荧光定量PCR仪标准规范操作规程

荧光定量PCR仪标准操作指导书

1、适用范围：

AGSAGS4800型实时荧光定量PCR仪。

1、双击桌面“AGS4800”快捷方式，运行程序。打开AGS4800程序进入用户选

择界面。选择用户后，进入软件操作界面。

2、新建一个检测程序文件

单击新建按钮，新建一个检测程序文件。

2.1设置热盖温度

调节热盖温度（30-135团），默认105团。

2.2设置试管加液量

根据实际试管加液量调节加液量参数（5-1003），默认25日1。

2.3设置扩增程序

单击“添加〃创建一个程序段

2.4添加程序名称，设置各程序段循环数。

2.5温度设置功能按钮

添加------------在当前温度节结尾，新建一个温度节

插入............在当前温度节前添加一个温度节

删除............将当前温度节删除

2.6样本信息录入

2.6.1打开样本参数设置界面

2.6.2在当前程序染料设置里，选择试剂所对应的染料。

263样本信息设置

选择扩增的染料•，选中要设置孔位

依次输入“样本序号、样本名称、样本旧〃，在荧光信息选择框中选择样本类

型，若为标准品可以输入样本浓度信息。

样本浓度信息可以手工输入数值或者使用下拉选择框选取标准样品浓度信息。

最大样本浓度输入值1.00e+10o

2.6.4孔位选择

单孔选择----------通过鼠标单击选中单个孔位。

相邻孔位选择........通过单击鼠标并拖动选择矩形框内相邻孔位或者先

选中一个孔位，按住“Shift〃功能键单击另一孔位进行选择。

不连续孔位选择-----通过按住“Ctrl〃功能键进行依次追加选择孔位。

A(B)行全选......在A(B)行开始位置单击鼠标则选中A(B)行所有孔位。

孔位全选----------在图示位置单击鼠标左键则全选所有孔位。

选择孔位增减-------按住“Ctrl〃键，使用鼠标单击需增加或减少的孔位。

2.6.5样本类型设置

孔位选择后，可以直接点选右侧样本类型快速设置按钮,进行样本类型设置，

也可以选择样本参数项目中的样本类型设置下拉选择框进行选择设置。

样本类型若选择标准品，需输入样本浓度。

2.7程序运行参数保存

点选“文件3保存〃或〃文件玲另存为〃，输入文件名称，点选确认按钮进行保

存操作。

文件进行首次保存。

2.8、程序运行参数的导入

点选“文件玲文件操作玲导入参数〃，根据提示导入程序参数和/或样本参

数。

2、文件运行

准备试剂一一AGS4800检测系统使用0.2ml透明离心试管根据试剂要求选用

5-100|11合适的加液量。

离心操作一一配置完成试剂样本的试管在放入仪器之前，要用离心机进行离

心操作，确保试剂液体处于试管底部，且液体内部不含有气泡。

放置试管一一如果样本数量少于模块的孔位数，那么在放置试管时应尽量将

样本试管均匀地分布于模块的孔中，以确保运行时热盖能平稳地压在试管的顶部。

样本参数录入及分组设置

在相应栏目分别输入样本序号、样本名称、样本ID、样本类型信息。

程序运行

选择“运行好运行操作3开始运行〃，执行程序。

如果扩增程序中未选中荧光检测温度点，将会有如下提示，请确认程序是否

设置正确。

退出运行——在运行过程中，选择〃运行好运行操作玲退出运行〃退出程序

运行。

3、检测结果的保存及分析

3.1、程序运行结束，如果有荧光采集数据并且荧光数据读取次数大于5次，

将自动跳转到结果分析界面，并弹出保存荧光数据对话框。

如果扩增程序没有保存，则程序运行结束后，软件默认按当前时间对程序运

行结果进行默认命名进行提示保存。软件默认保存到当前操作用户名目录下。

如果误选取消，请在“文件玲文件操作好保存〃或者〃文件玲文件操作玲

另存为〃，进行检测结果的保存。

3.2、检测结果的分析

3.2.1打开检测结果文件选择分析通道与要分析的组别设置，可以按自动分析

设置自动进行定量分析。如果需要手动进行分析设置，请将该分组“自动分析〃

复选框取消选择，然后调节〃基线设置〃和〃阈值〃设置。

3.2.2标准浓度设置

通过点选〃样本类型〃标准按钮进样本类型设置时;通道1(FAM)与通道2(HEX)

样本类型同时被设置为〃标准〃，如果只设置其中一个通道的样本浓度，另外一

个通道样本浓度不进行设置，则进行分析时，软件只针对设置标准浓度的通道

进行样本浓度分析计算。

同一分组可以分别设置FAM和HEX两组标准浓度样本。

5.2样本资料修改

选择〃报告玲检验报告好样本资料〃对样本资料信息进行添加修改。

对需要打印的样本，打印复选框进行勾选。

5.3设置打印模板

选择"报告玲检验报告玲报告模板〃进行模板设置。

如果不使用电脑缺省打印机设置，请指定打印输出的打印机。

可以根据需要选择打印或不打印扩增曲线，默认为打印扩增曲线。

打印扩增曲线时，包含分析选中的标准品扩增曲线。

5.4选择待打印样本资料

如果样本资料未输入完整，请补充填入。在报告一通道选择中对需要打印的

样本进行勾选设置，完成后选择确定按钮进行设置信息保存。

5.5打印报表

选择打印预览，确认打印选择是否正确。

打印预览，如果有多页，请翻页查看各待打印样本信息。

默认选中打印扩增曲线时的预览效果图。

打印方法一在打印预览界面选择打印按钮。

打印方法二选择〃报告打印〃按钮。

4、仪器维护保养

4.1每星期维护任务

•归档或备份反应板文件

•使用不脱毛的布块擦拭仪器表面

4.2每月维护任务：

•执行计算机硬盘碎片整理程序

4.3其它维护任务：需要时执行以下维护任务，以解决遇到的问题:

•去除样本块中的污染物

5、常见的故障与处理