培养基适用性试验标准操作规程

培养基适用性试验标准操作规程1.目的

建立培养基适用性试验的标准检验规程，对培养基进行质量控制试验，确认所用培养基的质量能够满足检验需求，确保检验结果的准确性。

2.范围

适用于本公司微生物检查所涉及的培养基。3.职责品质部负责起草和执行本文件；品质部负责人负责审核和批准；检验员按照文件要求进行操作。4.依据《中国药典》现行版

5.定义培养基：是指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。通常指干粉培养基和配制好的琼脂、肉汤、稀释液等。对照培养基：对照品培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。

6.程序6.1为了确保微生物检验的可靠性，每批配制的培养基都应进行培养基质量控制检查；其内容包括pH值测定、无菌性检查、促生长能力试验。对于某些培养基还应进行抑制能力试验、指示能力试验。无菌检查用培养基适用性检查具体参照《无菌检查法》。6.2对于用于促生长能力试验、指示能力试验及抑制能力试验所用的菌株传代次数不得超过5代。也可使用环境菌库中收集的菌株进行促生长试验。用于质量控制对照的培养基可以是购买的官方对照培养基或者是质量控制合格的培养基。6.3培养基质量控制检查项目按照《培养基质量控制清单》规定进行，并填写《培养基配制使用记录》和《培养基质量控制记录》。6.4pH值测定将培养基冷却至25±2℃时测定。琼脂培养基采用固体pH电极，液体培养基采用可浸没式pH电极。测定固体培养基时，应使pH电极头与培养基充分接触。测定液体培养基时，将电极头浸没在培养基中。培养基灭菌后的pH值应符合《培养基配制清单》中的要求。6.5无菌性检查所有进行适用性试验批次的培养基都应进行无菌性检查。非无菌检查用的培养基的无菌性检查，随机取配制好的培养基1个单位（瓶/支/管）。培养时间不得少于用于产品检验的最长培养时间，具体培养条件见《培养基质量控制清单》。所有培养基经培养后均应无菌生长，则可判该培养基的无菌性检查符合规定。如不符合规定应进行调查。6.6促生长能力试验促生长培养时间不得大于用于产品检验的最短培养时间。计数用的琼脂培养基取对应的试验菌菌悬液（≤100cfu）采用倾注法或涂布法接种至新配制培养基和对照培养基，每种试验菌平行制备2个平板，按要求培养。如满足以下三种情况可判断合格。新配培养基上生长的菌落数与对照培养基上的菌落数相比，回收率应在50%-200%之间；新配培养基上生长的菌落数与质量控制合格的培养基上生长的菌落数相比，回收率应在50%-200%之间；如果为首次配制且没有对照培养基的，则取适量菌液至新配培养基上，同时取等量同浓度的菌液进行计数。新配培养基上生长的菌落数与已知浓度的菌液的计数值相比，回收率应在50%-200%之间。液体培养基将对应的试验菌菌悬液（≤100cfu）接种至适量（日常使用最少量）新配制培养基和对照培养基中（或质量控制合格的培养基），每种试验菌平行制备2份（管），按要求培养。观察新配制培养基与对照培养基（或质量控制合格的培养基）比较应有明显的微生物生长。如果为首次配制且没有对照培养基的，则取≤100cfu的试验菌菌悬液接种至新配培养基中，每种试验菌平行制备2份（管），按要求培养，观察培养基应有明显微生物生长。控制菌检查用的选择性培养基取试验菌菌悬液≥0.1ml（≤100cfu），采用表面涂布法，分别接种于新配制培养基和对照培养基，按要求培养。观察新配制培养基上生长的菌落大小、形态特征和指示反应应与对照培养基上的菌落一致，或与药典上描述的一致。6.7指示能力试验琼脂培养基做促生长能力试验的同时可进行指示能力试验。指示能力试验的培养时间不得大于用于产品检验的最短培养时间。取试验菌菌悬液≥0.1ml（≤100cfu），采用涂布法分别接种于新配制培养基和对照培养基，按要求培养。观察新配制培养基上生长的菌落大小、形态特征和指示反应应与对照培养基上的菌落一致，或与药典上描述的一致。液体培养基取试验菌菌悬液（≤100cfu），接种至新配制培养基和对照培养基中，按要求培养。观察新配制培养基中微生物的生长情况、指示剂反应应与对照培养基一致。6.8抑制能力试验进行抑制能力试验的培养基，培养时间不得少于用于产品检验的最长培养时间。取对应试验菌（>100cfu）接种至新配制培养基和对照培养基中，按要求培养。观察培养基应无菌生长。6.9成品培养基质量控制1）无菌性检查对于环境监控用成品培养基，每批次均应随机平行取5个单位（管/瓶/皿）进行无菌性培养，培养时间不得少于用于产品检验的最长培养时间。所有培养基经培养后均应无菌生长，则可判该培养基的无菌性检查符合规定；反之无菌性检查不合格，不能使用。2）促生长能力试验取试验菌≥0.1ml（≤100cfu），采用涂布法分别接种于预培养后的成品培养基和对照培养基，每种试验菌平行制备2个平板，按要求培养。观察成品培养基上生长的菌落大小、形态特征和指示反应应与对照培养基上的菌落一致，或与药典上描述的一致。6.10当新配培养基质量控制相关项目试验结束并确认合格后，该批次培养基可用于实验室日常实验