医学检验科分子生物学检验技师考试试卷及答案

医学检验科分子生物学检验技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.核酸提取中蛋白酶K的主要作用是______。2.实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI结合于______。3.基因芯片的核心原理是______。4.Sanger测序的终止剂是______。5.提取RNA时需加入的RNase抑制剂是______（举1种）。6.PCR反应中Taq酶的最适延伸温度是______℃。7.微卫星DNA由______个核苷酸重复序列组成。8.液体活检常用标本包括ctDNA、CTC和______。9.CRISPR/Cas9中gRNA的作用是______。10.等位基因特异性PCR（ARMS-PCR）可检测______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.可同时提取DNA和RNA的方法是（）A.酚-氯仿抽提法B.硅胶膜吸附法C.盐析法D.异丙醇沉淀法2.qPCR中Ct值是指（）A.扩增达阈值的循环数B.平台期循环数C.初始模板量D.扩增效率3.直接检测基因表达水平的技术是（）A.PCRB.RT-PCRC.FISHD.基因芯片4.FISH探针长度一般为（）A.10-20bpB.100-1000bpC.1-10kbD.>10kb5.地中海贫血基因诊断常用（）A.PCR-RFLPB.焦磷酸测序C.宏基因组测序D.液体活检6.ctDNA主要来源是（）A.正常细胞凋亡B.肿瘤细胞坏死C.免疫细胞分泌D.红细胞破裂7.与NGS相比，Sanger测序的特点是（）A.通量高B.读长长C.成本低D.均需PCR8.检测融合基因的技术不包括（）A.FISHB.PCRC.测序D.酶切分型9.核酸杂交特异性取决于（）A.探针浓度B.杂交温度C.碱基互补D.杂交时间10.导致PCR失败的因素是（）A.引物二聚体B.模板不足C.退火温度过高D.以上都是三、多项选择题（每题2分，共20分）1.核酸提取关键步骤包括（）A.细胞裂解B.核酸分离C.核酸纯化D.核酸定量2.qPCR常用荧光探针/染料有（）A.SYBRGreenIB.TaqMan探针C.MolecularBeaconD.EvaGreen3.基因诊断应用领域（）A.遗传性疾病B.肿瘤C.感染性疾病D.产前诊断4.液体活检优势（）A.无创B.动态监测C.早期检测D.替代组织活检5.基因分型技术有（）A.PCR-RFLPB.ARMS-PCRC.基因芯片D.焦磷酸测序6.FISH应用包括（）A.染色体数目异常B.融合基因C.微缺失/重复D.基因表达7.影响PCR效率的因素（）A.引物设计B.退火温度C.模板纯度D.Mg²⁺浓度8.遗传性疾病诊断标本（）A.外周血B.羊水C.绒毛D.唾液9.NGS应用包括（）A.全基因组测序B.全外显子组C.靶向测序D.宏基因组测序10.基因突变类型（）A.点突变B.插入/缺失C.重复扩增D.染色体易位四、判断题（每题2分，共20分）1.提取RNA需用DEPC处理试剂防RNase污染（）2.qPCR中Ct值与初始模板量呈正相关（）3.FISH可检测细胞内RNA表达（）4.Sanger测序读长为500-1000bp（）5.ctDNA是完整基因组DNA（）6.PCR退火温度越高特异性越好（）7.基因芯片可同时检测多基因表达（）8.遗传性疾病仅需检测编码区（）9.CRISPR/Cas9可用于基因编辑和检测（）10.RFLP可检测所有点突变（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述酚-氯仿抽提法提取核酸的原理。2.qPCR与普通PCR的主要区别是什么？3.简述FISH技术的原理及临床应用。4.液体活检的主要标本类型及临床意义。六、讨论题（每题5分，共10分）1.结合临床，讨论PCR在感染性疾病诊断中的价值及局限性。2.讨论基因芯片在肿瘤个体化治疗中的应用及挑战。---参考答案一、填空题1.降解蛋白质，去除核酸酶污染2.双链DNA小沟3.核酸分子杂交4.双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）5.RNasin（或DEPC处理试剂）6.727.2-68.外泌体9.引导Cas9识别靶DNA序列10.点突变二、单项选择题1.A2.A3.B4.B5.A6.B7.B8.D9.C10.D三、多项选择题1.ABC2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABCD6.ABC7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABC四、判断题1.√2.×3.√4.√5.×6.√7.√8.×9.√10.×五、简答题1.酚-氯仿抽提原理：利用核酸与蛋白质等杂质在有机溶剂中的溶解度差异。酚变性蛋白质，氯仿加速相分离并去除酚残留；离心后核酸溶于水相，蛋白质、脂类溶于有机相，取上层水相经乙醇沉淀获得纯化核酸，可同时提取DNA和RNA。2.qPCR与普通PCR区别：①qPCR实时监测荧光信号，普通PCR仅终点检测；②qPCR可定量初始模板（Ct值+标准曲线），普通PCR仅定性/半定量；③qPCR无电泳污染风险，普通PCR需电泳；④qPCR需验证扩增效率（90%-110%），普通PCR无此要求。3.FISH原理及应用：原理是荧光标记探针与靶核酸（DNA/RNA）互补杂交，显微镜观察信号定位。应用：①染色体数目异常（21三体）；②融合基因（BCR-ABL）；③微缺失/重复（Prader-Willi综合征）；④肿瘤细胞遗传学分析（ALK融合）。4.液体活检标本及意义：标本为ctDNA、CTC、外泌体。意义：①ctDNA检测肿瘤突变/甲基化，指导靶向/免疫治疗；②CTC评估转移风险；③外泌体辅助诊断预后。优势：无创、动态监测，弥补组织活检局限性。六、讨论题1.PCR在感染性疾病中的价值与局限：价值：①快速（数小时出结果）；②敏感（低拷贝病原体检测，如HIV）；③特异（针对特异性序列）；④定量（HBV-DNA指导抗病毒）。局限：①易污染（扩增产物假阳性）；②无法区分活菌/死菌；③成本高（qPCR）；④需专业设备。临床需结合症状、培养等综合判断。2.基因芯片在肿瘤个体化治疗中的应用与挑战：应用：①检测驱动突变（EGFR/K