鼠疫病原学检验的实验室质量控制培训课件

鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de实验室质量控制质量控制de定义鼠疫病原学检验de质量控制方法鼠疫病原学检验方法动物间鼠疫疫情de实验室复判2鼠疫病原学检验de实验室质量控制实验室质量控制de定义3鼠疫病原学检验de实验室质量控制实验室质量控制de定义质量控制(QualityContro,lQ.C)是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状de一个管理过程.

鉴于鼠疫细菌学检验de重要性,有必要对其进行规范化管理.鼠疫细菌学检验质控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立de操作程序体系.4鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de质量控制方法5鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控(InternalQualityControlIQC)是指一个实验室内部对所有影响质量de各个环节进行系统控制,是由实验室内部制定并实施de,是质量保证de核心和基础.目de是控制本实验室常规工作de精密度,提高常规工作前后de一致性.室间质控(ExternalQualityAssessment简称EQA)简称室间质评.室间质控由上级业务单位采用一系列de办法连续地、客观地评价各实验室de试验结果,并发现室内质控不易发现de不准确性,了解各实验室之间结果de差异,并帮助校正,使具有可比性,这种评价是一种回顾性评价.室内质控主要监测试验结果de精密度,而室间质控主要控制实验结果de准确度,不互相替代,参与室间质控de试验室应先做好室内质控.鼠疫病原学检验de质量控制方法6鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de质量控制方法人员与组织管理仪器设备de质控疑似鼠疫材料de采取、保存和运输培养基、染色液、试剂盒等de质量控制鼠疫细菌检验程序及结果判定报告卡de书写、疫情上报及交换室内质控7鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控扎实de基础教育和专业知识职业道德和高度de责任心质量管理体系各实验室制定SOP专业化de技能培训继续教育人员与组织管理8鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控性能试验正确贮存无菌试验诊断试剂盒(噬菌体等)培养基量pH值试剂de质量控制9鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控生物安全柜显微镜高压锅离心机培养箱冰箱仪器设备10鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de质量控制方法设立参比实验室发质控物进行检查评价定期举办各级培训班派观察员到实验室进行检查指导室间质控方法11鼠疫病原学检验de实验室质量控制室间质控de一般检查项目实验室de布局SOP制订及执行情况实验室安全防护和污染物处理室内质控执行情况及各种纪录发放模拟标本(菌种),规定时间内反馈至上级业务单位

以pH值、软硬度、鼠疫菌生长数量(活菌数)等为综合指标对培养基进行质控和用已知菌对噬菌体进行质控盲点试验,模拟标本混入监测标本常规测定对结果进行评价,分析错误原因12鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验方法13鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验方法染色镜检培养特性噬菌体裂解动物实验基因检测14鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验方法鼠疫病原体发现:一八九四年,在香港,日本学者北里柴三郎和法国学者亚力山大耶尔森二氏.分类位置:肠杆菌科耶尔森菌属.生物学特性分子生物学特性:六MD、四五MD、六五MD三种质粒；目前已知IS一零零、IS二八五、IS一五四一、IS一六六一四种插入序列,分布于鼠疫菌质粒de染色体基因组中.毒力决定因子:F一抗原,VWa抗原,Pstl,Pgm分型:古典、中世纪、东方、田鼠变种四个生物变种；五个群（A、B、C、D、E群）,二一个生态型.15鼠疫病原学检验de实验室质量控制

染色镜检革兰氏染色美兰染色典型de鼠疫菌是短而粗、两端钝圆、两极浓染de椭圆形小杆菌,革兰氏染色阴性.16鼠疫病原学检验de实验室质量控制细菌培养17鼠疫病原学检验de实验室质量控制

病原学在普通培养基上二八－三零℃经二四h,肉眼可见形成薄薄一层淡灰色小菌落,圆形,有光泽,中心稍突起.透过光线呈灰白色或淡青色,菌落较干燥,镜下:中央隆起中心发暗,有粗糙颗粒（黄褐色）周围有薄而透明de花边,呈锯齿状.培养特性18鼠疫病原学检验de实验室质量控制噬菌体裂解实验二八－三零℃二四h噬菌带明显20鼠疫病原学检验de实验室质量控制观察一-九天,可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性.动物实验21鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫菌de基因检测病原学de检测22鼠疫病原学检验de实验室质量控制DNA提取水煮法提取可疑鼠疫菌DNA对于脏器标本,在强毒实验室以无菌手续取动物de各种脏器(心、肝、脾、肺)约一g,加入到等量生理盐水中,研碎,一零零℃水浴中煮沸一零min,离心,取上清直接用作PCR模板对于培养可疑鼠疫菌,在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有五零零ul蒸馏水（生理盐水）de一.五ml离心管中,于沸水浴中煮一零min,离心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作为PCR模板.细菌基因组DNA提取试剂盒提取鼠疫菌基因组DNA操作方法可根据试剂盒说明书进行操作.鼠疫菌de基因检测23鼠疫病原学检验de实验室质量控制体系配制PCR-bufferdNTP引物（二对各一ul）TaqDNA聚合酶模板纯水总体积二五ul二.五ul二ul四ul一ul（二.五U)一ul一四.五ul鼠疫菌de基因检测24鼠疫病原学检验de实验室质量控制PCR扩增九三℃五min九零℃一min六零℃一min七二℃一min三零cycle七二℃一零min四℃保存鼠疫菌de基因检测25鼠疫病原学检验de实验室质量控制琼脂糖凝胶鼠疫菌de基因检测26鼠疫病原学检验de实验室质量控制拍照鼠疫菌de基因检测27鼠疫病原学检验de实验室质量控制脏器悬液基因检测:FI特异性片二四九bp,Pla特异性片四五六bp28鼠疫病原学检验de实验室质量控制菌悬液基因检测:FI特异性片二四九bp,Pla特异性片四五六bp29鼠疫病原学检验de实验室质量控制PCR操作鼠疫菌株de复苏、培养、传代、核酸提取均在BSL-二实验室操作其余PCR过程在普通实验室操作30鼠疫病原学检验de实验室质量控制动物间鼠疫疫情de实验室复判31鼠疫病原学检验de实验室质量控制动物间鼠疫疫情de实验室复判复判流程日常监测胶体金抗体阳性间接血凝（抑制）阳性自毙鼠培养鉴定为阳性胶体金抗原阳性反向血凝（抑制）阳性培养鉴定为阳性报自治区疾控中心复判32鼠疫病原学检验de实验室质量控制33鼠疫病原学检验de实验室质量控制谢谢大家!

电子邮箱:xpma零八二三@一六三.com

电话:零九五一-四零九五一二四34鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de实验室质量控制质量控制de定义鼠疫病原学检验de质量控制方法鼠疫病原学检验方法动物间鼠疫疫情de实验室复判36鼠疫病原学检验de实验室质量控制实验室质量控制de定义37鼠疫病原学检验de实验室质量控制实验室质量控制de定义质量控制(QualityContro,lQ.C)是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状de一个管理过程.

鉴于鼠疫细菌学检验de重要性,有必要对其进行规范化管理.鼠疫细菌学检验质控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立de操作程序体系.38鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de质量控制方法39鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控(InternalQualityControlIQC)是指一个实验室内部对所有影响质量de各个环节进行系统控制,是由实验室内部制定并实施de,是质量保证de核心和基础.目de是控制本实验室常规工作de精密度,提高常规工作前后de一致性.室间质控(ExternalQualityAssessment简称EQA)简称室间质评.室间质控由上级业务单位采用一系列de办法连续地、客观地评价各实验室de试验结果,并发现室内质控不易发现de不准确性,了解各实验室之间结果de差异,并帮助校正,使具有可比性,这种评价是一种回顾性评价.室内质控主要监测试验结果de精密度,而室间质控主要控制实验结果de准确度,不互相替代,参与室间质控de试验室应先做好室内质控.鼠疫病原学检验de质量控制方法40鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de质量控制方法人员与组织管理仪器设备de质控疑似鼠疫材料de采取、保存和运输培养基、染色液、试剂盒等de质量控制鼠疫细菌检验程序及结果判定报告卡de书写、疫情上报及交换室内质控41鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控扎实de基础教育和专业知识职业道德和高度de责任心质量管理体系各实验室制定SOP专业化de技能培训继续教育人员与组织管理42鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控性能试验正确贮存无菌试验诊断试剂盒(噬菌体等)培养基量pH值试剂de质量控制43鼠疫病原学检验de实验室质量控制室内质控生物安全柜显微镜高压锅离心机培养箱冰箱仪器设备44鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验de质量控制方法设立参比实验室发质控物进行检查评价定期举办各级培训班派观察员到实验室进行检查指导室间质控方法45鼠疫病原学检验de实验室质量控制室间质控de一般检查项目实验室de布局SOP制订及执行情况实验室安全防护和污染物处理室内质控执行情况及各种纪录发放模拟标本(菌种),规定时间内反馈至上级业务单位

以pH值、软硬度、鼠疫菌生长数量(活菌数)等为综合指标对培养基进行质控和用已知菌对噬菌体进行质控盲点试验,模拟标本混入监测标本常规测定对结果进行评价,分析错误原因46鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验方法47鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验方法染色镜检培养特性噬菌体裂解动物实验基因检测48鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫病原学检验方法鼠疫病原体发现:一八九四年,在香港,日本学者北里柴三郎和法国学者亚力山大耶尔森二氏.分类位置:肠杆菌科耶尔森菌属.生物学特性分子生物学特性:六MD、四五MD、六五MD三种质粒；目前已知IS一零零、IS二八五、IS一五四一、IS一六六一四种插入序列,分布于鼠疫菌质粒de染色体基因组中.毒力决定因子:F一抗原,VWa抗原,Pstl,Pgm分型:古典、中世纪、东方、田鼠变种四个生物变种；五个群（A、B、C、D、E群）,二一个生态型.49鼠疫病原学检验de实验室质量控制

染色镜检革兰氏染色美兰染色典型de鼠疫菌是短而粗、两端钝圆、两极浓染de椭圆形小杆菌,革兰氏染色阴性.50鼠疫病原学检验de实验室质量控制细菌培养51鼠疫病原学检验de实验室质量控制

病原学在普通培养基上二八－三零℃经二四h,肉眼可见形成薄薄一层淡灰色小菌落,圆形,有光泽,中心稍突起.透过光线呈灰白色或淡青色,菌落较干燥,镜下:中央隆起中心发暗,有粗糙颗粒（黄褐色）周围有薄而透明de花边,呈锯齿状.培养特性52鼠疫病原学检验de实验室质量控制噬菌体裂解实验二八－三零℃二四h噬菌带明显54鼠疫病原学检验de实验室质量控制观察一-九天,可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性.动物实验55鼠疫病原学检验de实验室质量控制鼠疫菌de基因检测病原学de检测56鼠疫病原学检验de实验室质量控制DNA提取水煮法提取可疑鼠疫菌DNA对于脏器标本,在强毒实验室以无菌手续取动物de各种脏器(心、肝、脾、肺)约一g,加入到等量生理盐水中,研碎,一零零℃水浴中煮沸一零min,离心,取上清直接用作PCR模板对于培养可疑鼠疫菌,在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有五零零ul蒸馏水（生理盐水）de一.五ml离心管中,于沸水浴中煮一零min,离心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作为PCR模板.细菌基因组DNA提取试剂盒提取鼠疫菌基因组DNA操作方法可根据试剂盒说明书进行操作.鼠疫菌de基因检测57鼠疫病原学检验de实验室质量控制体系配制PCR-bufferdNTP引物（二对各一ul）TaqDNA聚合酶模板纯水总体积二五ul二.五ul二ul四ul一ul（二.五U)一ul一四.五ul鼠疫菌de基因检测58鼠疫病原学检验de实验室质量控制PCR扩增九三℃五m