生物制药细胞培养技师考试试卷及答案

生物制药细胞培养技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.动物细胞培养常用的基础培养基是______。2.细胞培养中常用的抗生素组合是______。3.超净工作台无菌操作前，紫外线需照射______分钟。4.贴壁细胞传代常用的消化酶是______。5.哺乳动物细胞培养适宜温度为______℃。6.CO₂培养箱的CO₂浓度通常为______%。7.细胞冻存的常用保护剂是______。8.细胞传代前需用______冲洗去除残留血清。9.台盼蓝染色计数时，______细胞会被染成蓝色。10.悬浮细胞培养常用搅拌转速一般不超过______rpm。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.以下属于贴壁依赖型细胞的是（）A.CHO细胞B.Jurkat细胞C.K562细胞D.杂交瘤细胞2.细胞冻存的正确降温速率是（）A.快速降温B.1℃/minC.室温降温D.10℃/min3.细胞计数的常用试剂是（）A.台盼蓝B.甲基蓝C.伊红D.刚果红4.培养基变黄提示细胞代谢产生过多（）A.乳酸B.尿素C.氨基酸D.葡萄糖5.无菌操作不需要的步骤是（）A.戴手套B.点燃酒精灯C.关闭超净台风机D.物品灭菌6.血清的主要作用不包括（）A.提供生长因子B.调节pHC.提供营养D.保护细胞7.消化过度会导致细胞（）A.贴壁率下降B.增殖加快C.污染D.凋亡延迟8.大规模生产适合的培养方式是（）A.静置培养B.转瓶培养C.96孔板D.培养皿9.超净工作台常用风机类型是（）A.水平流B.垂直流C.交叉流D.无风机10.“黑胶虫”污染的有效处理是（）A.换培养基B.加抗生素C.过滤D.丢弃细胞三、多项选择题（每题2分，共20分，多选/少选不得分）1.细胞培养常用灭菌方法包括（）A.高压蒸汽B.过滤除菌C.紫外线D.干热灭菌2.贴壁细胞生长形态有（）A.成纤维样B.上皮样C.淋巴样D.神经样3.细胞冻存步骤包括（）A.离心收细胞B.加冻存液C.梯度降温D.液氮保存4.影响细胞培养的环境因素（）A.温度B.CO₂浓度C.湿度D.光照5.细胞污染类型包括（）A.细菌B.真菌C.支原体D.病毒6.台盼蓝染色原理（）A.活细胞排斥B.死细胞吸收C.活细胞吸收D.死细胞排斥7.无血清培养基优点（）A.成分明确B.避免污染C.简化纯化D.成本更低8.细胞传代目的（）A.防止密度过高B.维持健康C.扩增数量D.去代谢废物9.生物制药常用细胞（）A.CHO细胞B.HEK293细胞C.杂交瘤细胞D.大肠杆菌10.培养基主要成分（）A.氨基酸B.维生素C.无机盐D.血清四、判断题（每题2分，共20分，对√错×）1.超净工作台内可存放食物（）2.冻存液比例为培养基:血清:DMSO=7:2:1（）3.悬浮细胞无需消化即可传代（）4.CO₂作用是维持培养基pH（）5.支原体污染可肉眼观察（）6.贴壁细胞长满后需及时传代（）7.无菌操作在酒精灯火焰上方进行（）8.血清需过滤除菌后使用（）9.计数板计数区域含四个角和中央大格（）10.生物反应器搅拌可增加溶氧（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述细胞传代的基本步骤。2.简述细胞冻存和复苏的注意事项。3.如何判断细胞是否发生细菌污染？4.无血清培养基在生物制药中的优势是什么？六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论支原体污染对生物制药细胞培养的影响及防控措施。2.讨论生物反应器中细胞培养的溶氧控制策略。---答案部分一、填空题1.DMEM（或MEM）2.青霉素-链霉素（双抗）3.304.胰蛋白酶5.376.57.二甲基亚砜（DMSO）8.PBS9.死10.100二、单项选择题1.A2.B3.A4.A5.C6.B7.A8.B9.A10.D三、多项选择题1.ABCD2.ABD3.ABCD4.ABC5.ABCD6.AB7.ABC8.ABCD9.ABC10.ABCD四、判断题1.×2.√3.√4.√5.×6.√7.√8.√9.√10.√五、简答题1.①弃旧培养基，PBS冲洗1-2次；②加胰酶-EDTA消化至细胞变圆；③加含血清培养基终止，吹打分散；④离心（1000rpm，5min）弃上清；⑤重悬细胞，按1:2-1:10分装新瓶；⑥37℃、5%CO₂培养，记录信息。2.冻存：①细胞对数生长期（存活率>90%）；②冻存液比例准确；③梯度降温（-80℃过夜→液氮）；④标记清晰。复苏：①37℃快速解冻；②加预热培养基稀释DMSO；③离心弃冻存液；④重悬后培养；⑤24h换液。3.①培养基浑浊、絮状沉淀；②pH下降（变黄）；③高倍镜见细小运动颗粒；④细胞停滞、脱落；⑤可取样做细菌培养确认。4.①成分明确，避免未知杂质；②减少病毒/支原体污染；③简化下游纯化；④批次稳定，工艺波动小；⑤支持部分细胞高表达。六、讨论题1.影响：①细胞代谢异常，生长缓慢；②药物残留支原体，不符合GMP；③数据不可靠。防控：①源头控制（无菌试剂、支原体-free细胞）；②定期检测（PCR、染色）；③污染后丢弃细胞，消毒环境；④严格无