云南省基因组健康检测标准-2022征求意见稿

T/YEMSXX-2022

团体标准

基因组健康评价技术规范

Technicalspecificationforgenomichealth

assessment

（征求意见稿）

2022-XX—XX发布2022-XX—XX实施

云南省环境诱变剂学会发布

T/YEMSXX-2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构

和起草原则》、GB/T20000《标准化工作指南》、GB/T20001《标准编写规则》、

GB/T20004《团体标准化》的规定起草。

本文件由云南省环境诱变剂学会提出。

本文件由云南省环境诱变剂学会归口。

本标准起草单位：云南省环境诱变剂学会（营养基因组学专业委员会）、云

南师范大学、上海上誉华夏基因科技有限公司、台州耶大基因与细胞治疗研究院。

本文件主要起草人：汪旭、倪娟、范丽仙、郭锡汉、王晗、薛京伦、周滔

本标准为首次发布。

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基因组健康评价技术规范

1范围

基因组稳定是健康促进、利好公众健康素质的基础遗传学要素。基因组损伤是基因

组健康受到胁迫的生物学标识。

本文件规定了基因组损伤无创检测的细胞分子生物学原理与技术、操作规范。

本文件适用于以人体基因组健康评价为基础的遗传健康咨询，为构建健康管理、健

康生活方式和公共卫生策略为特征的“零级预防”提供科学依据。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件，局部参考：

《遗传变异分类标准与指南》

《ACMG遗传变异分类标准-中文版》

《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》

《分子遗传学基因检测送检和咨询规范与伦理指导原则2018中国专家共识》

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1基因组Genome

生物体一套完整遗传物质的总和。高等真核生物的基因组，为其配子所有染色体

DNA的总和。

3.2基因组损伤Genomicdamage

基因组中发生的核苷酸序列及其修饰等结构变异与功能异常、端粒长度异常改变、

染色体行为错误等遗传学事件。

3.3双核细胞binucleatedcells

经细胞质分裂阻断，二个完成核分裂的子细胞核处于同一细胞质范围内的细胞。

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3.4双核细胞微核Micronucleusinbinucleatedcells

经细胞松弛素B阻断细胞质分裂、完成核分裂的细胞中，游离于主核的染色质小

体；由无着丝粒染色体断片或多种机制诱发的落后染色体构成。

3.5双核细胞核质桥Nucleoplasmicbridgeinbinucleatedcells

经细胞松弛素B阻断细胞质分裂的双核细胞中，细胞核之间形成的直径小于主核

1/4的染色质丝状连接；为染色体断裂后错误重接、端粒融合或双着丝粒染色体等

事件引起。

3.6核芽Nuclearbuds

无着丝粒或无端粒DNA在核内异常扩增后经核膜表面排除、形成未脱落的染色质

小体。

3.7端粒Telomere

位于染色体末端的DNA-蛋白质复合物，是避免染色体缩短、核酸酶侵袭及染色体

末端融合的重要染色体结构组分。端粒长度异常是基因组不稳定性增加的标志之

一。

4基因组健康检测实验室要求

4.1实验室通用要求

实验室应满足GB-19489生物安全实验室要求，面积大于150平米，其中细胞培养间30

平米，其洁净区应达到万级，局部千级。实验室配置DNA提取、储存、扩增和影像摄

取分析工作区；细胞分离、计数、培养工作区；显微制片、图像和生物信息数据处

理工作区。

4.2设备管理

设备采购前应完成性能需求、用途及设备资质供应商的调研，保证设备符合预期分

析检测要求；设备投入运行前，应保证各项指标校准合格；实验室应建立设备使用、

维护、维修标准和安全操作规范并保存相关记录。

4.3耗材管理

建立并执行实验耗材的标准化采购、接收、检验、贮存、发放和使用的标准化流程，

并予以记录。

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4.4实验废弃物处理

实验操作过程产生的污物废液以灭菌消毒法进行安全处理。

5基因组健康检测人员要求

5.1岗位设置

基因组健康评价机构应根据业务特点，配置专业人员岗位。关键岗位至少包括中心

负责人、技术负责人、质量控制负责人，各部分负责人之间不得兼任、不存在上下

级领导关系。质量控制负责人的岗位职责和技术负责人的岗位职责无重叠。

5.2人员资质管理

从事基因组损伤检测的人员应具备专科以上的医学、护理和生物学任一相关专业背

景，并通过资质第三方上岗培训，培训内容包括专业基础知识和技能、质量控制、

伦理安全、应急预案等知识。在岗技术人员每年定期参加一次职业技能考核，对不

符合岗位要求的人员，经再培训合格后方可上岗。

6核心技术规范

6.1无创外周静脉血取样

采样需经伦理审查和知情同意，受检人应需提供近三个月内的HBV、HCV、HIV和梅毒

检测报告，上述任一病原体阳性者暂不参与本项健康评价分析。资质人员以肝素钠

抗凝采集3ml，48小时内完成淋巴细胞分离培养、核基因组DNA提取。

6.2淋巴细胞培养及制片

6.2.1培养基质量要求：淋巴细胞培养使用标准RPMI1640培养基，含10%胎牛血清、

2mML-Glu、30μg/mL植物血球凝集素、1mM丙酮酸钠和100IU/mL双抗，无菌分

装，4℃避光保存，一周内使用。

6.2.2淋巴细胞分离和计数质量要求：外周静脉血样于室温（15-28℃）下经HBSS

稀释铺于淋巴细胞分离液表面，离心后细胞计数。

6.2.3细胞培养、细胞质分裂阻断与制片：以0.5×106浓度接种淋巴细胞于RPMI1640

培养液，37℃、5%CO2培养箱中培养44小时，4.5μg/ml细胞松弛素B阻断细胞质

分裂28小时，淋巴细胞分离及培养全程无菌操作。培养毕以涂片离心机制片；常规

固定、染色及封片。

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6.3端粒长度分析：取6.2核基因组DNA，以RT-qPCR标准曲线法测量平均端粒长

度。

6.3.1标准品制备：以14个TTAGGG重复序列制备端粒标准品，度量样本端粒总长

度，选单拷贝基因36B4序列制备单拷贝基因标准品，度量样本基因组倍数。

6.3.2平均端粒长度分析：设定RT-qPCR标准曲线程序，RT-qPCR反应结束后，依

据标准曲线得到目标样本的端粒总长度T（kb/reaction）和基因组拷贝数S（基因组

拷贝数/reaction），二者的比率（T/S）即为样本单个基因组的端粒总长度（TL/diploid

genome,Kb），除以染色体总数后得到样本的平均端粒长度（Kb）。

6.4基因组损伤判断标准

6.4.1染色体损伤：以细胞松弛素B胞质阻断的双核细胞微核、核质桥和核芽频率

综合评判，受检个体的染色体损伤率位于相同年龄性别组秩的前1/3即提示基因组

损伤的高水平。

a）双核细胞判断标准：被检细胞须为双细胞核、具有完整核膜，两个细胞核位于

同一细胞质范围内；双核细胞中的两个细胞核大小均等，着色深浅和折光度基本

一致；细胞质边界完整，与相邻细胞界限清晰。

b）双核细胞微核判断标准：双核细胞中的微核的直径通常为主核的1/16～1/3，

与主核的着色深度基本一致。

c）双核细胞核质桥判断标准：位于同一细胞质之中的二个细胞核之间的丝状连接，

直径不超过主核直径的1/4，其着色特征应与主核相一致。

d）双核细胞核芽的判断标准：双核细胞中的核芽与微核有相似的形态和着色特征，

但以小柄与主核相连。

6.4.2端粒长度异常评判：不同个体之间端粒长度变异范围较大，但具有个体特异性，

同一个体淋巴细胞在间隔30~60天的两次平均端粒长度若出现显著差异，指示端粒

长度的异常变化，异常改变的幅度与基因组损伤程度呈正比。

6.5基因组损伤评判质控：

6.5.1外周血抗凝取样后需在48小时之内完成淋巴细胞分离并立即进行细胞培

养。

6.5.2细胞制片后需双盲显微分析，1000倍放大观察计数各个基因组损伤标志出

现千分率，显微影像和数据信息均需准确留档备查。

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6.5.3端粒长度数据有效性：每个目标样品系统生成的值只有落在RT-qPCR标准曲

线生成的直线范围内方有效，样品Ct值的标准误﹤1Ct（CV﹥5%）。

6.5.4细胞分离、培养、收集、制片及分析过程的原始记录保存时间不低于10年。

7人类遗传资源与信息保护规则

本文件所指的遗传资源为含有人体基因组的外周血淋巴细胞，信息指利用外周

血淋巴细胞产生的数据资料。

所有样本采集与保存、数据处理，遵循《中华人民共和国人类遗传资源管理条

例》（中华人民共和国国务院令，第717号）。

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附录A（规范性附录）基因组损伤生物标记信息表

序号基因组判断标准

损伤标志

1双核细胞（BN）两个细胞核均具有完整核膜，并位于同一细胞质范围

内；两个细胞核应大小均等，着色深浅和折光度基本

一致；两个主核可能接触但是理想的情况下不重叠；

双核细胞的细胞膜完整，并与相邻细胞清晰分开。

2双核细胞微核双核细胞微核直径通常在主核的1/16～1/3，与主核染

（MN）色深度基本一致。

3双核细胞核质桥双核细胞中的核质桥通常不超过主核直径的1/4，其

（NPB）着色特征应与主核一致。

4双核细胞核芽双核细胞中的核芽与微核有相似的形态和着色特征，

（NBUD）但以小柄与主核相连。

5端粒长度异常同一受检者间隔30~60天，所获得的两次淋巴细胞平

均端粒长度出现显著差异。

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附录B(规范性附录)主要试剂和仪器设备

主要试剂：

1、淋巴细胞分离液，无菌，100ml，4℃保存。开瓶后暴露于空气后易变质，使

用时应保留原包装蜡封，按需用注射器吸出，20-22℃使用。

2、Hank’s平衡液，高压灭菌，4℃保存，20-22℃下使用。

3、GibcoPPMI1640培养液，不含谷氨酰胺（L-Glu），无菌。4℃保存，使用前

置室温1小时。

4、胎牛血清（FBS），65℃灭活，-20℃冻存，加入培养基前在37℃水浴中解冻，

解冻的FBS可在4℃保存3天，避免反复冻融。

5、L-Glu溶液，原液浓度200mM，过滤灭菌，1.5ml的eppendorf管分装后-20℃

冻存，使用前室温解冻。

6、丙酮酸钠溶液，原液100mM，过滤灭菌，1.5ml的eppendorf管分装后-20℃

冻存，使用前室温解冻。

7、细胞松弛素B(Cyt-B)，以DMSO制备600μg/ml原液，分装，-20℃保存，

使用前解冻。

8、植物血球凝集素-P（PHA-P），以无菌生理盐水制备2.25mg/ml原液，分装，

4℃保存。

主要仪器设备：

1、二氧化碳培养箱

2、生物安全柜

3、纯水仪

4、高速冷冻离心机

5、压力蒸汽灭菌锅

6、研究显微镜

7、涂片离心机

8、低速离心机

9、荧光定量PCR仪

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附录C（规范性附录）基因组损伤识别图谱(X1000)

胞质阻断双核细胞双核细胞微核

双核细胞核质桥双核细胞核芽

端粒测量RT-qPCR引物及标准品序列

引物及标准品引物序列(5’-3’)产物长度

36B4-F（SF）CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC

76bp

36B4-R（SR）CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA

PCRCGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT

telo-F（TF）

PrimersTGGGTTTGGGTT

75bp

GGCTTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTAC

telo-R（TR）

CCTTACCCT

Telomerestandard(TTAGGG)1484bp

CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACA

Standards

36B4standardGACAAGGCCAGGACTCGTTTGTACCCGTTGAT75bp

GATAGAATGGG

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端粒标准曲线单拷贝基因36B4标准曲线

端粒长度在检测周期内变化分析样表

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参考文献

1.MFenech.Cytokinesis-blockmicronucleuscytomeassay.NatureProtocols,

2007,2(5):1084-1104.

2.MFenech.TheGenomeHealthClinicandGenomeHealthNutrigenomics

concepts:diagnosisandnutritionaltreatmentofgenomeandepigenomedamage

onanindividualbasis.Mutagenesis,2005,20(4):255-269.

3.MFenech.Genomehealthnutrigenomicsandnutrigenetics-diagnosisand

nutritionaltreatmentofgenomedamageonanindividualbasis.Foodand

ChemicalToxicology,2008,46:1365-1370.

4.XuWang,XiayuWu,ZQLiang,YunchaoHuang,MichaelFenech*,Jinglun

Xue*.Acomparisonofgenomicinstabilityunderfolicaciddeficiencybetween

breastcancerpatientsandnormalnor-cancercontrolsfromaChinesepopulation

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5.JuanNi,LinLu,MichaelFenech*,XuWang*.FolateDeficiencyinHuman

PeripheralBloodLymphocytesInducesChromosome8AneuploidybutThis

EffectisnotModifiedbyRiboflavin.EnvironmentalandMolecular

Mutagenesis,2010,51(1):15-22.

6.LingLu,JuanNi,TianningZhou,WeijingXu,MichaelFenech*,XuWang*.

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7.GuoX,WangH,NiJ,etal.Geraniinselectivelypromotescytostasisand

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chromosomalinstability.Mutagenesis,2018,33(4):271-281.

8.陈金中,汪旭,薛京伦等.医学分子遗传学.科学出版社,第三~第五版.

9.王秋菊,沈亦平,贺林等.遗传变异分类标准与指南.中国科学:生命科

学,2017,479(6):668-688.

10.中华人民共和国国务院令第717号,《中华人民共和国人类遗传资源管

理条例》,2019.

11.国家卫生健康委,《卫生健康标准管理办法》,2019.

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T/YEMSXX-2022

12.分子遗传学基因检测送检和咨询规范与伦理指导原则2018中国专家共识制

定专家组,《分子遗传学基因检测送检和咨询规范与伦理指导原则2018中国专

家共识》,中国医学杂志,2018,98(28):225-2232.

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目次

前言………………1

1范围……………2

2规范性引用文件………………2

3术语和定义……………………2

4基因组健康检测实验室要求…………………3

5基因组健康检测人员要求……4

6核心技术要素…………………4

7人类遗传资源与信息保护规则………………6

附录A（规范性附录）基因组损伤生物标记信息表…………7

附录B(规范性附录)主要试剂和仪器设备…8

附录C（规范性附录）基因组损伤识别图谱…9

参考文献…………11

T/YEMSXX-2022

基因组健康评价技术规范

1范围

基因组稳定是健康促进、利好公众健康素质的基础遗传学要素。基因组损伤是基因

组健康受到胁迫的生物学标识。

本文件规定了基因组损伤无创检测的细胞分子生物学原理与技术、操作规范。

本文件适用于以人体基因组健康评价为基础的遗传健康咨询，为构建健康管理、健

康生活方式和公共卫生策略为特征的“零级预防”提供科学依据。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件，局部参考：

《遗传变异分类标准与指南》

《ACMG遗传变异分类标准-中文版》

《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》

《分子遗传学基因检测送