化学发光的原理

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析（），是用化学发光剂干脆标记

抗原或抗体的免疫分析方法。化学发光免疫分析仪包含两个部分，即免疫反应系

统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化

和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的

基态时，同时放射出光子0,利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反

应系统是将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体）干脆标记在抗原:化

学发光免疫分析）或抗体（免疫化学发光分析）上，或酶作用于发光底物。

化学发光免疫分析仪包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析

系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化

剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定

的基态时，同时放射出光子（），利用发光信号测量仪器测量光量子

产额。免疫反应系统是将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体）

干脆标记在抗原（化学发光免疫分析）或抗体（免疫化学发光分析）上,

或酶作用于发光底物。

化学发光免疫分析仪器中核心探测器件为光电倍增管（），由单

光子检测并传输至放大器，并加高压电流放大，放大器将模拟电流转

化为数字电流，数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以

计算，得出临床结杲。

化学发光标记免疫分析法

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析（），是用化学发

光剂干脆标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物

质有方噬酯类化合物一一（AE）,是有效的发光标记物[3],其

通过起动发光试剂（N2H202）作用而发光，剧烈的干脆发光在一秒

钟内完成，为快速的闪耀发光（见图I）。口丫咤酯作为标记物用于免疫分

析，其化学反应简洁、快速、无须催化剂；检测小分子抗原采纳竞争

法，大分子抗原则采纳夹心法，非特异性结合少，本底低；与大分

子的结合不会减小所产生的光量，从而增加灵敏度。

发光酶免疫分析法

从标记免疫分析角度，化学发光酶免疫分析（te

E）,应属酶免疫分析，只是酶反应的底物是发光剂，操作步骤与酶

免分析完全相同［5］:以酶标记生物活性物质（如酶标记的抗原或抗

体）进行免疫反应，免疫反应复合物上的睥再作用于发光底物，在信

号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标

记酶为辣根过氧化物酶0和碱性磷酸酶（P）,它们有各自的发光底

物。

发光试剂

标记的常用的底物为鲁米诺（32氨基邻苯二甲酰明1），或其衍生物

如异鲁米诺（42氨基邻苯二甲酰肺），是一类重要的发光试剂。其结

构如图4所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，在过氧化物

酶与活性氧［过氧化阴离子（02-）,单线态氧（1。2）,羟自由基

（・），过氧化氢（H202）］存在下，生成激发态中间体，当其回到基态

时发光，其波长为425。

早期用鲁米诺干脆标记抗原（或抗体），但标记后发光强度降

低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物函标记抗体，进行免疫反应

后利用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酣和起动发光试剂（2H2。2）

作用下，鲁米诺发光，发光强度依靠于酣免疫反应物中酶的浓度。

半自动分析系统就是利用这一体系特地设计的。

憎加发光酶

增加发光酶免疫分析（，）在发光系统中加入增加发光剂，如对2

碘苯酚等，以增加发光信号，并在较长时间内保持稳定，便于重复测

量，从而提高分析灵敏度和精确性。在全自动分析仪上，还可通过计

算机严密限制，进行自动操作，如加试剂,混合，温育，洗涤，加发

光试剂，发光计数，数据处理，绘制标准曲线，直至完成病人血清

样品的分析并打印出结果。发光增加酶免分析系统用荧光素、睡喋等

增加剂，其发光时间可持续长达20m,试剂盒有甲状腺功能检测的

促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、

游离甲状腺素，与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛

膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮，以与其他方面的如癌胚抗

原、铁蛋白、地高辛等。

标记的所用底物为环1,22二氧乙烷衍生物，这是一类很有

前途的发光底物，用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包

含起稳定作用的基团一一金刚烷基，其分子中发光基团为芳香基团和

酶作用的基团，在酶与起动发光试剂作用下引起化学发光。最常运用的

底物是[32（2'22）42242（3'2）221,22],中文名为：

32（2'2螺金刚烷）242甲氧基242（3'2磷酰氧基）2苯基21,22

环二氧乙烷）。在碱性磷酸酶（P）作用下，磷酸酯基发生水解而脱去一

个磷酸基，得到一个中等稳定的中间体（半寿期为2〜30m）,此中

间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态

的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当其回到基态时产生470的光，可持续儿

非常钟。为磷酸酯酶的干脆化学发光底物，可用来检测碱性磷酸酯酶

或酶和抗体、核酸探针与其它配基的结合物。可检测到碱性磷酸酯酶

的浓度为10-15o

化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分

析的医学检验仪器。将定量的患者血清和辣根过氧化物()加入到固

相包被有抗体的白色不透亮微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧

化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分别洗涤未反应的

游离成分。然后，加入鲁米诺发光底液，利用化学反应释放的自由能

激发中间体，从基态回到激发态，能量以光子的形式释放。止匕时，将

微孔板置入分析仪内，通过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计

数器读出各孔的光子数。样品中的待测分子浓度依据标准品建立的数

学模型进行定量分析。最终，打印数据报告，以协助临床诊断。

二.工作原理：

化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分

析的医学检验仪器。将定量的患者血清和辣根过氧化物O加入到固

相包被有抗体的白色不透亮微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧

化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分别洗涤未反应的

游离成分。然后，加入鲁米诺