T∕CVMA 393-2026 犬猫曼氏迭宫绦虫检验技术规范

中国兽医协会发布I请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。曼氏迭宫绦虫（Spirometramansoni）是犬、猫等食肉动物常见的肠道寄生绦虫之一，其成虫主要PCR扩增、结果解释和综合判定等环节可能存在操作差异，容易影响检测结果的准确性、可重复性和验技术要求，将形态学检查与分子生物学检测相结合，以提高犬猫曼氏迭为此，制定本文件，旨在规范犬猫曼氏迭宫绦虫虫卵、裂头蚴和成虫的样本采集、实验室检查、PCR检测和结果判定流程，为犬猫曼氏迭宫绦虫感染的实验室诊断、感染监测、相关流行病学调查及猫寄生虫病诊断工作的标准化，为伴侣动物健康管理、寄生虫病防控和公1犬猫曼氏迭宫绦虫检验技术规范本文件规定了犬猫曼氏迭宫绦虫虫卵、裂头蚴和成虫的检查方法及结属于假叶目（Pseudophyllidea）迭宫绦虫属（Spirometra）的一种寄生虫。其成虫主要寄生于犬、宿主多为蛙类等两栖动物，蛇类、鸟类及部分哺乳动物可作为转续宿即曼氏迭宫绦虫的实尾蚴（plerocercoid）。虫体呈白色长带状，具有伸缩性，头部膨大，末端钝属于假叶目（Pseudophyllidea）迭宫绦虫属（Spirometra）的一种寄生虫。其成虫主要寄生于犬、宿主多为蛙类等两栖动物，蛇类、鸟类及部分哺乳动物可作为转续宿2宿主吞食后，幼虫可在终末宿主体内继续发育。本文件中主要指蛇类、鸟类及部分小型哺乳4缩略语PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）5.1虫卵检测采用尼龙筛水洗沉淀法采集虫卵。先将每份粪便充分混匀，准确称取5g置于烧杯中，加入蒸馏~2滴置于载玻片上，加盖玻片后镜检，必要时可加碘液辅助观察。5.1.3镜检5.2疑似感染来源样本中裂头蚴检测5.2.2剖检法横皱褶，后端多呈钝圆形，活体伸缩能力强。必要时进行PCR35.3曼氏迭宫绦虫成虫检测片中部可见螺旋状蟠曲子宫，孕节中尤为明显。必要时进行PCRPCR扩增仪、核酸电泳仪、凝胶成像分析系统、高压蒸汽灭菌器、微量可调移液器及配套4阳性对照出现与附录C.1所列目标片段大小相符的特异性条带，且阴性对照无条带出现时，试验7.2如观察到疑似裂头蚴或虫体，并用PCR方法检测结果为阳性，则可判定为曼5中，然后将琼脂糖溶液倒入电泳板上，待凝固后取下6B.1曼氏迭宫绦虫cox1基因片段参考5’-GTATTGATTTTGCCTGGTTTTGGTATGGTAAGTCATGTGTGTAGTAAATGATACTTTTGGTTTTTATGGTTTACTGTTTGCTATGTTTTCTATAGTGTGTTTAGGTAGCGTTGGGGCCACCACATGTTTACTGTGGGGTTGGATGTGAAGACTGCTGTTTTCTTTAGTTCATGATTATTGGGGTTCCCACGGGTATAAAGGTGTTTTCTTGGCTTTATATGATTTTAAATGTTTCGTTGCGTGAGCCTGTGTTTTGGTGGGTTTTATCTTTTATTGTGTTGTTTACTATGGGTGGTGTTACTGGTATAATTCTTTCTGCTTGTGTGTTGGATAAAATTTTGCATGACACGTGGTTTGGCT-3’注：本序列为PCR产物测序后的参考比对片段，不作为引物结合位点展示。PCR扩增引物B.2曼氏迭宫绦虫ITS基因片段参考序列（GenBa注：本序列为PCR产物测序后的参考比对片段，不作为引物结合位点展示。PCR扩增引物7表C.1PCR扩增引物名称与序列NC-FNC-R体积(μL）TaqPCRMasterMix反———118119[1]谭磊,王爱兵,周湘,等.基于ITS基因分析黑斑蛙裂头蚴报,2017,37(10):1924-1927.[2]刘自逵,刘国华,戴荣四,等.湖南省猬迭宫绦虫ITS及5.8S报,2011,31(02):209-212.[3]贺峻琳,龚腾芳,谢馨锐,等.不同宿主来源猬迭宫绦虫线粒体pcox1、pcox3[4]BowlesJ,BlairD,McManusDmitochondrialDNAsequencing[J].MolecularandBiochemicalParasitology,1992,54(2):1tonNB,HosteH,etal.RapidsequencingofrDNAfrom