。2.支原体污染危害及防控策略答案：危害：抑制增殖、丢失干性、干扰实验结果、交叉污染。防控：①预防：无菌耗材试剂，避免交叉；②检测：PCR/培养/荧光染色定期测；③清除：用Plasmocin处理3-5天，确认阴性；④淘汰：严重污染无法清除的细胞株立即淘汰。答案汇总填空题1.DMEM/F122.Oct43.54.胰蛋白酶5.骨髓6.957.CD348.DM