临床分子生物学检验技术试题及答案

临床分子生物学检验技术试题及答案一、单项选择题（本大题共30小题，每小题1.5分，共45分。每小题只有一个选项是符合题意的）1.临床上进行分子生物学检验时，最常用的核酸提取标本类型是（）A.尿液B.粪便C.全血（抗凝）D.汗液2.关于核酸变性温度（Tm值）的描述，错误的是（）A.Tm值是指DNA分子中50%的双链结构解开时的温度B.G-C碱基对含量越高，Tm值越高A.DNA分子越长，Tm值越高D.溶液离子强度越低，Tm值越高3.在实时荧光定量PCR中，Ct值是指（）A.荧光信号达到阈值时所经历的循环数B.荧光信号达到最大值时所经历的循环数C.扩增产物达到平台期时的循环数D.扣除背景荧光后的荧光强度值4.下列哪种酶是PCR反应中常用的耐热DNA聚合酶？（）A.限制性内切酶B.TaqDNA聚合酶C.反转录酶D.DNA连接酶5.乙型肝炎病毒（HBV）感染诊断中，最灵敏且能反映病毒复制活跃程度的指标是（）A.HBsAgB.HBeAgC.HBV-DNA载量D.抗-HBcIgM6.Southern印迹杂交主要用于检测（）A.DNAB.RNAC.蛋白质D.糖类7.人类基因组计划（HGP）完成的主要成果是绘制了人类基因组的（）A.物理图谱B.遗传图谱C.序列图谱D.转录图谱8.下列关于PCR反应体系的描述，正确的是（）A.引物浓度越高越好B.dNTP浓度通常在200μmol/L左右C.Mg2+浓度对PCR结果影响不大，无需精确控制D.模板DNA量越大，扩增效率越高9.在临床分子检验实验室分区管理中，产物分析区通常处于气流压力的（）A.正压状态B.负压状态C.常压状态D.高压状态10.用于检测基因点突变的分子生物学技术，不包括（）A.PCR-RFLPB.等位基因特异性PCR（AS-PCR）C.Sanger测序D.WesternBlot11.逆转录PCR（RT-PCR）的主要目的是（）A.扩增DNAB.将RNA逆转录为cDNA，再扩增特定基因C.检测蛋白质表达水平D.修复损伤的DNA12.下列哪项不是临床分子生物学检验室内质量控制的主要指标？（）A.阴性对照品是否出现假阳性B.阳性对照品的Ct值是否在允许范围内C.扩增曲线的形态是否典型D.检验人员的学历高低13.人类基因组中，含量最丰富、重复次数最高的重复序列是（）A.卫星DNAB.小卫星DNAC.微卫星DNAD.散在重复序列14.某患者进行地中海贫血基因检测，结果提示α-地中海贫血-1缺失杂合子（--/αA.正常人B.静止型携带者C.轻型患者（标准型）D.HbH病15.Sanger测序法利用的终止剂是（）A.ddNTP（双脱氧核苷三磷酸）B.dNTP（脱氧核苷三磷酸）C.NTP（核苷三磷酸）D.dNDP16.在核酸提取过程中，使用酚-氯仿混合液的主要目的是（）A.沉淀蛋白质B.变性DNAC.抑制核酸酶D.调节pH值17.下列关于实时荧光PCR熔解曲线分析的描述，正确的是（）A.只能用于定性分析B.熔解温度（Tm值）取决于扩增片段的长度、GC含量和碱基序列C.熔解曲线为单峰说明无非特异性扩增D.熔解曲线分析不能区分SNP18.19号染色体上载脂蛋白E（ApoE）基因的多态性检测主要用于评估（）A.糖尿病风险B.阿尔茨海默病风险及血脂代谢C.高血压风险D.肝癌风险19.下列哪种技术属于“下一代测序”（NGS）技术？（）A.焦磷酸测序B.Sanger测序C.杂交测序D.Maxam-Gilbert测序20.临床基因扩增检验实验室的验收和开展项目必须经过（）A.医院内部批准即可B.省级卫生行政部门审核批准C.市级疾控中心验收D.只要仪器设备到位即可21.引物设计的基本原则中，要求3'端末端碱基最好是（）A.TB.C或GC.AD.任意碱基22.利用分子生物学技术进行产前诊断，采集绒毛或羊水细胞的最佳时间是（）A.绒毛：孕6-9周；羊水：孕16-22周B.绒毛：孕12-14周；羊水：孕24-28周C.绒毛：孕10-12周；羊水：孕30-32周D.绒毛：孕4-6周；羊水：孕12-14周23.检测HPV（人乳头瘤病毒）感染的高危型别，临床上最常用的分子方法是（）A.细菌培养B.实时荧光PCR分型检测C.ELISAD.显微镜镜检24.下列关于基因芯片技术的描述，错误的是（）A.高通量、微型化、自动化B.基本原理是核酸分子杂交C.可以同时检测数千个基因D.不能用于基因表达谱分析25.质粒DNA提取中，碱裂解法的主要成分不包括（）A.NaOHB.SDSC.酚D.乙酸钾26.CYP450酶系基因多态性检测的主要临床意义是（）A.诊断肿瘤B.指导临床个体化用药（药物代谢动力学）C.诊断传染病D.检测微量元素27.在数字PCR（dPCR）中，结果通过什么方式读取？（）A.荧光信号的强度随循环数的变化B.终点的荧光信号阳性或阴性微滴计数C.电泳条带的亮度D.杂交信号的斑点颜色28.下列哪种情况会导致PCR出现假阴性结果？（）A.反应体系中混入了微量扩增产物B.模板DNA浓度过高C.反应管未盖紧导致蒸发D.引物二聚体形成29.HLA（人类白细胞抗原）基因分型在临床上主要用于（）A.亲子鉴定B.器官移植配型C.诊断遗传病D.诊断糖尿病30.下列关于核酸纯度鉴定的指标，正确的是（）A.A260/A280比值在1.8-2.0之间表示纯度较好（DNA）B.A260/A280比值在0.5-1.0之间表示纯度较好（DNA）C.A260/A230比值越低越好D.只需要测定A260值即可二、多项选择题（本大题共10小题，每小题2分，共20分。每小题有两个或两个以上选项是符合题意的，未选全或选错均不得分）31.临床分子生物学检验中，防止PCR污染的措施包括（）A.严格的实验室分区（试剂准备、样本制备、扩增、产物分析）B.使用UV灯照射破坏残留的DNAC.使用dUTP和UNG酶系统D.正向移液操作E.定期更换高压灭菌的移液器枪头和耗材32.下列关于实时荧光定量PCR的化学原理，属于探针法的是（）A.SYBRGreenIB.TaqMan探针C.分子信标D.Scorpion探针E.LNA探针33.基因突变的类型主要包括（）A.点突变（碱基置换）B.插入突变C.缺失突变D.动态突变E.染色体易位34.下列疾病中，适合进行分子生物学检验的有（）A.遗传性球形红细胞增多症B.苯丙酮尿症（PKU）C.新型冠状病毒感染（COVID-19）D.非小细胞肺癌（EGFR突变检测）E.细菌性痢疾35.评价核酸提取质量的方法有（）A.紫外分光光度法测定OD值B.琼脂糖凝胶电泳检测条带完整性C.荧光染料法测定浓度D.PCR扩增看有无条带E.肉眼观察溶液颜色36.关于微卫星DNA（STR）分析，下列说法正确的有（）A.广泛应用于法医亲子鉴定和个体识别B.具有高度多态性C.核心序列通常为2-6个碱基D.分析方法通常采用PCR结合毛细管电泳E.位于编码区为主37.下列属于基因诊断策略的有（）A.基因突变的直接检测B.基因连锁分析（间接诊断）C.基因表达水平分析D.基因产物（蛋白质）功能分析E.病理切片观察38.临床分子生物学实验室常用的自动化仪器包括（）A.自动核酸提取仪B.实时荧光定量PCR仪C.自动加样器D.流式细胞仪E.恒温水浴箱39.导致PCR非特异性扩增的原因可能有（）A.退火温度过低B.引物与非靶序列部分互补C.Mg2+浓度过高D.模板DNA不纯E.循环次数过多40.药物基因组学检测中，常见的检测靶点包括（）A.CYP2C19（氯吡格雷代谢）B.VKORC1/CYP2C9（华法林代谢）C.ALDH2（硝酸甘油代谢、酒精代谢）D.EGFR（吉非替尼靶向治疗）E.MTHFR（叶酸代谢）三、判断题（本大题共15小题，每小题1分，共15分。正确的打“√”，错误的打“×”）41.PCR反应中，引物长度一般在15-30个核苷酸之间，过长会降低特异性。（）42.真核生物的mRNA3'端均含有PolyA尾巴，因此可以利用Oligo(dT)作为引物进行逆转录。（）43.实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料可以与双链DNA特异性结合，因此也可以用于熔解曲线分析来区分非特异性产物。（）44.临床基因扩增检验实验室中，产物分析区的空气压力应低于试剂准备区，以防止气溶胶污染。（）45.Sanger测序法不仅适用于已知突变的检测，也适用于未知突变的筛查。（）46.核酸分子杂交中，探针是指被标记用于检测靶核酸的已知序列核酸片段。（）47.所有的点突变都会导致编码蛋白质的氨基酸序列改变。（）48.数字PCR（dPCR）不需要标准品即可进行绝对定量，且耐受抑制物能力较强。（）49.乙型肝炎病毒（HBV）是DNA病毒，丙型肝炎病毒（HCV）是RNA病毒。（）50.限制性片段长度多态性（RFLP）分析主要基于限制性内切酶识别位点的碱基突变。（）51.实验室室内质控中，Levey-Jennings质控图主要用于监测检测系统的精密度和准确度。（）52.只要PCR扩增出目的条带，就说明样本中一定含有该病原体。（）53.高通量测序（NGS）技术在肿瘤精准医疗中主要用于寻找驱动基因突变，指导靶向药物使用。（）54.在核酸提取时，若样本中存在肝素，可能会抑制TaqDNA聚合酶的活性。（）55.基因编辑技术CRISPR/Cas9目前已成为临床分子生物学检验的常规诊断技术。（）四、填空题（本大题共15空，每空1分，共15分）56.核酸的一级结构是指核苷酸之间的________键连接。57.PCR反应的三个基本步骤是变性、________和延伸。58.紫外分光光度法测定DNA浓度时，1个OD260值相当于双链DNA________μg59.NorthernBlotting的检测对象是________，其原理与SouthernBlotting类似。60.引物设计时，两条引物的3'端若互补，容易形成________，从而影响扩增效率。61.人类基因组由________亿个碱基对组成。62.实时荧光定量PCR中，Ct值与模板起始浓度的对数成________比关系。63.临床分子检验中，常用的抗凝剂有EDTA、肝素和柠檬酸盐，其中________对PCR扩增有强抑制作用，应避免使用。64.苯丙酮尿症（PKU）是由于________基因突变导致苯丙氨酸羟化酶活性缺乏引起的。65.基因芯片根据支持介质的不同，主要分为________芯片和电子芯片等。66.限制性内切酶主要识别DNA分子的特定序列，并在________处切断磷酸二酯键。67.等位基因特异性PCR（AS-PCR）设计引物的关键在于将________碱基置于引物的3'末端。68.质粒载体通常含有一个________基因，用于筛选转化成功的细菌（如氨苄青霉素抗性基因）。69.分子生物学检验报告审核时，若结果为“未检测到”，需注明________值。70.2022年诺贝尔生理学或医学奖授予了斯万特·帕博，以表彰他在________方面的发现。五、名词解释（本大题共5小题，每小题3分，共15分）71.基因72.Ct值73.限制性片段长度多态性（RFLP）74.等位基因特异性寡核苷酸探针（ASO）75.液体活检六、简答题（本大题共5小题，每小题6分，共30分）76.简述PCR技术的基本原理及反应体系中的主要成分。77.试述实时荧光定量PCR与常规PCR在技术和应用上的主要区别。78.简述临床分子生物学检验实验室防止污染的主要措施。79.列举三种检测基因点突变的方法并简述其原理。80.简述药物基因组学检测在临床个体化用药中的意义。七、综合分析题（本大题共3小题，每小题10分，共30分）81.某临床实验室收到一份全血样本，要求进行乙型肝炎病毒（HBV）DNA定量检测。实验室人员提取核酸后进行实时荧光定量PCR，结果阴性对照品出现扩增曲线（Ct值=28），阳性对照品正常，样本检测孔无扩增。(1)请分析此次实验可能出现的问题。(2)针对出现的问题，应采取哪些处理措施？(3)该批次样本能否发出报告？82.某患者，男，55岁，确诊为肺腺癌。为了指导靶向药物治疗，临床医生申请EGFR基因突变检测。(1)请列出EGFR基因中常见的对EGFR-TKI（酪氨酸激酶抑制剂）药物敏感的突变类型。(2)如果该患者检测结果为EGFR19号外显子缺失突变，提示临床应选择哪类药物进行治疗？(3)若检测结果为EGFRT790M突变，通常意味着什么？临床应如何应对？83.一对夫妇生育了一名患有重型地中海贫血（β-地贫）的患儿，夫妇双方均为β-地贫携带者。现计划生第二胎，要求进行产前基因诊断。(1)简述产前基因诊断的样本采集时机及方法。(2)除了基因诊断，产前筛查还可以通过哪些手段辅助诊断地贫？(3)若胎儿基因型为β-地贫携带者（杂合子），其预后如何？夫妇应获得怎样的遗传咨询建议？参考答案与详细解析一、单项选择题1.【答案】C【解析】全血（抗凝）是临床分子生物学检验中最常用的标本类型，尤其是使用EDTA抗凝的全血，适用于提取基因组DNA进行遗传病检测、病原体核酸检测等。尿液、粪便虽然也可作为标本，但应用相对特定；汗液通常不用于核酸提取。2.【答案】D【解析】Tm值受溶液离子强度影响。离子强度（如Na+浓度）越高，DNA双链越稳定，Tm值越高；反之，离子强度越低，静电斥力增大，双链不稳定，Tm值越低。故D选项描述错误。3.【答案】A【解析】Ct值（Cyclethreshold）是指荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。Ct值与模板起始浓度的对数成反比，模板浓度越高，Ct值越小。4.【答案】B【解析】TaqDNA聚合酶是从水生栖热菌中分离的耐热DNA聚合酶，是PCR反应的核心酶。限制性内切酶用于切割DNA，反转录酶用于合成cDNA，DNA连接酶用于连接DNA片段。5.【答案】C【解析】HBV-DNA载量直接反映病毒在体内的复制水平和传染性，是诊断乙肝病毒感染、判断复制活跃程度及评估抗病毒疗效最灵敏的指标。HBsAg是感染标志，HBeAg提示复制活跃但不如DNA定量灵敏和准确。6.【答案】A【解析】Southern印迹杂交用于检测DNA；Northern印迹杂交用于检测RNA；WesternBlot用于检测蛋白质。7.【答案】C【解析】人类基因组计划（HGP）的核心成果是完成了人类基因组的序列图谱，即测定了30亿个碱基对的排列顺序。物理图谱和遗传图谱是绘制过程中的中间成果。8.【答案】B【解析】dNTP浓度通常在200μmol/L左右，过高会增加非特异性扩增或错误掺入。引物浓度过高易引起引物二聚体；Mg2+浓度是PCR关键因素，影响酶活性和特异性，需精确控制；模板量过高有时反而会抑制扩增。9.【答案】B【解析】为防止扩增产物对试剂准备区和样本制备区的气溶胶污染，产物分析区应处于负压状态，空气气流应从低风险区流向高风险区。10.【答案】D【解析】WesternBlot（免疫印迹）是检测蛋白质的技术，不属于基因突变检测技术。PCR-RFLP、AS-PCR和Sanger测序均可用于检测基因点突变。11.【答案】B【解析】RT-PCR（逆转录PCR）的目的是将RNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，常用于检测基因表达水平或RNA病毒载量。12.【答案】D【解析】检验人员的学历属于人员资质管理，不属于每次实验的室内质量控制（IQC）指标。IQC主要监控实验过程的有效性，如阴阳性对照、扩增曲线等。13.【答案】A【解析】卫星DNA（SatelliteDNA）主要存在于着丝粒和端粒区域，是重复次数最高、含量最丰富的重复序列。14.【答案】C【解析】α-地中海贫血-1缺失杂合子基因型为（--/αα），缺失了2个α基因，属于标准型α-地贫（轻型），通常有轻度贫血表现。静止型缺失1个基因（-α/15.【答案】A【解析】Sanger测序（双脱氧链终止法）利用ddNTP（双脱氧核苷三磷酸）缺乏3'-OH基团的特性，在掺入后导致DNA链延伸终止。16.【答案】A【解析】酚-氯仿是有机溶剂，能使蛋白质变性沉淀，从而使水相中的核酸与有机相中的蛋白质分离。17.【答案】B【解析】熔解曲线分析可用于定性、特异性分析及SNP分型。Tm值取决于片段长度、GC含量及序列。熔解曲线为单峰通常提示无非特异性产物（或引物二聚体），但需结合具体情况。它可以区分SNP，因为错配碱基会降低Tm值。18.【答案】B【解析】ApoE基因多态性（特别是ϵ4等位基因）是阿尔茨海默病的重要风险因子，同时也与血脂代谢及心血管疾病风险密切相关。19.【答案】A【解析】焦磷酸测序是第一代向第二代过渡的测序技术，常被视为NGS的一种或相关技术。Sanger是第一代，杂交测序是早期概念，Maxam-Gilbert是早期的化学降解法。20.【答案】B【解析】根据卫生部门相关规定，临床基因扩增检验实验室必须经过省级卫生行政部门审核批准（验收合格）后，方可开展相关检验项目。21.【答案】B【解析】引物3'端延伸的稳定性至关重要，C或G碱基形成的氢键多（3个），结合更牢固，有利于延伸，提高特异性。22.【答案】A【解析】绒毛取样通常在孕10-12周（也有说法6-9周），羊膜腔穿刺通常在孕16-22周，这是产前诊断获取胎儿细胞的常用时间窗。23.【答案】B【解析】实时荧光PCR分型检测是目前临床检测HPV高危型别的主流方法，具有高通量、灵敏度高、可分型的特点。24.【答案】D【解析】基因芯片技术完全可以用于基因表达谱分析，通过比较不同样本的杂交信号强度来分析基因表达差异。25.【答案】C【解析】碱裂解法主要利用NaOH（变性DNA和蛋白质）、SDS（溶解膜蛋白）和乙酸钾（中和并沉淀蛋白质/基因组DNA），不使用酚。酚通常用于酚-氯仿抽提法。26.【答案】B【解析】CYP450酶系是药物代谢的主要酶系，其基因多态性导致个体代谢能力差异（快代谢型、慢代谢型），指导临床选择药物种类和调整剂量。27.【答案】B【解析】数字PCR将反应体系分割成数万个微滴，PCR结束后通过检测每个微滴的荧光信号（有或无）来计数阳性微滴，从而实现绝对定量。28.【答案】C【解析】反应管未盖紧导致液体蒸发，会改变反应体系中各成分的浓度（尤其是Mg2+浓度升高），导致反应失败或假阴性。污染通常导致假阳性。29.【答案】B【解析】HLA基因分型是器官移植前必不可少的配型步骤，以降低排斥反应风险。虽然也可用于亲子鉴定，但在临床检验中移植配型是其主要应用。30.【答案】A【解析】纯净的DNAA260/A280比值约为1.8（1.7-1.9）。若比值过低提示蛋白质污染，过高提示RNA污染。A260/A230反映有机溶剂或盐污染。二、多项选择题31.【答案】ABCE【解析】防止污染措施包括：严格分区、单向气流（试剂准备->样本制备->扩增->产物分析）、物理消毒（UV）、化学消毒（UNG/dUTP防污染体系）、使用一次性耗材（带滤芯枪头）。D选项“正向移液”不是防污染特有措施，反而操作不当易产生气溶胶，通常建议使用带滤芯吸头。32.【答案】BCDE【解析】SYBRGreenI是染料法，非探针法。TaqMan、分子信标、Scorpion、LNA探针均属于荧光探针法，特异性更高。33.【答案】ABCD【解析】基因突变类型包括点突变、插入、缺失、动态突变（如三核苷酸重复扩增）。染色体易位属于染色体结构异常，不属于基因突变的微观范畴，但在广义分子病理中也常被讨论，通常单选题中不选，但在多选中，视具体定义，一般ABCD为核心基因突变类型。此处严格区分基因突变与染色体畸变，选ABCD更严谨。34.【答案】BCD【解析】苯丙酮尿症（遗传病）、COVID-19（感染性疾病）、非小细胞肺癌EGFR检测（肿瘤靶向治疗）均为分子生物学检验的强项。遗传性球形红细胞增多症主要靠红细胞渗透脆性试验和膜蛋白电泳；细菌性痢疾主要靠细菌培养。35.【答案】ABCD【解析】评价核酸提取质量常用：紫外分光光度（浓度、纯度）、凝胶电泳（完整性、大小）、荧光定量（浓度）、PCR扩增（功能性评价）。肉眼观察不可靠。36.【答案】ABCD【解析】STR是短串联重复序列，核心序列2-6bp，具有高度多态性，位于非编码区（内含子等），广泛用于法医学和遗传分析。E选项“位于编码区为主”是错误的。37.【答案】ABC【解析】基因诊断策略包括：直接检测突变、间接连锁分析、基因表达分析。基因产物分析属于蛋白质水平，病理切片属于形态学。38.【答案】ABC【解析】自动核酸提取仪、实时荧光定量PCR仪、自动加样器是分子实验室标配。流式细胞仪主要用于流式细胞术，不在此列；恒温水浴箱是基础设备，不算高自动化仪器。39.【答案】ABCDE【解析】退火温度过低、引物特异性差、Mg2+浓度过高（增强非特异性延伸）、模板不含靶序列或太脏、循环次数过多（平台期前可能积累非特异产物）均可导致非特异性扩增。40.【答案】ABCDE【解析】CYP2C19、VKORC1/CYP2C9、ALDH2、MTHFR均为经典的药物代谢相关基因；EGFR是肿瘤靶向药物相关基因，属于药物基因组学/精准医疗范畴。三、判断题41.【答案】×【解析】引物过长会增加非特异性配对的概率，但在一定范围内（如>30bp），若Tm值匹配得当，特异性依然很高。通常说法是“过长会增加非特异性引发的风险”或“过长没必要”，但“过长会降低特异性”这一说法在教科书常被提及，主要指过长会导致Tm值过高，难以与模板结合或在常规退火温度下出现错配。但严谨来说，过短（<15bp）特异性才差。不过按常规考试题库逻辑，此题通常判定为错误，因为“越长特异性越好”在一定范围内是成立的，直到超过一定长度。但更常见的考点是：引物3'端稳定性重要。实际上，引物过长容易形成二级结构。这里按标准教材观点：引物过长并不一定降低特异性，反而可能因为Tm过高导致扩增失败。但针对“越长特异性越低”这一绝对说法，通常判错。修正：实际上，引物过长容易导致非特异性扩增，因为增加了随机匹配的概率，且Tm值过高导致反应条件难以优化。但在许多题库中，此题答案可能为√。让我们重新审视：引物设计原则中，引物长度一般在20-30bp。过短特异性差，过长容易形成二级结构且合成费用高。并没有“过长降低特异性”的定论。因此判定为×。注：为了确保符合常规考试逻辑，通常认为引物过长（如>30-40bp）容易产生非特异产物，但在基础判断题中，常考点是“引物过短特异性差”。此处判定为×，强调该说法不准确。42.【答案】√【解析】真核生物mRNA3'端具有PolyA尾巴，Oligo(dT)能与PolyA互补配对，因此常用于逆转录合成cDNA的第一链。43.【答案】√【解析】SYBRGreenI嵌合于双链DNA小沟中，不同序列（如特异性产物、引物二聚体）的Tm值不同，因此可通过熔解曲线分析产物均一性。44.【答案】√【解析】为防止扩增产物气溶胶污染试剂和样本，产物分析区应保持负压，气流应从低风险区流向高风险区。45.【答案】√【解析】Sanger测序是测序的金标准，适用于已知和未知突变的检测。46.【答案】√【解析】探针定义：带有标记物（如同位素、荧光素）的特定核酸序列，用于检测与其互补的靶核酸。47.【答案】×【解析】由于遗传密码子的简并性，有些点突变（同义突变）不改变编码的氨基酸序列。48.【答案】√【解析】数字PCR通过泊松分布原理直接计数阳性微滴，无需标准曲线，且样本被分割稀释，抑制物被分散，耐受性较强。49.【答案】√【解析】HBV是嗜肝DNA病毒，HCV是黄病毒科RNA病毒。50.【答案】√【解析】RFLP基于碱基突变导致限制性内切酶识别位点消失或产生，从而改变酶切片段长度。51.【答案】√【解析】Levey-Jennings质控图是室内质控最常用的工具，用于监测精密度和准确度，发现失控趋势。52.【答案】×【解析】可能存在假阳性（如污染）或非特异性扩增。必须结合阴阳性对照、熔解曲线等综合判断。53.【答案】√【解析】NGS在肿瘤诊疗中主要用于寻找驱动基因突变（如EGFR、ALK、ROS1等），指导靶向药物选择。54.【答案】√【解析】肝素是TaqDNA聚合酶的强抑制剂，因为肝素能与DNA结合或与酶结合，干扰扩增。55.【答案】×【解析】CRISPR/Cas9目前主要用于基因编辑研究和治疗探索，尚未成为临床常规诊断技术，临床诊断常用PCR、测序等。四、填空题56.【答案】磷酸二酯57.【答案】退火58.【答案】50（注：双链DNA1OD260=50μg/m59.【答案】RNA60.【答案】引物二聚体61.【答案】3062.【答案】反63.【答案】肝素64.【答案】PAH65.【答案】固相66.【答案】特定核苷酸序列（或磷酸二酯键）67.【答案】突变68.【答案】抗性（或选择）69.【答案】最低检测限（或检出限）70.【答案】古人类学（或尼安德特人基因组）五、名词解释71.【答案】基因：是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传的结构和功能单位，通过转录和翻译指导蛋白质的合成，从而决定生物体的性状。72.【答案】Ct值：在实时荧光定量PCR中，指荧光信号强度超过设定的阈值时所对应的循环数。Ct值与标本中模板DNA的起始浓度呈负相关，起始浓度越高，Ct值越小。73.【答案】限制性片段长度多态性（RFLP）：指由于基因组DNA中限制性内切酶识别位点的碱基突变（导致位点消失或产生）或位点间DNA片段的插入、缺失，导致酶切后产生的DNA片段长度发生差异的现象。74.【答案】等位基因特异性寡核苷酸探针（ASO）：根据已知的基因突变位点，设计合成的与正常序列或突变序列互补的短寡核苷酸探针。在严格的杂交洗脱条件下，只有完全互补的序列才能结合，从而区分野生型和突变型等位基因。75.【答案】液体活检：一种非侵入性的体外诊断技术，主要通过检测血液中的循环肿瘤DNA（ctDNA）、循环肿瘤细胞（CTC）或外泌体等，来获取肿瘤的遗传信息，用于早期筛查、疗效监测及预后评估。六、简答题76.【答案】原理：PCR（聚合酶链式反应）模拟体内的DNA复制过程，利用耐热DNA聚合酶，在体外通过温度循环控制，将微量的DNA片段特异性的扩增数百万倍。主要成分及作用：(1)模板DNA：待扩增的目标DNA序列。(2)引物：一对与模板DNA两端互补的寡核苷酸链，决定扩增的特异性和起始位置。(3)TaqDNA聚合酶：耐热DNA聚合酶，催化dNTP合成DNA链。(4)dNTPs：dATP、dCTP、dGTP、dTTP，合成DNA的原料。(5)Mg2+：酶的辅助因子，影响酶活性及引物与模板的结合。(6)缓冲液：提供适宜的pH环境和离子强度。77.【答案】技术区别：(1)检测方式：常规PCR通过终点电泳检测产物；实时荧光定量PCR通过监测扩增过程中的荧光信号强度进行检测。(2)定量能力：常规PCR只能定性或半定量；实时荧光定量PCR可精确进行初始模板的绝对或相对定量。(3)闭管操作：实时荧光定量PCR无需开盖检测产物，极大降低了气溶胶污染的风险。应用区别：(1)常规PCR主要用于基因的定性检测（如病原体筛查、基因克隆）。(2)实时荧光定量PCR主要用于病毒载量监测、基因表达水平分析、特定突变定量等需要定量的场合。78.【答案】(1)严格分区：设置试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区，人流、物流气流单向流动。(2)专用设备与耗材：各区使用专用移液器、枪头、试管、工作服，不得混用。(3)防污染措施：使用dUTP/UNG酶防污染体系；实验前后使用紫外线照射台面和空气；经常性清洁消毒。(4)操作规范：使用带滤芯枪头，避免剧烈震荡产生气溶胶，小心开启反应管。(5)阴阳性对照：每次实验必须设置阴性对照（监测污染）和阳性对照（监测试剂效力）。79.【答案】(1)PCR-RFLP：利用引物扩增包含突变位点的片段，若突变导致限制性内切酶位点改变，酶切后电泳图谱会发生变化。(2)等位基因特异性PCR（AS-PCR）：设计引物时将突变碱基置于3'端，在严格条件下，只有3'端完全匹配的引物才能延伸，通过有无扩增产物判断基因型。(3)TaqMan探针法：设计