一个弓形虫棒状体蛋白基因缺失株感染小鼠脏器的弓形虫荷载量检测

[31]；而ROP46基因缺失株的入侵效率降低，显著延长感染小鼠的存活时间。实时荧光定量PCR法检测的准确性、灵敏度高。不仅能够定量检测虫体荷载量，还可用于验证基因缺失株的构建效果。本研究采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）技术检测小鼠脏器中的弓形虫荷载量，通过针对弓形虫529-bp重复序列设计特异性引物，并结合SYBRGreen荧光染料，实现对弓形虫DNA的靶向扩增与实时监测。通过对基因缺失株和野生感染株小鼠不同脏器的弓形虫荷载量监测统计，来鉴定弓形虫基因敲除株对小鼠致病性的影响。本研究采用小鼠U6基因作为内参对DNA浓度进行标准化，标准曲线线性良好，表明标准化过程有效减少了样本间差异。然而，qPCR检测中部分样本的Ct值离散度较高，可能是基因的扩增效率低或基因本身表达量较低。在后续试验中通过重新设计引物或提高模板的添加量，来进一步提升数据稳定性。通过研究敲除弓形虫棒状体蛋白基因对弓形虫在小鼠脏器弓形虫的感染荷载量，可以深入了解弓形虫基因缺失株在小鼠体内的感染性，初步探究该弱毒基因缺失株的免疫应用安全性，弓形虫棒状体蛋白基因缺失作为减毒疫苗候选株提供实验依据，为弓形虫病的预防、诊断和治疗提供重要依据。本论文通过qPCR技术检测了野生株（RH）感染组小鼠与弓形虫棒状体蛋白基因缺失株（RHΔrophy15）感染组小鼠的4个脏器（心脏、眼、小肠和肌肉）中的弓形虫荷载量，论文发现RHΔrophy15的感染组的荷载量低于RH组感染的荷载量，但组间差异不显著。说明ROPHY15基因缺失不影响弓形虫RH株在小鼠体内的增殖能力，RHΔrophy15毒力降低可能的与棒状体ROPHY15调控宿主免疫能力有关，需进一步探究。

参考文献朱亭仪,盛文伟,朱晓英,等.弓形虫流行病学及防治研究进展[J].现代畜牧兽医,2025,（02）:78-83.DubeyJP,MurataFHA,Cerqueira-CézarCK,etal.Congenitaltoxoplasmosisinhumans:anupdateofworldwiderateofcongenitalinfections[J].Parasitology,2021;148（12）:1406-1416.沈继龙,余莉.我国弓形虫病流行概况及防治基础研究进展[J].中国血吸虫病防治杂志,2019,31（1）:71.ZhouG,BaiS,LiY,etal.Preliminaryobservationonthedevelopmentanddynamicchangesofchronictoxoplasmosisinmice[J].Chinesejournalofschistosomiasiscontrol,2024,36（3）:304-309.Xiao-YiL,Ze-DongW,SaeedE,etal.Toxoplasmagondiioocyst-driveninfectioninpigs,chickensandhumansinnortheasternChina[J].BMCveterinaryresearch,2019,15（1）:366.余洪涛,王建举.弓形虫病流行概况及发病机理研究进展[J].上海畜牧兽医通讯,2018,（05）:39-41.DaherD,ShaghlilA,SobhE,etal.ComprehensiveoverviewofToxoplasmagondii-inducedandassociateddiseases[J].Pathogens.2021;10（11）:1351.Fernández-EscobarM,Calero-BernalR,BenavidesJ,etal.IsolationandgeneticcharacterizationofToxoplasmagondiiinSpanishsheepflocks[J].ParasitVectors,2020;13（1）:396.刘侠,阚松鹤,林青.弓形虫病研究进展[J].动物医学进展,2015（1）:101-105.马荣,孙慧,闫歌,等.弓形虫棒状体蛋白及其核酸疫苗研究现状[J].中国血吸虫病防治杂志,2018,30（01）:94-98.DlugonskaH.Toxoplasmarhoptries:uniquesecretoryorganellesandsourceofpromisingvaccineproteinsforimmunopreventionofToxoplasmosis[J].JournalofBiomedicineandBiotechnology,2008,2008.LeiT，WangH，LiuJ，etal.ROP18isakeyfactorresponsibleforvirulencedifferencebetweenToxoplasmagondiiandNeosporacaninum[J].PLoSOne，2014，9（6）：e99744.尹昆,张佃波,闫歌.弓形虫毒力决定因子Rop18的研究进展[J].中国病原生物学杂志,2013，8（11）：1051⁃1055.ChengL，ChenY，ChenLJ，etal.InteractionsbetweentheROP18kinaseandhostcellproteinsthataidintheparasitismofToxoplasmagondii[J].ActaTrop，2012，122（3）：255⁃260.VaziniH,GhafarifarF,SharifiZ,etal.EvaluationofimmuneresponsesinducedbyGRA7andROP2genesbyDNAvaccinecocktailsagainstacutetoxoplasmosisinBALB/cmice[J].Avicennajournalofmedicalbiotechnology,2018,10(1):2.孟欣,徐丰慧,崔平.弓形虫入侵过程中主要分泌蛋白的研究进展[J].现代畜牧兽医,2024,（04）:91-96.王成双,马秀英,郑君,等.弓形虫Rop46基因敲除虫株的构建及其生长复制能力评价[J].中国预防兽医学报,2016,38（04）:312-315.MahboubehB,JalalB,PezhmanF,etal.Developmentofaquantitativereal-timePCRassayfordetectionofToxoplasmagondiiinbrainsamples[J].Iranianjournalofparasitology,2021,16（4）:621-630.候照峰,王尚尚,贾红,等.弓形虫荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[J].中国兽医杂志,2015,51（01）:3-6.UdoR,StéphaneB,DominiqueK,etal.ComparisonoftwoDNAtargetsforthediagnosisofToxoplasmosisbyreal-timePCRusingfluorescenceresonanceenergytransferhybridizationprobes[J].BMCInfectiousDiseases,2003,3（1）:7.Gong-zhenL,BinW,Hong-faW.AdvancesinresearchofToxoplasmagondiirhoptryproteinROP16[J].Chinesejournalofschistosomiasiscontrol,2015,27（2）:217-20.王成双.弓形虫ROP46基因缺失虫株构建及其生物学特性分析[D].黑龙江八一农垦大学,2016.LiD,HanMCao,Y,etal.ProtectiveeffectagainsttoxoplasmosisinBALB/CmicevaccinatedwithrecombinantToxoplasmagondiiCDPK3,GRA35,andROP46proteincocktailvaccine[J].Vaccine,2024,42（6）:1342-1351.白梦捷.弓形虫致密颗粒蛋白基因缺失株的构建及其生物学特性研究[D].中国农业科学院,2019（08）.BehnkeMS,FentressSJ,MashayekhiM,etal.ThepolymorphicpseudokinaseROP5controlsvirulenceinToxoplasmagondiibyregulatingtheactivekinaseROP18[J].PLoSpathogens,2012,8（11）:e1002992.HunterCA,SibleyLD.ModulationofinnateimmunitybyToxoplasmagondiivirulenceeffectors[J].NatureReviewsMicrobiology,2012,10（11）:766-778.YanWU,XinZ,JinLI,etal.ProgressofresearchesontoxoplasmosisvaccinesbasedontheCRISPR/Cas9technology[J].ChineseJournalofSchistosomiasisControl,2024,36（5）:542.吕元聪.中国弓形虫病流行病学研究近况[J].广西医学,2002,24（1）:48-52.SullivanJrWJ,JeffersV.MechanismsofToxoplasmagondiipersistenceandlatency[J].FEMSmicrobiologyreviews,2012,36（3）:717-733.殷荷,马磊,党甜甜,等.刚地弓