液相色谱柱该如何清洗 液相色谱维护和修理保养

液相色谱柱该如何清洗液相色谱维护和修理

保养

液相色谱柱，是一种用于液体色谱分析仪器

1、反相色谱柱

分别用甲醇：水=90:10,纯甲醇（HPLC级），异丙醇（HPLC级），

二氯甲烷（HPLC级）等溶剂作为流动相，依次冲洗，每种流动相流

经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的次序冲洗。

2、正相色谱柱

分别用正己烷（HPLC级），异丙醇（HPLC级），二氯甲烷（HPLC

级），甲醇（HPLC级）等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流

经色谱柱不少于20倍的柱体积（异丙醇粘度大，可降低流速，避开

压力过高）.注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以

相反的次序冲洗至正己烷，全部的流动相必需严格脱水。

3、离子交换色谱柱

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长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换本领下降,

用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液

冲洗可以使阴离子柱再生。

另外，还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反

方向冲洗。但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的.假

如柱子装反了，可以调回来，但可能会造成柱内担体塌陷.在不得已

的情况下尽量不要反装色谱柱。

一般来说，全部的清洗方法都有仿佛的形式。所用的溶剂都是随溶

剂强度加添，常常后一个溶剂是特别疏水的（如醋酸乙酯甚至是烧）

可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。我们必需保证一系列溶剂

中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。清洗过程要结束时，必需借助

一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。例如，异丙醇是

一个特别好的作为中心步骤的溶剂，由于它能与正己烷或二氯甲烷

互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度特别大，必需确保较低

的流速以免使泵压过高。当然，假如使用紫外检测器的话，避开溶

剂在紫外区域有吸取，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平

稳。

对于典型的硅胶键合柱来说假如没有缓冲溶液的话推举使用以下溶

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剂系列:

100%甲醇

100%乙晴

75%乙晴一25%异丙醇

100%异丙醇

100%二氯甲烷

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100%正己烷

用二氯甲烷或正己烷以后，由于溶剂相容性柱子必需用异丙醇冲洗

后才能用原来的水相溶剂。每种溶剂至少冲洗10个柱体积。如250

mm

4.6mm11PLC分析柱，分析者可以用1〜2ml/min的流速来冲洗，

要回复原来的溶剂体系，不需要每一步都冲洗，可以跳过中心步骤。

中心步骤推举使用异丙醇，然后用没有缓冲的流动相，后回复起始

流动相配置。4氢唉喃是另外一种比较受欢迎的去除污染的溶剂。

假如使用者怀疑柱子被严重污染，可以二甲基亚碉(DMS0)或者二

甲基甲酰锭和水按50：50的比例混合用低于0.5ml/min的流速流

过色谱柱。成功再生反相柱子是一个特别耗时间的过程，溶剂冲洗

可以利用梯度系统过夜操作。

液相色谱仪原理与应用

液相色谱仪的应用，可用于高沸点、热稳定性差以及具有生理

活性物质的分析。一般来说，沸点在45CTC以下，相对分子质量小

于450的有机物可用液相色谱仪分析，但这些物质只占有机物的

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15%〜20%,其余的80%〜85%有机物原则上都可接受高效液相色谱仪

分析。

色谱柱的使用和维护，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，稍有不

慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。

在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。调整流速

太快，避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的蓦地变

化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地

上升或降低也会冲动柱内填料，因此在诡整流速时应当缓慢进行，

在阀进样时阀的转动不能过缓。

反冲色谱柱，一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以

反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会快速降低柱

效，预柱和保护柱，选择使用适合的流动相（尤其是pH）,以避开

固定相被破坏。

有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为

硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分

析柱中的硅胶基质被溶解。

避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样

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品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一

般是填有相像固定相的短柱。保护柱可以而且应当常常更换。

液相色谱仪的基本结构，由输液系统、进样系统、分别系统、检测

系统和数据处理系统等构成。

工作原理，利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解、调配或吸

附等化学作用性能的差异，使各组分在作相对运动的两相中反复多

次受到上述各作用力而达到相互分别。

从液相色谱仪工作流程中看到，色谱柱是实现分别的核心部件，要

求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填

充质量和使用条件有关。

色谱填料：经过制备处理后，用于填充色谱柱的物质颗粒，通常是

5—10粒径的球形颗粒。

色谱柱管：内部抛光的不锈钢管。典型的液相色谱分析柱尺寸是内

径4.6mm,长250mmo

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色谱柱：也称固定相，是将色谱填料填充到色谱柱管中所构成的，

色谱柱的填充，干法填充：在硬台面上铺上软