中国临床微生物检验指南（2023年版）

WS/T805—2022《临床微生物检验基本技术标准》2023版全面解读WS/T805—2022·2023年5月1日正式实施国家卫生健康委员会发布标准解读标准解读导览01标准总览制定背景、起草阵容与整体框架02核心术语九项关键术语定义统一03无菌与消毒无菌操作六要素与消毒灭菌技术04标本处理标本处理与制片技术规范05标本采集分析前质量控制核心环节06检验质控全面质量管理体系构建07方法体系培养鉴定、分子检测与药敏试验08配套进展配套标准与行业最新进展标准总览从行业需求到国家标准，筑牢微生物检验根基WS/T805—2022发布背景、起草阵容与整体框架解读WS/T805—2022发布背景、起草阵容与整体框架解读01标准制定背景与意义规范化操作是提升检验质量的必由之路行业痛点临床微生物检验是感染性疾病诊断与治疗的基石，但长期以来国内各实验室在操作规范、质量控制方面存在差异标准发布国家卫生健康委员会于2022年11月2日正式发布WS/T805—2022，自2023年5月1日起正式实施，属卫生行业标准，全国医学实验室普遍执行2022年发布2023年实施覆盖范围与意义标准规定临床微生物检验全流程基本技术要求，涵盖无菌操作、标本处理、培养鉴定、药敏试验等；发布实施标志着我国临床微生物检验进入标准化、规范化的新阶段，为检验结果互认和医疗质量提升提供制度保障权威起草阵容与制定过程六家顶级医疗机构·八位权威专家

联合起草，确保标准专业性与权威性技术审查与起草单位技术审查国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会同济医院华中科技大学同济医学院附属同济医院解放军总医院中国人民解放军总医院北京医院北京医院/国家卫健委临床检验中心协和医院中国医学科学院北京协和医院北大人民医院与安徽省立医院北京大学人民医院、安徽省立医院主要起草人与制定方法沈定霞孙自镛胡继红徐英春胡云建王辉马筱玲简翠广泛调研国内外实验室现状与实际操作规范，结合中国国情制定适用范围与引用文件体系所有开展临床微生物检验的医学实验室，不分等级与规模，均适用本标准配套标准网络生物安全基础GB19489《实验室生物安全通用要求》、WS/T442《临床实验室生物安全指南》技术操作规范WS/T639《抗菌药物敏感性试验的技术要求》、WS/T497《侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南》引用效力规则注日期仅该日期版本适用不注日期其最新版本适用范围规范性引用文件术语和定义无菌操作及消毒灭菌标本处理及制片后续培养鉴定与药敏试验核心术语术语统一是标准化落地的第一块基石消毒、灭菌、无菌操作等九项关键术语定义解读消毒、灭菌、无菌操作等九项关键术语定义解读02消毒灭菌无菌三大概念辨析消毒杀灭或清除物体上活的病原微生物，不要求杀灭全部微生物灭菌杀灭物体上所有微生物，包括细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物无菌指不存在活菌的状态，是一种结果而非操作过程五项关键操作术语定义术语统一是标准化落地的第一块基石接种将目标微生物转移至适于生长繁殖的人工培养基或活的生物体内的方法荧光淬灭荧光分子与其他分子发生作用导致光度降低、发光时间缩短乃至停止发光的现象，在分子检测中需注意避免一套血培养从同一个穿刺点采集的血液，分别注入一个需氧血培养瓶和一个厌氧血培养瓶进行培养微生物培养利用人工培养基和适宜的培养条件（温度、气体环境等）使微生物生长繁殖的技术细菌鉴定以细菌系统分类学为原则，通过系列方法将未知细菌归到一定种属的过程无菌与消毒无菌操作是微生物检验的生命线无菌操作六要素与消毒灭菌技术规范详解无菌操作六要素与消毒灭菌技术规范详解03无菌操作六项技术要求器材与环境灭菌器材灭菌接触培养标本的所有器材必须经过灭菌处理，不得仅用消毒替代液体无菌稀释标本或制备菌液的液体必须经过灭菌处理，确保无活菌存在培养基合格各类培养基在使用前应保证无菌生长，需经无菌检验合格操作规范接种环灭菌接种标本或转种菌株时应将接种环加热灭菌，或使用一次性无菌接种环及时盖盖打开容器挑取标本或培养物后，应尽快盖回盖子，防止污染或交叉污染加样器避壁用加样器和吸头吸取体液标本或菌液时，注意加样器勿接触管壁灭菌≠消毒，六要素缺一不可消毒灭菌技术分类与应用不同对象需匹配相应的消毒灭菌策略物理灭菌法高压蒸汽灭菌最可靠方法，适用于培养基、玻璃器皿、生物废弃物等耐高温物品适用对象耐高温物品化学消毒法75%乙醇、含氯消毒剂适用于日常消毒，针对工作台面、设备外表面适用场景日常消毒选择原则与记录进入无菌部位或接触破损黏膜器械必须灭菌仅接触完整皮肤或环境表面可采用消毒所有操作均需记录，消毒剂定期更换以防止耐药菌产生标本处理标本处理决定检验结果的起点质量标本处理技术要求与制片规范解读标本处理技术要求与制片规范解读04标本类型差异化处理策略一刀切处理是漏检的重要诱因痰液标本>10个/低倍视野鳞状上皮细胞超标即判为不合格，需重新采集体液标本低速离心浓缩后涂片或培养，提高病原体检出率分枝杆菌培养标本4%NaOH消化杂菌后中和，再接种于专用培养基血培养阳性标本立即镜检革兰染色镜检并转种平板，同步初步药敏预判标本类型—性状—目标微生物，三者共同决定处理路径，缺一不可制片技术规范与安全要求制片质量直接影响镜检结果的可靠性生物安全柜操作制片全程宜在生物安全柜内进行，防止气溶胶感染风险自然干燥优先涂片应自然干燥，不建议加热干燥，避免菌体形态改变或染色异常烤片温度严控若采用烤片机，须严格控制温度，防止过热影响染色效果方法因标而宜血液标本推片、体液标本离心涂片、组织标本印片，据类型选择编号一一对应每张玻片标注唯一编号，确保与培养结果精准匹配标本采集分析前质量，决定检验成败的55%血培养、痰液、尿液等标本采集与运送规范血培养、痰液、尿液等标本采集与运送规范05分析前质控是检验成败关键正确的采集时机规范的采集方法合格的标本质量分析前阶段失误占总失误的55%，标本质量决定检验准确率合格标本规范采集的血培养标本病原体检出率可达

80%-96%不合格标本假阴性率可升高至

40%

以上血培养采集规范与时机把握8-10ml/瓶成人采血量1-3ml/瓶新生儿采血量<3%污染率合格标准不达标则>5%"采血时机与无菌操作，决定血培养成败"采集时机抗菌药物使用前、寒颤和发热初起时采集皮肤消毒步骤须严格，污染率合格标准<3%，不达标则>5%采集套数急性脓毒症10分钟内不同部位采集2-3套；急性心内膜炎1-2小时3个部位3套注入顺序先需氧瓶后厌氧瓶，提高真菌、绿脓杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌分离率呼吸道与泌尿道标本采集要点标本质量不合格，等于检验白做痰液标本质量评估鳞状上皮细胞

>10个/低倍视野

为不合格，须反馈临床重新采集口腔去污采集前指导患者漱口，减少口腔菌群污染送检时限2小时内送检；疑为嗜血杆菌或肺炎链球菌感染时应

立即送检（此类细菌在自然环境中极易死亡）尿液标本采集方式清洁中段尿，使用无菌容器收集，避免尿道口污染时效警示未冷藏放置超

2小时，细菌增殖可达

10⁵CFU/mL，严重干扰菌落计数判断导尿禁忌不可从尿袋中采集，引流液潴留过久易滋生细菌VS标本运送时效与保存条件送检延迟等于标本作废通用时限所有微生物标本采集后

2小时内

送达实验室2小时通用血培养特殊保存不能及时送检应置

室温

保存，不超过

24小时。严禁冰箱保存室温24小时禁止冰箱奈瑟菌紧急送检淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌标本

30分钟内

送检，注意

保温。禁止

4℃

保存30分钟保温禁止4℃脑脊液与组织标本脑脊液标本

优先检测，不应冷藏。活检组织

30分钟内

送检，较小组织加少量无菌生理盐水保持湿润优先30分钟保湿转运容器须

防漏、防破损

并标注

生物危害标识；高致病性病原体标本需

三级包装检验质控全面质量管理，让每一份报告经得起推敲人员、SOP、培养基、仪器的全链条质控体系人员、SOP、培养基、仪器的全链条质控体系06全面质量管理三阶段分布临床微生物检验失误分布极不均衡，分析前阶段是质控体系的最大短板分析前失误占比4%分析中失误41%分析后失误分析前失控标本采集由临床科室执行，实验室难以直接管控，规范执行难度大分析后隐患占比41%亦不容忽视，需通过完善审核反馈机制持续改进人员资质与能力考核要求人是微生物检验质量控制的第一要素微生物检验所有试验均为中度或高度复杂试验，特点为不能完全脱离手工、以定性为主、主观判断机会多国际标准CLIA88规定高度复杂实验室检验人员须检验专业毕业的学士、硕士或博士，经培训和资格认证能力考核要求全体人员须接受继续教育并定期接受能力考核国内职称体系高级职称掌握国内外先进技术，独立解决重大关键技术问题，参与会诊与技术咨询中级职称熟悉先进技术，独立解决关键技术问题，参与危重病人抢救初级职称在上级指导下解决一般技术问题SOP操作手册九大模块样品采集运送处理样品检验流程检验方法与质控方法临床意义报告方式仪器操作手册试剂质量鉴定质量控制程序各项管理规章制度SOP是检验一致性的制度保障编制规范高年资人员编写，参照国家标准、行业标准及国内外参考文献结合实验室条件制定，避免生搬硬套须经室主任批准签字注明日期管理制度放置于工作场所便于查阅，任何变更须科主任签字停止使用副本保留二年后再销毁科室领导更换时须现任科主任重新批准签字培养基全生命周期质控培养基质量直接决定病原体检出率配制阶段SOP执行称量、溶解、pH调节、分装pH控制严格控制在6.0-7.5范围内操作环境洁净环境，无菌容器和工具参数记录温度、pH值、灭菌条件储存阶段分区存放按类型、有效期、用途分区标识完备名称、浓度、批号、有效期密封防潮开封后严格密封冻融管理避免反复冻融，开瓶实测评估验证阶段性能抽检生长率、选择性、pH稳定性超限停用超出标准立即停用仪器设备校准与维护体系仪器失准会导致系统性错误01每年至少校准一次培养箱、冰箱、高压灭菌器等关键设备，采用国家标准物质或第三方认证标准品02性能验证测试阳性/阴性对照试验，确认设备恢复最佳工作状态03每日清洁消毒设备接触面无腐蚀性消毒剂擦拭，定期拆卸可移动部件深度清洁04温湿度监控持续监控并记录，培养箱温度波动应在设定值

±1℃

范围内05校准记录存档纳入实验室质量管理体系文件，确保全程可追溯室间质评与持续改进机制外部考核内部改进室间质评是检验实验室真实水平的试金石外部驱动未知标本常规处理纳入常规工作，不得"特殊对待"，真实反映实验室水平满意结果提示实验室的人员、试剂、培养基、设备状态良好内部闭环01季度审核每季度至少一次，评估质控措施有效性，形成审核报告02偏差纠正分析原因并采取纠正措施，对可疑结果进行重复检验确认03持续提升定期学习不常见微生物性状，重温并改进质量保证计划，实现持续提升方法体系从传统到分子，方法学迭代驱动精准诊断培养鉴定、多重PCR、mNGS与药敏试验标准化07传统培养与生化鉴定体系传统方法仍是微生物检验的基石——从培养基选择到自动化鉴定的完整技术链条核心技术选择性培养基分离血琼脂分离革兰阳性菌，麦康凯琼脂筛选革兰阴性杆菌，结合需氧/厌氧/CO₂环境优化培养条件表型特征鉴定糖发酵试验、氧化酶试验、触酶试验等生化反应进行种属鉴定自动化系统提速VITEK2

系统整合多孔生化反应卡，缩短鉴定时间并提高标准化程度特殊场景覆盖苛养菌兼顾脑脊液培养采用巧克力培养基+CO₂环境，覆盖脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等靶向分离粪便培养选用麦康凯平板、SS平板，针对性分离沙门菌与志贺菌快速分子检测技术进展分子检测正在重塑微生物检验的速度与深度多重PCR同步检测多种病原体核酸，报告周期从数天缩短至数小时呼吸道病毒肠道致病菌实时荧光定量PCRTaqMan探针或SYBRGreen染料实现病原体核酸精确定量病毒载量监测治疗评估mNGS宏基因组测序高通量测序临床样本全部核酸，无需预设检测目标罕见病原体不明原因感染耐药基因检测靶向扩增mecA、KPC、NDM等关键耐药基因，预测耐药表型耐药机制确认流行病学追踪分子检测快速、灵敏度高，但需与传统培养方法互补使用，不能完全替代药敏试验方法与标准体系方法选择需结合临床需求与实验室条件纸片扩散法测量抑菌圈直径判断敏感性适用：需氧菌和兼性厌氧菌快速筛查严格遵循CLSI标准操作流程自动化仪器法VITEK、Phoenix等系统高通量检测数据库自动判读结果需定期校准维护微量肉汤稀释法定量测定最低抑菌浓度（MIC）适用：苛养菌、厌氧菌及特殊耐药机制精准定量，方法学参考药敏试验质控须使用ATCC标准菌株同步操作，确保结果可靠性；分子检测（如mecA、blaKPC耐药基因鉴定）需与表型药敏试验联合判读SIR判读标准与临床决策药敏报告不是数字，是临床决策的导航图S（敏感）——首选常规剂量下感染部位可达到有效抑菌浓度，临床应首选敏感药物治疗I（中介）——审慎MIC值或抑菌圈处于中介范围，治疗反应率低于敏感株；在药物浓缩部位或患者免疫功能较强时可能有效R（耐药）——避免常规剂量下感染部位不能达到有效抑菌浓度，临床应避免使用沟通协作微生物实验室与临床科室应保持密切沟通，及时反馈耐药监测趋势，指导经验性治疗方案调整药敏结果需结合感染部位药物浓度、患者肝肾功能、药物相互作用等临床因素综合判断配套进展标准体系持续完善，引领检验高质量发展配套标准与行业最新进展梳理配套标准与行业最新进展梳理08WS/T640与WS/T489配套解读WS/T640-2018《临床微生物学检验样本的采集和转运》标准名称原国家卫计委发布发布时间涵盖采集容器选择、标识要求、保存条件与转运时限核心内容WS/T805分析前部分的细化补充定位价值WS/T489-2024《尿液标本临床微生物实验室检验操作指南》标准名称2024年5月正式发布发布时间更新检测标准操作程序，完善检测及报告流程核心内容明确及时采集合